消痤膠囊對兔耳痤瘡模型抗角化作用及血清睪酮、雌二醇含量的影響

張 麗，王 凡，尹小娥，朱 鐳，薛國娜，馬拴全

（1.陜西中醫學院附屬醫院，陜西咸陽 712000;2.陜西中醫學院2011級碩士研究生，陜西咸陽 712046）

消痤膠囊對兔耳痤瘡模型抗角化作用及血清睪酮、雌二醇含量的影響

張 麗1，王 凡1，尹小娥1，朱 鐳2，薛國娜2，馬拴全1

（1.陜西中醫學院附屬醫院，陜西咸陽 712000;2.陜西中醫學院2011級碩士研究生，陜西咸陽 712046）

目的 觀察消痤膠囊對兔耳痤瘡模型毛囊皮脂腺導管的抗角化作用及對血清睪酮（T）、雌二醇（E2）含量的影響。方法 將健康新西蘭白兔隨機分為消痤膠囊大、中、小劑量組、清熱暗瘡丸組、模型實驗組、正常對照組，采用Kligman法建立兔耳痤瘡模型，造模成功后分別灌飼消痤膠囊、清熱暗瘡丸和純凈水2周。通過肉眼和鏡下病檢觀察皮損的角化情況，采用電化學發光法測定血清T、E2含量。結果 消痤膠囊各劑量組和清熱暗瘡丸組均可不同程度的改善兔耳痤瘡模型毛囊皮脂腺導管的異常角化，對血清T的含量有降低作用、對血清E2含量有升高作用，并呈量效關系。結論 消痤膠囊可改善兔耳痤瘡模型毛囊皮脂腺導管的異常角化，調節體內激素水平，對兔耳實驗性痤瘡有較好的治療作用。

消痤膠囊;痤瘡;血清睪酮;雌二醇

消痤膠囊是我院馬拴全等老師經過多年的臨床 實踐研究而制成的院內制劑，具有清泄肺胃蘊熱，涼血解毒通便之功效，臨床用于尋常痤瘡的治療取得了較好的療效。本實驗根據痤瘡發病機制，觀察消痤膠囊對兔耳痤瘡模型的抗角化作用及對血清T、E2含量的影響，為臨床應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 試驗動物 健康新西蘭白兔36只，雄性，體質量2.0～2.5 kg，標準飼料喂養，由西安市灃渭新區實驗動物養殖場提供，動物合格證號2012-002。

1.1.2 藥物及試劑 消痤膠囊:陜西中醫學院附屬醫院制劑室提供;清熱暗瘡丸:吉林省天光藥業有限公司，批準文號:國藥準字Z22020488;煤焦油。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組與建立模型 雄性白兔36只，適應性喂養1周。采用隨機對照方法分為消痤膠囊大、中、小劑量組、清熱暗瘡丸組、模型實驗組、正常對照組，每組動物6只。除正常對照組外其余各組均按Kligman法［1］分別在其雙耳內側面耳管開口處約2 cm×2 cm范圍，涂煤焦油0.5 mL/次，1次/d，連續2周，建立痤瘡模型。

1.2.2 給藥方法 造模2周后，分別用相應藥物給以灌胃，給藥劑量參考徐叔云主編的《藥理實驗方法學》（第3版）［2］計算（兔的等效劑量相當于成人的3.27倍）。消痤膠囊大、中、小劑量分別按1.2，0.6，0.3 g/kg（相當于成人用藥量的4，2，1倍）灌飼消痤膠囊溶液，陽性對照藥清熱暗瘡丸組按0.1 g/kg（相當于成人用量的1倍）灌飼清熱暗瘡丸溶液，給藥容積為10 mL/kg，正常對照組、模型實驗組同法灌胃等容積的純凈水，1次/d，連續2周。

1.2.3 取材及觀察 造模及給藥過程中，肉眼觀察兔耳皮膚變化。末次給藥18 h后用注射器穿刺心臟取血5 mL，分離血清，保存標本，采用電化學發光法檢測血清T、E2含量。隨后給兔耳緣靜脈注射5 mL空氣處死，迅速于左右耳內側面耳管開口處同一位置切取皮損，以10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色，顯微鏡下觀察組織學改變。

1.2.4 實驗性痤瘡的病理組織學判定標準［3］（－）為漏斗部僅有松散的角化的細胞，無粉刺生成;（+）為漏斗部僅有少量的黏連在一起的角化細胞，漏斗部不擴張;（++）為毛囊中中等量的角質栓塞，伸入皮脂腺導管，伴隨皮脂腺導管的增生，漏斗擴張;（+++）為毛囊中緊密的角質栓塞引起毛囊重度擴張，皮脂腺導管上皮明顯增生，部分皮脂腺發生退行變。

1.2.5 統計學處理 實驗數據均采用SPSS 17.0軟件進行統計學分析，所有計量（定量）資料以均數±標準差（±s）表示，多組間均數的比較采用單因素方差分析，等級資料采用秩和檢驗，檢驗水平α=0.05。

2 結果

2.1 肉眼觀察 空白組兔耳朵柔軟、菲薄、透光度良好，其上可見清晰的毛細血管網，耳管開口處毛囊口排列整齊。其余各組涂抹煤焦油4～5 d后可見局部皮膚泛紅、水腫，毛孔增大，有丘疹樣物，觸之有溫熱感;7～8 d后水腫消退，兔耳內側面皮膚粗糙、增厚、變硬，透光度降低，毛囊口有黑色角栓，部分毛囊口隆起呈丘疹狀，肉眼很難分清個數，與人類的粉刺相似;14～15 d達到高峰。經灌胃治療14 d后，消痤膠囊各劑量組可見兔耳皮膚變薄變軟，隆起狀丘疹大部分消退，毛孔明顯縮小，毛囊角栓減少明顯，部分角栓脫落后遺留點狀凹陷的毛囊;清熱暗瘡丸組兔耳表面仍較粗糙，丘疹有所消退，毛囊角栓部分脫落。

2.2 組織病理觀察 正常組兔耳表皮較薄，約1層顆粒層，2～4層棘細胞層，表皮與真皮交界清楚;可見毛囊、皮脂腺。模型組可見表皮增厚，表皮和毛囊上皮的顆粒層增厚，棘層肥厚;部分相鄰擴張的毛囊互相融合，毛囊口及漏斗部充滿角化物質，并向皮脂腺延伸，皮脂腺分葉增多，單個皮脂腺直徑明顯增大;毛囊口被角質栓堵塞，毛囊漏斗部充滿角化物質并擴大呈壺狀;真皮上層毛細血管擴張，毛囊周圍散在炎細胞浸潤;基底細胞排列整齊，未見變性、液化和壞死等。消痤膠囊各劑量組可見表皮增厚、毛囊四周角化程度明顯減輕，部分毛囊皮脂腺導管口輕度擴張，其內角化物質疏松、減少，皮脂腺縮小，真皮層炎癥細胞減少，部分已接近正常組織。清熱暗瘡丸組表皮增厚及毛囊四周角化程度減輕，部分棘細胞及顆粒層肥厚，毛囊皮脂腺導管口及漏斗部有角質物，毛囊漏斗部擴大，內見少量角化物質充填，真皮層見少許炎癥細胞浸潤。

2.3 治療后各組兔耳實驗性痤瘡組織病理學分級比較 見表1。

表1 治療后各組兔耳實驗性痤瘡組織病理學分級比較（n=6） 只

2.4 消痤膠囊對兔血清睪酮水平的影響 見表2。

表2 消痤膠囊對兔血清睪酮水平的影響（±s，n=6）ng/mL

表2 消痤膠囊對兔血清睪酮水平的影響（±s，n=6）ng/mL

注:與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01;與清熱暗瘡丸組比較，△P＜0.05

組 別T正常對照組 0.865±0.351模型試驗組 2.422±0.322消痤膠囊大劑量組 0.321±0.449##△消痤膠囊中劑量組 0.402±0.469##△消痤膠囊小劑量組 0.626±0.464##△清熱暗瘡丸組 1.600±0.417#

2.5 消痤膠囊對兔血清雌二醇水平的影響 見表3。表3消痤膠囊對兔血清雌二醇（E2）含量的影響（±s，n=6） pmol/L

2.5 消痤膠囊對兔血清雌二醇水平的影響 見表3。表3消痤膠囊對兔血清雌二醇（E2）含量的影響（±s，n=6） pmol/L

注:與模型組比較，##P＜0.01;與清熱暗瘡丸組比較，△△P＜0.01

組 別 E2正常對照組 47.387±3.620模型試驗組 34.808±3.186消痤膠囊大劑量組 57.412±7.450##△△消痤膠囊中劑量組 56.082±8.646##△△消痤膠囊小劑量組 50.218±7.971##△△清熱暗瘡丸組 39.827±5.367

3 討論

痤瘡的發生為多種因素綜合作用的結果，其病因及發病機制復雜，至今尚未完全明了，多與雄激素、皮脂分泌、痤瘡丙酸桿菌增殖、毛囊皮脂腺導管的異常角化、心理及遺傳等因素有關。主要原因是體內雄激素水平升高或相對升高，刺激皮脂腺增生，皮脂分泌多且濃稠，為痤瘡丙酸桿菌繁殖提供有利條件，加之皮脂腺導管角化，毛囊口堵塞，引起局部炎癥反應，形成丘疹、膿皰、結節等［4］。

本實驗采用Kligman法在兔耳造模，是最常用的痤瘡藥物抗角化實驗模型，具有可靠性高、重復性好的特點［5］，選用雄性家兔，使其體內的雄性激素對皮脂腺具有一定的刺激作用。按文獻方法造模14 d后，兔耳內側面煤焦油涂布處肉眼可見毛囊口有黑色角栓，部分毛囊口隆起呈丘疹狀，顯微鏡下亦符合人類痤瘡病理改變，提示造模成功。給予消痤膠囊治療2周后，毛囊角化異常得到明顯改善，其組織病理學分級與模型實驗組比較，差異有統計學意義（P＜0.01），表明消痤膠囊可能通過糾正毛囊皮脂腺導管的角化異常改善尋常痤瘡。

本實驗中模型實驗組動物血清睪酮與雌二醇水平較正常組有明顯改變，經消痤膠囊各劑量組治療后血清激素水平與模型實驗組相比，差異有統計學意義（P＜0.01），提示消痤膠囊能通過降低血清睪酮含量，提升血清雌二醇含量來調節雌雄激素水平，達到治療痤瘡的目的［6］。

消痤膠囊由黃芩、枇杷葉、金銀花、連翹、赤芍、丹參、生甘草等藥物組成，方中黃芩清熱瀉火、解毒涼血為君藥;連翹、金銀花、枇杷葉、黃連、白花蛇舌草清熱解毒為臣藥;佐以丹參、白芷、大黃清熱涼血消癰;甘草清熱解毒、調和諸藥為使藥。諸藥合用具有清泄肺胃蘊熱，涼血解毒通便之功效，對肺胃蘊熱型痤瘡療效較好。現代藥理學研究［7-9］表明，黃芩具有較強的抗菌、消炎之功效，黃芩苷、黃芩素等是黃芩的主要成分，具有清熱解毒、利肝保膽等藥理作用，黃芩苷可能通過抑制雄性激素受體的表達而具有拮抗雄性激素對皮脂腺細胞活性的作用。丹參中豐富的丹參酮具有抗菌消炎、改善微循環、促進皮膚新陳代謝的作用，而且還有較溫和的雌性激素活性和抗雄性激素的作用以及皮脂腺抑制作用。金銀花、連翹、大黃等藥均具有較強的抗病原微生物、減少炎性反應之功效。諸藥合用從抗雄激素、抗菌消炎、減少皮脂腺分泌、改善毛囊導管的角化異常等方面，達到治療痤瘡的作用。

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Effects of resolving acne capsule on anti-keratinization and the content of testosterone，estradiol in rabbit ear acne model

ZHANG Li1，WANG Fan1，YI Xiao'e1，ZHU Lei2，XUE Guona2，MA Shuanquan1
（1.Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712000，Shaanxi Province，China;2.Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，Shaanxi Province，China）

ObjectiveTo observe the effect of resolving acne capsule on acne model of rabbit ear and the content of serum testosterone（T），estradiol（E2）.MethodsRabbits were randomly divided into resolving acne capsule group in high dose，middle dose，low dose，Qingre Anchuang pill group，the model group，normal control group.The kligman method was used to build animal model，then given resolving acne capsule，Qingre Anchuang pill and pure water two weeks.The anti-keratosis actions of the tested drugs were observed by naked eye and by microscope，the serum testosterone and estradiol was measured by Electro-Chemiluminescence immunoassay（ECLI）.ResultsAfter giving resolving acne capsule and Qingre Anchuang pill 2 weeks later，the acne keratosis was suppressed and the level of testosterone was decreased，the level of estradiol was increased and showed dosage-effect relationship.ConclusionResolving acne capsule can improve abnormal cornification of hair follicle and regulating hormone levels in acne model ofrabbits ear，resolving acne capsule has anti-acne effects.

resolving acne capsule;acne;serum testosterone;estradiol

R285.5

A

2095－6258（2014）05－0796－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.013

陜西省科學技術研究發展計劃項目“消痤膠囊藥效物質及作用機制研究”（2012k-05-06）。

張 麗（1975－），女，大學本科，副主任藥師。研究方向:中藥新劑型與新技術。

2014－04－14）