直腸癌術后組織中KLF-4、KLF-6和caveolin-1的表達及意義

楊培雄 李琳業 吳占慶 才保加 周 偉

(青海大學附屬醫院創傷急救中心外科,青海 西寧 810000)

直腸癌常見于中老年人，尤其見于伴有腸道息肉綜合征的患者。本病是由直腸黏膜上皮來源的惡性腫瘤，具有明顯肌層浸潤性生長的特征。直腸癌以腺癌為主，機體蛋白表達的失常是重要誘發因素〔1〕。KLF-4、KLF-6是機體中存在的一種多功能轉錄因子，正常時高表達于上皮細胞，可以抑制腫瘤性增殖和黏附改變〔2，3〕。窖結構是一種細胞質膜向內凹陷形成的小窩結構，呈現出囊狀結構的脂筏，窖蛋白(Caveolin)-1是此種結構的標志性蛋白，不僅表現在許多正常的生理現象中，還對信號轉導、血管生成和腫瘤的進程有重要促進作用〔4，5〕。本文關注直腸癌術后組織中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1的表達特征及相關性。

1 材料與方法

1.1一般資料 2010年1月至2013年12月我院直腸腺癌行根治手術的患者110例作為觀察組，均符合WHO中的診斷標準，并經病理科醫師確診，男60例，女50例；年齡54～79歲，平均(66.4±5.3)歲。50例直腸黏膜上皮內瘤變的組織作為對照組，年齡53～76歲，平均(66.1±5.5)歲；男26例，女24例。50例正常的直腸黏膜組織作為正常對照組，年齡50～70歲，平均(59.9±5.9)歲；男27例，女23例。3組一般臨床資料無明顯差別，具有可比性。

1.2KLF-4、KLF-6和Caveolin-1蛋白的檢測方法 KLF-4、KLF-6和Caveolin-1蛋白均為濃縮液，購自武漢博士德生物工程公司。抗體均進行預實驗，選擇最理想的配比濃度進行正式實驗。KLF-4、KLF-6和Caveolin-1蛋白的正式實驗應用免疫組化SP法，DAB染色，嚴格按說明書操作，嚴格質量控制，努力減少人為誤差。

1.3KLF-4、KLF-6和Caveolin-1結果的判定方法 KLF-4和KLF-6均以細胞核中顯現棕黃色顆粒為陽性細胞，Caveolin-1以細胞質和(或)膜中顯現棕黃色顆粒為陽性細胞，每張切片計數10個高倍(400倍)視野，計數陽性細胞的百分率，取其平均值。KLF-4、KLF-6和Caveolin-1均以陽性率≥5％計為陽性，以陽性率<5％計為陰性。

1.4統計學方法 應用SAS6.12軟件進行χ2檢驗和線性相關分析。

2 結 果

2.13組KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達的比較 3組KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達陽性率差異顯著(P<0.000 1)。見表1。

表1 3組KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達的比較〔n(％)〕

2.2觀察組不同臨床特征中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達陽性率的比較 觀察組KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達的陽性率均與腫瘤的最大徑線、TNM分期、脈管浸潤和腸周淋巴結檢出數量密切相關。見表2。

表2 觀察組不同臨床特征中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達陽性率的比較〔n(％)〕

2.3觀察組中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達相關性 觀察組中KLF-4與KLF-6(r=0.45，P=0.0420)的表達呈正相關。其他指標間未見明顯相關性(P>0.05)。

3 討 論

直腸癌特點是向下浸潤性生長，大部分腫瘤形成腺樣結構，腺腔內常包含細胞碎屑。腫瘤進展時常沿管壁延伸，侵過肌層到直腸旁組織，并可以侵犯鄰近結構。在腫瘤性病變進展中，機體癌相關基因異常表達，使正常的平衡失調，加速病變進展〔6〕。KLF家族是真核生物中廣泛存在的一類基因和蛋白，廣泛參與細胞的增殖和分化過程。KLF-4和KLF-6是家族中的重要蛋白，二者在細胞生長分化過程中的作用常一致，并被認為腫瘤的抑制基因〔7，8〕。Chen等〔9〕認為KLF-4高表達可以抑制細胞周期中G1向S期轉變，進而抑制細胞增殖，發揮抑癌基因的作用。也有研究認為KLF-4和KLF-6 高表達可以抑制細胞DNA的合成及細胞繁殖〔10，11〕。也有觀點認為KLF4和KLF-6通過調節下游相關靶基因轉錄過程，使二者參與細胞的周期調控、增生分化與程序性死亡〔12，13〕。也有觀點認為KLF-6可以作用于缺乏TATA盒的核心啟動元件，通過參與細胞分化、發育、生長信號的轉導、細胞增殖和凋亡過程發揮作用〔14〕。近來也有學者發現KLF-6可以有效調節P21WAFI/CIP1的活化，進而有效抑制腫瘤細胞的增殖過程，抑制細胞周期素D1的活性，有效抑制細胞周期的進展，調節增殖全過程〔15〕。Caveolin-1是1953年發現的，曾被命名為質膜囊泡，富含膽固醇和鞘磷脂，在多種細胞中高表達，尤其是內皮細胞、成纖維細胞、脂肪細胞等細胞中含量豐富〔16〕。Caveolin-1可以對多種關鍵信號分子的活性狀態起直接調節作用〔17〕。

本實驗結果提示KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達的丟失或下降使直腸黏膜形成惡性轉變。此時細胞異型程度增加，細胞增殖活躍，腫瘤體積增大，侵襲能力增強。KLF-4、KLF-6和Caveolin-1三種蛋白參與腫瘤的生長及浸潤過程，KLF-4、KLF-6和Caveolin-1的抑癌作用丟失后，癌基因相對激活，從而引起細胞增殖分化失控、凋亡障礙以及血管生成通路異常，加速腫瘤的進展。近年評估直腸腺癌的高危因素除了分化程度低、血管淋巴侵犯及淋巴結轉移外〔18〕，多項研究在關注腸周淋巴結的檢出數量，并認為腸周淋巴結檢出數量小于12個的患者，無論是否伴有轉移，均提示亦為高危因素或預后不良〔19，20〕。而對于淋巴結檢出數量>12個的病例，顯示出明顯的反應性增生的特征，是機體免疫力增加和抗腫瘤能力的表現。本實驗提示KLF-4、KLF-6和Caveolin-1，三種蛋白可能與腸周的淋巴結反應具有一定關聯性，也提示腸周淋巴結檢出<12個的患者KLF-4、KLF-6和Caveolin-1的表達下降，因此正常情況下KLF-4、KLF-6和Caveolin-1在發揮抑癌作用的過程中，可能對腸周淋巴結的轉移起到一定抑制的作用，即三者可能具有多元性的作用特征。KLF-4和KLF-6具有協同正向作用。近年也有學者認為Caveolin-1對腫瘤血管生成有影響，因此Caveolin-1作用也可能與腫瘤細胞的失控性增殖和血管生成有關〔21〕，但是其作用過程需待證實。

4 參考文獻

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