肺鱗癌術后組織中B7-H4、泛素特異性蛋白酶10和p53的表達及關系

王再紅

(秦皇島市海港醫院呼吸內科，山東 秦皇島 066000)

肺鱗癌以中央型肺癌最多見。病變起源于支氣管黏膜柱狀上皮鱗化的上皮細胞。腫瘤的侵襲作用明顯，在此過程中，多種基因和蛋白均有明顯的促進作用〔1〕。B7-H4是共刺激分子B7家族中的新成員〔2〕，在正常上皮中不表達或低表達，在多種腫瘤的表達上調，介導腫瘤的發生及發展〔3，4〕。泛素特異性蛋白酶(USP)10是一種泛素特異性蛋白酶，可以調控p53的功能，同時可以逆轉MDM2誘導的p53轉運和降解過程〔5〕。本文關注肺鱗癌術后組織中B7-H4、USP10和p53的表達，關注其相關性。

1 材料和方法

1.1一般資料 2011年1月至2013年12月我院確診為肺鱗癌，并行根治手術的患者117例作為觀察組，均符合WHO診斷標準。男70例，女47例；年齡51～85(平均66.5)歲。高分化67例，中分化33例，低分化17例。選取支氣管黏膜上皮鱗化組織共46例作為對照組，男30例，女16例；年齡52～80歲，平均69.7歲，兩組一般臨床資料無明顯差別，具有可比性。

1.2B7-H4、USP10和p53蛋白表達的檢測 B7-H4、USP10和p53蛋白的濃縮液均購自武漢博士德生物工程有限公司，按不同比例進行稀釋后行預實驗，選取表達最理想的濃度用于正式實驗。正式檢測均應用免疫組化二步法。操作均由同一主管技師進行，嚴格按實驗步驟進行操作，嚴格質量控制。

1.3B7-H4、USP10和p53蛋白檢測結果的判定方法 B7-H4以細胞質和(或)細胞膜內出現黃色顆粒為陽性反應細胞，USP10以細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性反應細胞，p53以細胞核中出現棕黃色顆粒為陽性反應細胞。每張切片選擇5個400倍的高倍視野，取其平均值作為樣本最終的陽性表達率，以陽性細胞≥5％定為陽性，以陽性細胞<5％定為陰性。

1.4統計學方法 采用SAS6.12軟件進行χ2檢驗、線性相關分析。

2 結 果

2.1兩組B7-H4、USP10和p53蛋白表達陽性率的比較 觀察組B7-H4和p53表達的陽性率明顯高于對照組，USP10表達陽性率明顯低于對照組(P<0.000 1)。見表1。

2.2B7-H4、USP10和p53在觀察組不同臨床特征中的表達比較 觀察組B7-H4、USP10和p53表達與腫瘤最大徑、分化程度、脈管浸潤和是否伴有壞死密切相關。見表2。

表1 兩組B7-H4、USP10和p53蛋白表達陽性率的比較〔n(％)〕

2.3觀察組B7-H4、USP10和p53的相關性 觀察組B7-H4和p53的表達正相關(r=0.47，P=0.025 4)，USP10和p53負相關(r=-0.49，P=0.019 8)。

表2 B7-H4、USP10和p53在觀察組不同臨床特征中的表達比較〔n(％)〕

3 討 論

肺鱗癌是肺組織發生的非小細胞肺癌中最常見的類型，占男性的44％和女性的25％，吸煙是重要的決定性危險因素。患者常表現為進行性氣短、咳嗽、胸痛、壓迫感、咯血等〔6〕。近來學者關注在鱗癌病變進展中多種基因和蛋白的調控作用〔7〕。B7-H4是近年來關注的重要蛋白之一，其能抑制CD4和CD8陽性的T細胞活化，減少機體IL-2和IL-4的分泌，阻斷細胞周期，使其停留在G0/G1期。從而負向調控T細胞介導的免疫性功能〔8，9〕。也有研究顯示B7-H4是一種保守的抗原，由282個氨基酸組成，在胞外區存在一個Ig樣的結構域，但是缺乏明顯的跨膜區〔10，11〕，此種結構使其易于腫瘤基因結合，促進腫瘤的進展。USP家族可以與轉錄復合物SAGA的亞單位結合，促進SAGA乙酰化染色體上的組蛋白H2A表達，同時激活基因的轉錄，使細胞向G1/S的過渡，引發腫瘤的進展〔12，13〕。USP10作為USP家族中的重要成員，可以引起p53的穩定表達，此時p53可以引起USP10由胞質向胞核移位〔14〕。USP10的此種功能受ATM介導的磷酸化調控，當細胞質中的USP10進入細胞核，其構型和成分發生變化，也使細胞丟失了USP10的基本功能，這是細胞惡變的潛在危險因素〔15〕。p53分為野生型和突變型，野生型在實驗中極難檢測到，因此p53常表達突變型〔16，17〕。本實驗檢測的亦為突變型。有學者認為p53是細胞凋亡的調控因子〔18〕，在多種腫瘤中高表達，不僅引發腫瘤細胞的增殖，還可以促進腫瘤的進展〔19〕。

本研究提示B7-H4和p53高表達、USP10低表達能促進腫瘤的發生。B7-H4、USP10和p53三種蛋白異常表達引起腫瘤的快速生長，加速腫瘤的進展，提高腫瘤的臨床分期。B7-H4、USP10和p53參與腫瘤的分化過程，也提示三種蛋白是腫瘤內在分化過程中的重要調節蛋白。三種蛋白參與腫瘤的播散過程，這種過程直接引起腫瘤的進展，形成遠隔器官的轉移灶。由于三種蛋白與腫瘤的壞死相關，提示B7-H4、USP10和p53的異常表達可以引起腫瘤性的壞死，也使腫瘤的惡性程度增加。腫瘤性的壞死是徹底的，因此形成壞死組織不能恢復，加劇病變的進展及器官功能的喪失。B7-H4、USP10均與p53具有協同作用，也提示B7-H4、USP10的作用一定程度上是通過影響p53實現的。B7-H4、USP10在腫瘤進展中還參與多種生物學過程，如多肽與蛋白質激素的合成與分泌、膜受體的成熟過程及血漿蛋白前體的激活等〔20〕。近來學者認為USP10可以調節細胞的惡性轉化及過程，同時加速腫瘤細胞的侵襲和播散〔21〕，B7-H4、USP10在作用過程中均與增殖相關，由于p53是增殖有關的直接蛋白，因此其協同作用更明顯，作用通路更直接〔22〕。

總之，肺鱗癌術后組織中B7-H4、USP10和p53均異常表達，三者對腫瘤的進展有明顯的促進作用。B7-H4、USP10均可能通過對p53的調節發揮作用。

4 參考文獻

1王 鵬.血清可溶性分子B7-H4檢測在非小細胞肺癌中的應用〔J〕.檢驗醫學，2013；28(12):1140.

2張 羽，陳曾燕.B7-H4在上皮性卵巢癌中的表達及意義〔J〕.臨床腫瘤學雜志，2013；18(12):1104-5.

3洪 波，錢 韻，姚航平.B7-H4在胰腺癌聽取表達及其臨床意義〔J〕.浙江大學學報(醫學版)，2013；42(5):511-4.

4鄭文鳳，李穎霞，陳奎生，等.USP22、MTA1及Ki67蛋白在食管鱗癌中的表達及相關性〔J〕.世界華人消化雜志，2013；21(28):2915-21.

5Liu J，Xia H，Kim M，etal.Beclin1 controls the levels of p53 by regulating the deubiquitination activity of USP10 and USP13〔J〕.Cell，2011；147(1):223-34.

6Kim Y，Hammerman PS，Kim J，etal.Integrative and comparative genomic analysis of lung squamous cell carcinomas in East Asian patients〔J〕.J Clin Oncol，2014；32(2):121-8.

7Choy B，Findeis-Hosey JJ，Li F，etal.High frequency of coexpression of maspin with p63 and p53 in squamous cell carcinoma but not in adenocarcinoma of the lung〔J〕.Int J Clin Exp Pathol，2013；6(11):2542-7.

8劉維輝，李永生，朱紹興，等.B7-H4在膀胱尿路上皮癌組織和血清中的表達及臨床意義〔J〕.現代泌尿生殖腫瘤雜志，2012；4(5):297-8.

9姜孝新，伍小平，蔣 艷.肺癌患者血清可溶性B7-H4分子的檢測及其臨床意義〔J〕.武漢大學學報(醫學版)，2012；33(1):81-3.

10劉思海，馮 雯，郝 岷，等.肺癌CT征象與病理及血清可溶性B7-H4檢測臨床意義〔J〕.中華消化病與影像雜志，2013；3(5):223-4.

11秦旭東，丁 偉，姚祖仁，等.B7-H4分子在非小細胞肺癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.陜西醫學雜志，2010；39(1):19-20.

12楊 瑛，侯建青，曲路云，等.卵巢癌及癌旁正常卵巢組織中USP2、USP14和UBE4A的差異表達〔J〕.細胞與分子免疫學雜志，2007；23(6):504-5.

13賈瑩瑩，王 進，楊麗敏.USP22和Nanog在結腸癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.世界華人消化雜志，2013；21(8):719-23.

14Draker R，Sarcinella E，Cheung P.USP10 deubiquitylates the histone variant H2A.Z and both are required for androgen receptor-mediated gene activation〔J〕.Nucleic Acids Res，2011；39(9):3529-42.

15Bomberger JM，Barnaby RL，Stanton BA.The deubiquitinating enzyme USP10 regulates the endocytic recycling of CFTR in airway epithelial cells〔J〕.Channels (Austin)，2010；4(3):150-4.

16Dabir S，Kluge A，McColl K，etal.PIAS3 activates the intrinsic apoptotic pathway in non-small cell lung cancer cells independent of p53 status〔J〕.Int J Cancer，2014；134(5):1045-54.

17Christopher L，Brook S，Wei G.p53 Regulation by Ubiquitin〔J〕.FEBS Lett，2011；585(18):2803-9.

18Sujata C，Vamsi K,Kolukula A，etal.Dissecting the pathways that destabilize mutant p53: the proteasome or autophagy〔J〕.Cell Cycle，2013；12(7):1022-9.

19Chen S，Wang D，Liu Y.RAD6 regulates the dosage of p53 by a combination of transcriptional and posttranscriptional mechanisms〔J〕.Mol Cell Biol，2012；32(2):576-87.

20Yuan J，Luo K，Zhang L，etal.USP10 regulates p53 localization and stability by deubiquitinating p53〔J〕.Cell,2010；140(3):384-96.

21Bomberger JM，Barnaby RL，Stanton BA.The deubiquitinating enzyme USP10 regulates the post-endocytic sorting of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in airway epithelial cells〔J〕.J Biol Chem，2009；284(28):18778-89.

22Wu X，Li K，Yerle M，etal.Chromosomal assignments of the porcine COPS2，COPS4，COPS5，COPS6，USP6 and USP10 genes involved in the ubiquitin-proteasome system〔J〕.Anim Genet，2007；38(6):665-6.