HPLC法測定維藥羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量

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新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000

HPLC法測定維藥羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量

司馬義江·阿布都熱西提阿依努爾·阿木提

新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000

目的：高效液相色譜法測定羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量。方法：甲醇-0.2%磷酸溶液(65∶35)；流速lml/min；檢測波長266nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：l0μl；分析方法：外標(biāo)法。結(jié)果：高良姜素在0.19～9.76μg范圍內(nèi)線性良好(r=1.0)，方法精密度RSD為0.7%(n=5)，平均回收率為98.65%，RSD為1.6%(n=6)。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確，測得結(jié)果穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，可作為該制劑中高良姜素的含量測定方法。

HPLC；高良姜素；羅補(bǔ)甫克比日丸；含量測定

〗羅補(bǔ)甫克比日丸是新疆維吾爾族名藥之一，具有溫補(bǔ)腦腎、益心填精的功效，主要用于陽痿、抑郁、早泄、滑精、體虛、消瘦、神經(jīng)衰弱。配方主要由牛鞭、肉桂、苜蓿子、洋蔥子、丁香、花椒、胡蘿卜子、甜瓜子、巴丹仁、韭菜子等30味藥材組成，屬部頒標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊(cè)收錄品種[1]。多味藥材組成制劑的藥理作用，來自于每一味藥材藥理作用的互相協(xié)調(diào)的綜合結(jié)果?？疾槎辔端幉慕M成的藥物制劑質(zhì)量的時(shí)候應(yīng)考慮每一味組分的質(zhì)量。研究測定高良姜素的含量測定方法可以為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 島津高效液相色譜系統(tǒng)：包括LC20AT型雙泵，SIL20AC型自動(dòng)進(jìn)樣器，SPDM 20A型PDA檢測器； BP211D型分析天平(德國Sartorius公司)。

1.2 試藥 高良姜素對(duì)照品(批號(hào)：111699-200602)由中國食品藥品檢定院提供；羅補(bǔ)甫克比日丸(批號(hào)：20130830、20130836、20120419)由和田維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn);甲醇為色譜純(美國TEDIA試劑公司)；水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：島津VP-ODS(250×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸溶液(65∶35)；流速lml/min；檢測波長266nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：l0μl；分析方法：外標(biāo)法[2]。

2.2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 按照對(duì)照品溶液制備方法及供試品溶液配制方法配分別制成對(duì)照品溶液及供試品溶液，按預(yù)定的色譜條件，分別進(jìn)樣10μl，采集光譜數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，供試品溶液與對(duì)照品溶液的色譜峰一致。保留時(shí)間為10.3min。

2.3 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取高良姜素對(duì)照品，加甲醇溶解，搖勻并稀釋制成97.60μg/ml的對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液。

2.4 供試品溶液的配制 取樣品(批號(hào)：20130830、20130836、20120419)50粒，研碎，稱取1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流4h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液即得。

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液(97.6μg/ml)0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別取10μl，按“2.1”色譜條件下操作，以8次測定的峰面積平均值考察線性范圍。線性方程為：A=4.68×106C-3.49×104(r=1.0)，結(jié)果表明，高良姜素在0.1952～9.760μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液(97.6μg/ml)2ml置50ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算RSD(n=5) 為0.22%。證明本法有較高的精密度。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)本品(20130830)，按“2.4”方法配制溶液，分別于0、1、2、4、6h進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μl，測定高良姜素的峰面積，RSD為1.42%。

2.8 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)本品(20130830)，按“2.4”方法平行制備5份樣品溶液，在按“2.2”的方法進(jìn)行測定，并對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，結(jié)果測得高良姜素平均含量(n=6)為256.1μg/g，RSD為1.2%。結(jié)果表明方法的重復(fù)性較好。見圖1。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品(批號(hào)：20130830，含量256.1μg/g)，稱取1g，精密稱定，精密加入對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液2ml，再按“2.4” 方法平行制備6份樣品溶液，用微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液，作為加樣回收率樣品。按照樣品測定項(xiàng)下的方法測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.10 樣品測定 取3批樣品按“2.4”方法制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件下測定，按外標(biāo)法計(jì)算高良姜素的含量。結(jié)果見表2。

表2 羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量測定結(jié)果(mg/g，n=3)

3 討論

3.1 檢測波長的驗(yàn)證 取高良姜素對(duì)照品儲(chǔ)備液(97.60μg/ml)用甲醇稀釋成9.760μg/ml溶液，用紫外可見分光光度計(jì)于240～300nm處進(jìn)行掃描，從其紫外圖譜中可見其在266nm處有比較強(qiáng)的最大吸收，與有關(guān)參考文獻(xiàn)[3]報(bào)道的266nm一致，故選擇266nm為檢測波長。

3.2 流動(dòng)相的選擇 根據(jù)參考文獻(xiàn)報(bào)道的方法試驗(yàn)，流動(dòng)相用甲醇-0.2%磷酸溶液(55∶45)[2]，甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)[3]，在該制劑中高良姜素的分離效果均不佳，通過不斷改變甲醇與0.2%磷酸溶液的比例及流速，選定甲醇-0.2%磷酸溶液(65∶35)及流速lml/min比較合適，分離度好且保留時(shí)間適宜。

3.3 提取方法的選擇 根據(jù)參考文獻(xiàn)[2]甲醇作為溶劑采用加熱回流1、2、4h，結(jié)果加熱回流2h和4h的測定結(jié)果接近，為保證提取完全，確定加熱回流4h。

本實(shí)驗(yàn)測定了和田維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司不同批號(hào)的羅補(bǔ)甫克比日丸中高良姜素的含量，結(jié)果表明所建立的方法簡單，可靠，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，為羅補(bǔ)甫克比日丸的質(zhì)量控制提供了有效的依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會(huì)．衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(維吾爾藥分冊(cè))[S]．1998：194．

[2]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：270-271，附錄36．

[3] 李智勇，孫冬梅．HPLC法測定高良姜中高良姜素和山奈素的含量[J].中華中醫(yī)藥雜志，2010，25(9)：1368-1370．

DeterminationofgalangalinUygurMedicinePreparationLuobupukebiriPillsbyHPLC

Simayijiang·Abudurexiti,Ayinuer·amuti

Kashi Institute for Drog Control，Kashi 844000，China

ObjectiveDetermination ofLuobupukebiri Pills solution of galangal.MethodsA Methanol-0.2% phosphoric acid(65:35); flow lml/min; detection wavelength 266 nm column temperature: 25℃; injection volume: l0μL; analysis methods: external standard method.ResultsIn 0.19～9.76μg. range of good linearity (r=1.0), method precision was RSD = 0.7% (n= 5), the average recovery was 98.65%,RSD was 1.6% (n= 6).ConclusionsThe method is simple, accurate, reproduciblemeasuredresults are stableand can be usedinthe preparationmethod for the determinationofgalangal.

HPLC；Galangin；Luobupukebiri Pills；content determination

司馬義江·阿布都熱西提(1973-)，男，本科，副主任藥師。

R284.1

A

1007-8517(2014)23-0008-02

2014.09.10)