胃癌中ERCC1、EGFR的表達與預后的關系

陳玉芳 周林艷 萬美珍

近年來研究發現DNA損傷修復基因與非小細胞肺癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌等多種腫瘤的發生、化療反應性及預后有關[1]。核苷酸切除修復交叉互補組1(excision repair cross-complementing group 1,ERCC1)是DNA修復系統中重要的修復因子[2]。而表皮生長因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)通過信號轉導控制腫瘤的生長，并與新生血管生成、腫瘤生長侵襲及腫瘤的靶向治療有密切關系[3]。本研究采用免疫組化方法檢測了ERCC1、EGFR在胃癌中的表達，并分析它們在胃癌發生發展中及在預后評估中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2005年-2010年行根治性手術，且術后病理證實為胃癌的52例標本。患者術前均未接受放化療等抗腫瘤治療。52例中男性35例，女性17例，年齡37～79歲，中位年齡62歲。病理診斷均為腺癌，其中高中分化15例，低分化37例。發生淋巴結轉移31例，未發生淋巴結轉移21例。同時選取癌旁正常組織作為對照。

1.2 ERCC1、EGFR的檢測及結果判定方法

標本均經10.0%甲醛固定，常規石蠟包埋，采用免疫組織化學SP法檢測ERCC1、EGFR蛋白。按SP試劑盒說明書進行操作。已知陽性片在同一條件下染色作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

結果判定：以腫瘤細胞核內或胞質內出現棕黃色顆粒為ERCC1蛋白表達陽性細胞。在高倍視野(400×)下，計數1 000個腫瘤細胞中陽性細胞數。參照Wachters等[4]的方法來分析ERCC1的表達水平。陰性表達：不表達或陽性細胞數≤10%；陽性表達：陽性細胞數>10%。EGFR蛋白著色定位于細胞質及細胞膜上，評分根據著色的細胞所占百分比和染色強度綜合評價，≤10%記為(-)；>10%淡黃色記為(+)，棕黃色記為(++)，棕褐色記為(+++)，將(-)和(+)記為陰性表達，將(++)和(+++)記為陽性表達。所有切片均采用雙盲法由2位病理科醫生觀察判斷。

1.3 統計學處理

采用SPSS13.0統計軟件進行數據分析處理，各組間率的比較采用卡方檢驗和Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ERCC1、EGFR在胃癌組織中的表達

胃癌組織中ERCC1陽性表達率分別為30.8%(16/52)，EGFR陽性表達率分別為26.9%(14/52)，癌旁組織中ERCC1陽性表達率為67.3%(35/52)，EGFR陽性表達率為0%。經統計學分析，癌組織與癌旁組織中ERCC1、EGFR的表達差異均有統計學意義。

2.2 癌組織中ERCC1、EGFR蛋白表達與腫瘤臨床病理特征的關系

胃癌中ERCC1的表達與患者性別、年齡、浸潤深度、腫瘤大小、淋巴結轉移無關，但與腫瘤分化程度有關，差異有統計學意義。EGFR的表達與患者性別、年齡、浸潤深度、腫瘤大小、腫瘤分化程度無關，與淋巴結轉移有關，差異有統計學意義(表1)。

2.3 胃癌組織中ERCC1與EGFR表達的相關性

胃癌組織中，ERCC1與EGFR的表達不具有相關性(P>0.05)。

表1 ERCC1、EGFR與胃癌臨床病理因素的關系(例，%)

3 討論

NER(核酸切除修復系統)是DNA最主要的修復機制，其功能異常在腫瘤的發病和鉑類制劑耐藥中發揮重要作用。ERCC1不僅是NER活性的標志性基因，也是細胞存活必須的DNA修復基因。近年來有研究發現：ERCC1的表達與胃癌預后及鉑類化療耐藥有關，其可以作為判斷預后的重要指標。Matsubara 等[5]認為ERCC1是進展期胃癌預后評估的有效指標。我們對52例術前未接受過任何抗腫瘤治療的胃癌患者的研究顯示ERCC1在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達有統計學差異。ERCC1在胃癌組織中的表達率較癌旁組織中明顯下降，這表明ERCC1低表達導致核酸切除修復能力下降，從而增加了胃癌發生的風險。因此檢測該基因的表達可以作為判斷腫瘤易感性的1個有價值的生物標志。這個結論與國內外文獻是一致的。但相對于國內部分文獻，本文ERCC1的表達率偏低，這可能與標本的處理、實驗方法的不同以及樣本量有關。Ozkan等[6]報道ERCC1的表達率為31.0%，與本文結果基本一致。目前關于ERCC1與胃癌臨床病理特征的關系文獻報道很少，且欠一致。有國內文獻[7]發現ERCC1在癌旁組織中的表達率高于癌組織，其與分化程度、淋巴結轉移及浸潤深度有相關性。本文研究顯示ERCC1與腫瘤的大小，有無淋巴結轉移，浸潤深度及患者的年齡、性別均無關，但與腫瘤的分化程度有關，分化程度越差，ERCC1表達的陽性率越低，表明ERCC1低表達相對分化程度差，提示隨著ERCC1表達降低，對細胞DNA損傷的修復能力減弱，可能引起惡性腫瘤具有更壞的惡性表型，表現為分化程度差，生長速度快，腫瘤預后不良。

EGFR是1個跨膜受體，與其配體結合后促進細胞分裂和增生。EGFR過度表達見于包括消化系統腫瘤在內的人類多種惡性腫瘤，并和腫瘤發生發展、增殖轉移及血管形成密切相關。Casanova 等[8]發現，在腫瘤的演進過程中，去除EGFR的作用會阻礙血管的進一步發展，且可增加腫瘤細胞的凋亡數。一般認為，正常胃黏膜組織EGFR不表達，癌變時可明顯升高。Kopp等[9]研究顯示胃癌中EGFR過表達是預后不良的獨立危險因素。本研究顯示胃癌中的EGFR陽性表達明顯高于癌旁胃組織，兩者表達存在顯著性差異，并說明EGFR過表達與細胞癌變有關，在腫瘤形成中起一定作用。本組研究只發現EGFR表達和淋巴結轉移呈正相關，說明EGFR表達陽性的胃癌更容易發生周圍淋巴結轉移，預后差，因此EGFR表達可作為胃癌預后的預測指標，而它與腫瘤的大小，浸潤深度，分化程度及患者的年齡、性別均無關。

關于ERCC1和EGFR表達是否具有相關性存在爭議，有作者在大腸癌研究中認為兩者不具有相關性。而國外作者發現在非小細胞肺癌中兩者表達具有相關性，EGFR突變常發生在ERCC1陰性表達的患者中[10]。本研究顯示EGFR陽性表達的癌組織常常表現為ERCC1的陰性表達，但可能樣本量的關系，兩者表達不具有相關性，下一步我們將加大樣本量，深入探討兩者之間的關系。

[1] Bartels CL,Lambert MW.Domains in the XPA protein important in its role as a processivity factor〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2007，356(1):219-225.

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[3] Tamás P,Solti Z,Bauer P，et al.Mechanism of epidermal growth factor regulation of Vav2,a guanine nucleotide exchange factor for Rac〔J〕.J Biol Chem，2003，278(7):5163-5171.

[4] Wachters FM,Wong LS,Timens W，et al.ERCC1,hRad51,and BRCA1 protein expression in relation to tumour response and survival of stage Ⅲ/Ⅳ NSCLC patients treated with chemotherapy〔J〕.Lung Cancer，2005，50(2):211-219.

[5] Matsubara J,Nishina T,Yamada Y，et al.Impacts of excision repair cross-complementing gene 1 (ERCC1),dihydropyrimidine dehydrogenase,and epidermal growth factor receptor on the outcomes of patients with advanced gastric cancer〔J〕.Br J Cancer，2008，98(4):832-839.

[6] Ozkan M,Akbudak IH,Deniz K，et al.Prognostic value of excision repair cross-complementing gene 1 expression for cisplatin-based chemotherapy in advanced gastric cancer〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2010，11(1):181-185.

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