五味子多糖對腦膠質瘤SHG-44細胞血管內皮生長因子表達水平的影響

溫 娜 唐澤波 金 宏 張 宇 劉興吉 齊 玲 于洪泉

(吉林醫藥學院基礎醫學院，吉林 吉林 132013)

腦膠質瘤是中樞神經系統最常見的原發性腫瘤，惡性程度高，約占顱內腫瘤的45％〔1〕。血管內皮生長因子(VEGF)是調節腫瘤微血管生成的重要因子之一〔2〕。五味子多糖具有抗腫瘤活性〔3～5〕，但其具體的抗腫瘤作用機制尚不清楚。本課題組前期研究發現五味子多糖可以抑制腦膠質瘤細胞的生長〔6〕。本文將進一步研究五味子多糖對體外培養腦膠質瘤細胞株(SHG-44)細胞VEGF表達的影響，旨在探討五味子多糖抑制腦腫瘤細胞生長的機制。

1 材料與方法

1.1細胞和主要試劑 SHG-44細胞(吉林大學第一醫院神經外科于洪泉主治醫師提供)，細胞培養基RPMI-1640 (美國Hyclone公司)，0.25％胰蛋白酶、小牛血清(美國Gibco公司)，五味子多糖(北華大學提供)，VEGF兔抗人多克隆抗體(北京中杉公司)。

1.2SHG-44細胞的培養 從液氮中取出凍存的SHG-44細胞，迅速放入37℃水浴箱中搖動溶解，然后將細胞接種于培養瓶中，加入10 ml含10％小牛血清的RPMI-1640細胞培養液，將其置入37℃、5％CO2及飽和濕度培養箱中培養，隔日換液。

1.3酶聯免疫吸附法測定培養細胞上清中VEGF蛋白 將SHG-44細胞用0.25％胰酶消化，24孔培養板中接種細胞懸液，實驗分為空白對照組(不含藥物)和3個加藥組(五味子多糖濃度分別為1.25、2.5、5 mmol/L)，作用48 h，每組設5個復孔，加藥期間用含5％小牛血清的RPMI-1640培養基培養細胞。取細胞培養上清，將上清液與包被液按1∶1的比例加入96孔酶標板中(空白對照組為100％包被液)，4℃過夜。封閉后加入VEGF兔抗人多克隆抗體(1∶500稀釋)4℃過夜。加入二抗(1∶1 000稀釋)，室溫孵育2 h，二氨基聯苯胺(DAB)顯色液室溫避光3～5 min，當有顏色變化時加入終止液。酶聯免疫檢測儀492 nm處測定吸光度(A)值。用空白對照組(無細胞)調零。

1.4統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件進行分析，組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。

2 結 果

2.1五味子多糖作用后細胞分泌VEGF蛋白的變化 1.25、2.5、5 mmol/L濃度的五味子多糖作用SHG-44細胞48 h后，酶聯免疫吸附實驗檢測發現，SHG-44細胞分泌VEGF蛋白的水平不同，1.25和2.5 mmol/L濃度組SHG-44細胞分泌VEGF蛋白水平呈下降趨勢，但與對照組相比，無統計學意義(P>0.05)；而5 mmol/L濃度組SHG-44細胞分泌VEGF蛋白水平明顯降低，與對照組相比有統計學意義(P<0.05)。見圖1。

圖1 五味子多糖作用后SHG-44細胞分泌VEGF蛋白的變化

3 討 論

腦膠質瘤是最常見的顱內惡性腫瘤，發病率和死亡率都很高，病程難以控制，目前治療方案仍然是手術切除輔以放療和化療等綜合治療為主。腫瘤生長、轉移、復發所需的氧氣和營養物質必須從腫瘤的新生血管中來獲得，如果腫瘤在生成過程中沒有新的血管生成，那么，即使是超過1 mm3體積大小的實體瘤也會因從血管中得不到賴以生存的氧氣和營養而發生休眠、壞死或凋亡〔7，8〕。這些都充分說明了腫瘤的生長和轉移在很大程度上依賴于腫瘤中新生血管的形成，新生血管的形成是腫瘤生長的必要條件〔9〕。所以，腫瘤中新生血管的形成是腫瘤快速生長的物質基礎。對于腫瘤而言，抑制腫瘤細胞增殖是抗腫瘤治療的一個重要環節〔10〕。抑制新生血管的生成無疑是一種簡單而有效的治療策略。

VEGF廣泛分布于人和動物大腦、腎臟、肝臟、脾臟、胰腺和骨骼等組織中，正常成人體內維持在一個較低水平。只有在生理需要或病理的情況下，如胚胎形成、骨骼生長及腫瘤形成的過程中出現VEGF過度表達，促使血管生成急劇增加〔11〕。五味子抗腫瘤作用主要集中在木脂素和多糖部位〔12〕，其中，五味子多糖是其抗腫瘤的主要成分之一，藥理學研究發現，五味子具有包括抗腫瘤作用在內的多種活性作用〔3～5〕。

本研究結果與本課題組前期研究發現五味子多糖可以抑制腦膠質瘤細胞生長的結果一致〔6〕。說明五味子多糖可能是通過抑制腫瘤細胞分泌VEGF表達，從而發揮其抗腫瘤作用。

4 參考文獻

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