蛹蟲草小分子肽對百草枯致人胚肺成纖維細胞MRC-5過氧化損傷的保護作用

逄 利 王少坤 凡文博 張 楠 侯 玥 徐大海 吳 揚

(吉林大學第一醫院急診科，吉林 長春 130021)

百草枯中毒與氧自由基損傷、過度炎癥反應、鈣超載、酶失衡、細胞凋亡、DNA損傷及基因表達異常等有關〔1〕。蛹蟲草小分子肽有抗腫瘤、增強免疫力、抗氧化損傷等特點。本文旨在觀察蛹蟲草小分子肽對百草枯所致人胚肺成纖維細胞MRC-5過氧化的保護作用。

1 資料與方法

1.1實驗材料及主要試劑 胎牛血清，人胚肺成纖維細胞MRC-5，DMEM培養基，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒。

1.2蟲草小分子肽的提取 將購買的蛹蟲草制成小分子肽，采用高效凝膠過濾色譜法(HPGFC)測定，小分子肽峰值分子量為300～700 D。

1.3MRC-5細胞的培養及分組 MRC-5細胞用0.25%胰酶消化后傳代，計數后以106個/ml的密度懸浮于DMEM培養基中，置于37℃、5%CO2條件下培養，連續培養4代后進行實驗。將細胞隨機分為5組：①對照組：MRC-5細胞常規培養；②模型組：加入終濃度為1 mmol/L的百草枯；③實驗組1：加入終濃度為1 mmol/L的百草枯+5 mg/ml的蛹蟲草小分子肽；④實驗組2：加入終濃度為1 mmol/L的百草枯+10 mg/ml的蛹蟲草小分子肽；⑤實驗組3：加入終濃度為1 mmol/L的百草枯+20 mg/ml的蛹蟲草小分子肽。

1.4MTT法測細胞存活率 細胞存活率用MTT 法測定〔2〕。

1.5檢測方法 采用氯化硝基氮藍四唑光還原法(NBT法)測定SOD活性，按照試劑盒說明操作，在560 nm處測定OD值。GSH-Px用DTNB顯色法測定〔3〕。MDA含量用硫代巴比妥酸(TBARS)方法測定〔4〕。

2 結 果

2.1蛹蟲草小分子肽對MRC-5存活率的作用 與對照組〔(46.13±7.56)%〕相比，百草枯可顯著誘導MRC-5細胞的損傷，模型組細胞存活率僅為(17.06±3.43)%。隨著蛹蟲草小分子肽濃度增加，細胞的存活率也逐漸增加。較低濃度(5 mg/ml)的蛹蟲草小分子肽〔(21.23±5.53)%〕與模型組相比沒有明顯的差別，而較高濃度(10、20 mg/ml)的蛹蟲草小分子肽組對百草枯造成的損傷有顯著地阻礙作用，細胞存活率分別為〔(26.78±5.69)%、(31.82±6.78)%〕(P<0.05)。

2.2蛹蟲草小分子肽對MRC-5抗氧化酶系活性的影響 模型組SOD和GSH-Px的活性均明顯低于對照組(P<0.05)。與模型組相比，SOD、GSH-Px的活性隨蛹蟲草小分子肽濃度的升高也相應提高，并存在明顯的量效關系(P<0.05)。見表1。

2.3蛹蟲草小分子肽對MRC-5細胞MDA含量的影響 隨著蛹蟲草小分子肽濃度增加，MDA含量逐漸下降。與模型組相比，中等濃度(10 mg/ml)和高濃度(20 mg/ml)蛹蟲草小分子肽可使MDA顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1 各組SOD、GSH-Px活性及MDA含量測定±s)

3 討 論

本研究結果顯示，蛹蟲草小分子肽可保護細胞，能抑制百草枯誘導的細胞凋亡，并且其作用呈量效遞增關系。

藥效學實驗證實蛹蟲草對實驗動物的多項免疫指標均有明顯增強作用，可促進淋巴細胞轉化，提高機體的細胞免疫功能；消除機體內超氧自由基；保護細胞膜穩定性及通透性；明顯提高NK細胞的活性。蟲草小分子肽為蛹蟲草經過酶解工藝直接制得的蛹蟲草水解物，主要作用包括減輕溶酶體損傷、穩定溶酶體；下調炎癥基因和凋亡基因的表達；維持SOD，減少脂質過氧化產物MDA產生以及氧自由基所致的細胞損傷〔5，6〕。

總之，蛹蟲草小分子肽可顯著提高MRC-5細胞中SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量，對百草枯誘導的MRC-5過氧化損傷具有明顯的保護作用。

4 參考文獻

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