G蛋白耦聯受體、CD44v6和E-cadherin在卵巢黏液性腺癌中的表達及意義

欒 磊

(齊齊哈爾醫學院第一附屬醫院婦產科，黑龍江 齊齊哈爾 161000)

卵巢黏液性腺癌是由部分或全部含細胞內黏液的瘤細胞構成的腫瘤，病變進展中多種蛋白異常表達。富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯受體(LGR)5作為WNT信號通路的靶基因和腫瘤干細胞標記物，與多種腫瘤的生物學進展密切相關〔1，2〕。白細胞分化抗原(CD)44v6是一種跨膜糖蛋白，參與多種細胞生長、生存、分化的過程，在細胞惡變過程中參與黏附、移動和轉移的過程〔3，4〕。上皮型黏附素(E-cadherin)是經典的黏附蛋白，在正常上皮中高表達，對維持上皮的結構和功能有重要作用，當其表達丟失后，可以引起上皮細胞的松解，使細胞易于遷移〔5，6〕。本研究針對卵巢黏液性腺癌術后組織中LGR5、CD44v6和E-cadherin的表達進行檢測，關注其相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 我院近3年行卵巢黏液性腺癌根治術后的蠟塊組織及臨床資料114例作為觀察組，均符合WHO中相關的標準，并經病理學醫師再次HE切片后確定。年齡50～78(平均66.3)歲。我院同期行卵巢交界性黏液性囊腺瘤術后的組織蠟塊70例作為對照組，年齡51～77(平均65.4)歲。我院同期行卵巢黏液性囊腺瘤術后的組織蠟塊70例作為正常對照組，年齡52～70(平均64.3)歲。3組一般資料無明顯差別。

1.2LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白的檢測 LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白的檢測應用免疫組化SABC法。三種抗體的濃縮液均購自武漢博士德生物工程公司，依據不同比例進行稀釋后進行預實驗，選擇最理想的配比濃度進行正式實驗，應用DAB染色，操作均按說明書進行，嚴格質控，減少誤差。

1.3LGR5、CD44v6和E-cadherin結果的判斷方法 LGR5以細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性細胞，CD44v6以細胞質和(或)細胞膜中出現棕黃色為陽性細胞，E-cadherin以細胞膜中出現棕黃色顆粒為陽性細胞。計數5個400倍視野，以陽性細胞≥5％定為陽性，以陽性細胞<5％定為陰性。

1.4統計學方法 采用SAS6.12軟件進行χ2檢驗、線性相關分析。

2 結 果

2.1觀察組不同臨床特征患者LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白表達陽性率的比較 觀察組LGR5、CD44v6和E-cadherin的表達與腫瘤的最大徑、脈管浸潤、TNM分期、腹水中是否有癌細胞密切相關。見表1。

表2 觀察組不同臨床特征患者LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白表達陽性率的比較〔n(％)〕

2.2LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白在三組中表達陽性率的比較 LGR5、CD44v6和E-cadherin在三組中表達陽性率的差別均顯著(P<0.000 1)。見表2。

2.3觀察組LGR5、CD44v6和E-cadherin表達的相關性分析 觀察組LGR5和E-cadherin(r=-0.47，P=0.037 1)、CD44v6和E-cadherin(r=-0.49，P=0.0251)表達均呈負相關。

表2 LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白在三組中表達陽性率的比較〔n(％)〕

3 討 論

卵巢黏液性腺癌多見于中老年人，腫瘤細胞與宮頸內膜、胃幽門部或小腸上皮相似，部分腫瘤中有散在的杯狀細胞分布。病變發展時常伴有出血、壞死。多種研究認為卵巢黏液性囊腺癌在進展時有明顯的間質侵襲。病理學者認為腫瘤的異質性明顯，不僅反映腫瘤從良性到惡性的發展過程，還由于多種相關基因和蛋白的調節失常，加速了腫瘤性病變的進展〔7〕。LGR5又名GPR49、HG38、FEX、GPR67，是由18個富含亮氨酸的重復單位和7個跨膜區域組成的大分子蛋白，其也是LGR的重要成員之一〔8〕。在WNT經典信號途徑的研究中，LGR5作為WNT信號通路中B聯蛋白TCF4的靶向基因，可以高效調控腫瘤細胞的增殖和分化過程〔9〕。有研究顯示LGR5陽性的細胞具有分化成為所有的上皮系細胞的潛能，也證實了其為小腸和結腸干細胞的特異性分子標記蛋白〔10，11〕。CD44是一種廣泛分布的跨膜糖蛋白，其亞型CD44v6含有變異型拼接外顯子，即在細胞膜外靠近細胞區插入了43個由v6變異拼接型外顯子所編碼的不同序列氨基酸〔12，13〕。CD44v6作用機制可能是表達CD44v6的腫瘤細胞與遠離的淋巴管和血管內相應配體結合，使轉移該處的腫瘤細胞的穩定性增加〔14〕。E-cadherin作為機體調節黏附蛋白，廣泛分布在胚胎組織和成熟組織的上皮細胞中，E-cadherin可以調節胚胎組織的發育、組織的構成，同時對調節細胞間的信息傳遞有積極作用〔15，16〕。腫瘤進展時，E-cadherin常表達減少或丟失，引起上皮細胞松動，易于發生轉移。也有觀點認為E-cadherin作為經典的黏附蛋白，是腫瘤細胞浸潤轉移的抑制劑〔17〕，如果致癌因素引起E-cadherin表達失調，則細胞間連接松動，為腫瘤細胞脫離原發灶創造了重要條件，此時轉移潛能增加〔18〕。

本實驗提示LGR5、CD44v6和E-cadherin異常表達是腫瘤惡變的重要因素。LGR5作為WNT信號通路中的靶基因，當其異常表達時，引起LGR5對WNT進行負性調控，可以直接引起上皮細胞的增生和分化〔19〕。由于黏液性癌是上皮源性的，也起自原始干細胞，因此LGR5干細胞標記特征也證實腫瘤細胞的分化尚不夠成熟，分化程度低。本結果提示三種蛋白參與腫瘤的進展。由于脈管浸潤、TNM分期及腹水中有無癌細胞是判斷腫瘤生物學行為及預后的重要指標，因此LGR5、CD44v6和E-cadherin的聯合檢測可能在一定程度上預示著腫瘤的預后。腹水中有癌細胞提示腫瘤處于進展狀態，其與腫瘤浸潤和播散有密切關系。LGR5和E-cadherin、CD44v6和E-cadherin的表達均呈負相關性，提示三者具有協同作用，也提示LGR5和CD44v6高表達后，在一定程度上可以下調E-cadherin的表達，使腫瘤處于進展狀態，尤其是使癌細胞易于脫落，誘發轉移的發生。但是關于CD44v6的作用機制可能更趨多元性，有研究認為CD44v6可以促進腫瘤MMP-2和MMP-9的表達，使腫瘤轉移的屏障消失〔20〕，此時在E-cadherin下調引起細胞松動后，使脫落的細胞易于離開原發灶，出現轉移。

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