青蒿琥酯對非酒精性脂肪炎大鼠肝組織中過氧化物酶體增殖物激活受體γ和固醇調節元件結合蛋白—1c表達的影響

陳晶+李麗+葉月芳

[摘要] 目的 探討青蒿琥酯對非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肝組織過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）和固醇調節元件結合蛋白-1c（SREBP-1c）表達的影響。 方法 采用高脂飼料喂養的方法復制大鼠NASH模型，實驗分正常組、模型組、易善復組、青蒿琥酯低劑量組、中劑量組和高劑量組。正常組每天予以標準飼料喂養，正常組和模型組給予同等劑量的生理鹽水。給藥治療8周后，提取肝組織，運用免疫組化方法測定各組大鼠肝組織PPARγ、SREBP-1c 蛋白表達情況；采用硫代巴比妥酸法測定丙二醛（MDA）含量；采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶（SOD）含量；采用分光光度法測定谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）含量；光鏡觀察肝脂肪變、炎癥及纖維化程度。 結果 與正常組相比，在模型組中不僅PPARγ蛋白表達（1.67±1.01）明顯減少，而且SREBP-1c蛋白表達（3.27±1.03）明顯增多（均P < 0.01）；青蒿琥酯低中劑量組與模型組相比，PPARγ蛋白表達增多，SREBP-1c蛋白表達明顯減少，并且呈劑量依賴性（均P < 0.05），青蒿琥酯高劑量組PPARγ為（3.21±1.02），SREBP-1c為（1.32±0.77），與模型組相比，差異均有高度統計學意義（P < 0.01）。與模型組相比，青蒿琥酯各劑量組能提高SOD和GSH-Px的含量，降低MDA的含量，并且呈劑量依賴性（均P < 0.05）；青蒿琥酯能明顯改善大鼠肝組織脂肪變、炎癥程度和肝纖維化程度。 結論 青蒿琥酯治療大鼠NASH的機制可能與上調PPARγ和下調SREBP-1c的表達有關。

[關鍵詞] 青蒿琥酯；非酒精性脂肪性肝炎；過氧化物酶體增殖物激活受體γ；固醇調節元件結合蛋白-1c

[中圖分類號] R575.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）08（b）-0004-04

Effects of artesunate on expressions of peroxisome proliferators activated receptor γ and sterol regulatory element binding protein-1c in the hepatic tissue of the rats with nonalcoholic steatohepatitis

CHEN Jing LI Li YE Yuefang

Department of Gastroenterology， the Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University， Zhejiang Province， Hangzhou 310015， China

[Abstract] Objective To explore the influence of artesunate upon expressions of peroxisome proliferator-activated receptor γ （PPARγ） and sterol regulatory element binding protein-1c （SREBP-1c） in the hepatic tissue of the rats with nonalcoholic steatohepatitis （NASH）. Methods High-fat diets were used in male SD rats to induce NASH. Rats were divided into six groups： normal group， model group， Essentiale Forte N group， artesunate low-dose group， moderate-dose group and high-dose group. Standard feed was used to the normal group every day. Equal volume of normal saline was applied to the normal group and the model group. After artesunate treatment for 8 weeks， the hepatic tissues of the rats were extracted， and the expressions of PPARγ and SREBP-1c in them were detected by immunohistochemistry assay. The contents of malondialdehyde （MDA） was measured with thiobarbituric acid assay， the contents of superoxide dismutase （SOD） was measured by xanthine oxidase assay， and the contents of GSH-Px was measured by spectrophotometry. The presence of hepatic fatty degeneration and the degree of inflammation and fibrosis were observed with light microscope. Results Not noly the expression of PPARγ decreased （1.67±1.01） significantly but also the expression of SREBP-1c increased（3.27±1.03） significantly in the model group compared with those of the normal group （all P < 0.05）. The expression of PPARγ increased and the expression of SREBP-1c decreased in a dose-dependent manner in the artesunate low and moderate-dose groups compared with those of the model group. The expression of PPARγ was （3.21±1.02） and the expression of SREBP-1c was （1.32±0.77） in the artesunate high-dose group， which had significant differences compared to those of the model group （all P < 0.01）. In the artesunate groups， both the contents of SOD and GSH-Px increased and the content of MDA decreased in a dose-dependent manner compared to those of the model group. Both the fatty degeneration and the degree of inflammation and hepatic fibrosis in rats were improved markedly by artesunate. Conclusion The mechanism of artesunate curing rat NASH may be associated with the up-regulation of PPARγ expression and the down-regulation of SREBP-1c expression.

[Key words] Artesunate； Nonalcoholic steatohepatitis； Peroxisome proliferator-activated receptors γ； Sterol regulatory element binding protein-1c

非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是世界范圍內常見肝臟疾病之一，近年來在我國的發病率迅速上升，是繼病毒性肝炎后第2位常見肝病。NAFLD從病理上分為單純性脂肪肝、脂肪性肝炎（NASH）、脂肪性肝纖維化和脂肪性肝硬化[1]。因此，NAFLD是對人類健康產生嚴重威脅的慢性肝病之一，對NAFLD發病機制及防治方法的探討已經成為當前研究的核心，但其病理分子機制還不完全明確，故臨床治療上無特效藥物且療效欠佳。根據Day[2]提出的“二次打擊學說”，本實驗擬從其發病機制出發，研究過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）和固醇調節元件結合蛋白-1c（SREBP-1c）在脂肪代謝中的調節作用，初步探討青蒿琥酯對NASH的保護作用。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Leica2235輪轉式切片機（德國），Biofuge 28RS低溫高速離心機（德國Heraeus公司），OlympasB41顯微鏡（日本Olympas），生物安全柜（Thermo scienrific，1384），數顯立式高壓滅菌鍋（上海博訊實業有限公司，YXQ-LS-30SⅡ），低溫冰箱（Thermo scientific，MDF-U538-C）和純化水制水系統（象山和信制藥設備有限公司，FST-2B型）。

1.2 試藥

青蒿琥酯（廣西桂林制藥二廠，批號：010901）、易善復（賽諾菲安萬特制藥有限公司，批號：D1157），丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號分別為：A001-2，ba8150，20100107）。SREBP1兔抗（Santa Cruz Biotechnology，批號：C0907）；Envision二步法免疫組化試劑盒（丹麥Dako公司，批號：00029661）。

1.3 實驗動物

SPF級雄性SD大鼠購自浙江省醫學科學院實驗動物中心（動物許可證號SCXK浙-20080033）。大鼠普通飼料及高脂飼料由浙江省醫學科學院實驗動物中心加工生產，高脂飼料配方為：普通飼料82%、蛋黃粉5%、豬油10%、膽固醇2%、膽鹽1%。

2 方法

2.1 實驗分組

95只SD大鼠經適應性飼養1周后，隨機分為正常組15只（每天予以標準飼料喂養），造模組80只（每天予以高脂飼料喂養），連續喂養12周；第12周結束后隨機在造模組中處死5只。取肝臟進行病理切片檢查HE染色法，評定非酒精性脂肪性肝炎程度，對已成模的大鼠分成5組，每組15只，分別是模型組、易善復組、青蒿琥酯低、中和高劑量組；青蒿琥酯低、中和高劑量組青蒿琥酯分別按5、15、45 mg/g劑量每日灌胃；易善復組給予易善復按300 mg/g劑量每日灌胃；正常組和模型組給予同等劑量的生理鹽水，給藥治療8周后，處死各組大鼠，迅速取肝右葉中部切取數塊肝組織，立即投入液氮中凍存，3 h后移入-80℃冰箱中保存備用。

2.2 各組大鼠肝組織MDA、SOD和GSH-Px含量測定

過氧化脂質降解產物中的MDA可與硫代巴比妥酸縮合，形成紅色產物，在532 nm處有最大吸收峰。取各組動物血清，嚴格按試劑盒說明書操作，稀釋倍數為1倍，上樣量為10 μL，MDA含量公式為：血清中MDA的含量（nmol/mL）=÷標準品濃度（10 nmol/mL）+樣本測試前稀釋倍數。

通過黃嘌呤和XOD反應系統產生O2-，O2-氧化羥胺形成亞硝酸鹽（NO2-），同時在顯色劑的作用下呈現紫紅色，測定其吸光度。通過公式計算出被測樣品中SOD活力：血漿中總SOD活力（U/mL）=÷50%×反應體系的稀釋倍數×樣本測試前。

根據酶促反應中谷胱甘肽（GSH）的消耗，可以求出酶的活力（H2O2+2GSH2H2O+GSSG），然后取各組動物血清，嚴格按照說明書操作，稀釋倍數為30倍，通過公式測定血清中GSH-PX含量。公式為：血清GSH-Px活力（U/mL）=×標準管濃度（20 μmol/L）×稀釋倍數（6）×樣本測試前的稀釋倍數。

2.3肝組織病理

常規HE染色觀察肝組織脂肪變、炎癥及纖維化程度。病理診斷標準參考中華醫學會學分會脂肪肝和酒精性肝病學組2006年2月修訂的《酒精性肝病診療指南》[3]。

2.4肝組織免疫組化

取上述石蠟標本切片，采用免疫組化二步法進行免疫組化染色。每張切片于陽性表達區域選擇10個無重疊視野，陽性細胞表現為胞漿或胞核呈棕黃色顆粒。著色細胞陽性范圍：無著色為0分，著色陽性細胞小于1/3為1分，著色陽性細胞1/3～1/2為2分，著色陽性細胞大于1/2為3分；將每張切片著色程度與著色細胞陽性范圍得分各自相加取平均值為其最后計分。

2.5 統計學方法

采用統計軟件SPSS 18.0對實驗數據進行分析，計量資料數據以均數±標準差（x±s）表示，兩組獨立樣本采用t檢驗，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 各組大鼠肝組織MDA、SOD和GSH-Px含量測定結果

與正常組相比，模型組大鼠肝組織MDA顯著增加，差異有統計學意義（P < 0.05）；與模型組比較，青蒿琥酯各劑量組大鼠肝組織MDA顯著下降并且呈劑量依賴性，差異有統計學意義（P < 0.05）；與正常組比較，模型組大鼠肝組織SOD和GSH-Px顯著降低，差異有統計學意義（P < 0.05）；與模型組比較，青蒿琥酯各劑量組大鼠肝組織SOD和GSH-Px顯著增加并且呈劑量依賴性，差異有統計學意義（P < 0.05）。結果見表1。

3.2 各組大鼠肝臟組織HE染色結果

光鏡下，正常組大鼠肝臟肝小葉輪廓清晰，結構正常，細胞索排列整齊，肝細胞呈無明顯病變，核結構清晰。模型組大鼠肝組織可見中到重度脂肪肝，肝索出現紊亂，胞質疏松可見大小不一的脂滴空泡，肝小葉內出現點狀壞死，匯管區有炎癥細胞浸潤；青蒿琥酯組可見輕度到中度脂肪變，細胞腫脹，胞漿內可見大小不等的脂肪空泡，肝小葉未見明顯炎癥細胞浸潤。見封三（圖1）。

3.3各組大鼠肝臟組織免疫組化結果

采用免疫組化二步法進行免疫組化染色，PPARγ主要定位于肝細胞核內，呈棕黃色顆粒主要分布在匯管區周圍肝細胞胞核內；與正常組相比，模型組PPARγ陽性表達細胞明顯減少（P < 0.05）；青蒿琥酯中、低劑量組與模型組相比，PPARγ陽性表達細胞增多，并且呈劑量依賴性（均P < 0.05），青蒿琥酯高劑量組和模型組相比差異有高度統計學意義（P < 0.01）；SREBP-1c 表達于胞漿質中，可見肝細胞質中散在分布淺黃色顆；與正常組相比，模型組SREBP-1c陽性表達增強細胞質中可見大量棕褐色顆粒沉積，同時大部分細胞核也呈陽性著色，兩組比較差異有統計學意義（P < 0.05）；青蒿琥酯中、低劑量組與模型組相比，SREBP-1c陽性表達細胞減少，并且呈劑量依賴性減少，青蒿琥酯高劑量組和模型組相比差異有高度統計學意義（P < 0.01）。見封三（圖2、3），表2。4 討論

青蒿素是從植物黃花蒿中提取得到的一種內酯化合物。青蒿素及其衍生物具有抗病毒、抗腫瘤和免疫抑制等多方面藥理作用。青蒿琥酯為青蒿素水溶性的衍生物[4]。有學者發現青蒿琥酯對醋氨酚（AAP）與四氯化碳（CCl4）引起的小鼠急性肝損傷有保護作用[5-6]；來麗娜等[4]發現青蒿琥酯能降低牛血清白蛋白致大鼠肝纖維化程度。因此，本實驗初步探討青蒿琥酯是否能通過PPARγ和SREBP-1c途徑阻斷NASH的形成。

氧化應激與脂質過氧化是“二次打擊”學說的核心環節。正常情況下肝線粒體與內質網在脂肪酸β氧化過程中產生大量的活性氧（reactive oxygen species，ROS），使氧化和抗氧化處于動態平衡。在病理情況下，肝細胞內一旦ROS的過量產生與抗氧化能力降低，能促使氧化物與抗氧化物之間的動態平衡失調，從而導致脂質過氧化，很容易導致氧化應激狀態[7]。SOD是體內一種重要的自由基清除劑，能夠平衡機體的ROS，避免超氧陰離子自由基濃度過高時引起的不良反應。脂質過氧化終產物MDA可形成蛋白加合物，刺激機體產生抗體介導的免疫損傷[8]。GSH-Px是機體內存在的一種含硒抗氧化酶，它能特異性地催化GSH對H2O2的還原反應，進而清除H2O2，從而起到保護細胞膜結構和功能完整的作用。如果過氧化氫酶（CAT）在肝臟中含量極高，可以促使H2O2分解為分子氧和水，從而使細胞免于遭受H2O2的損害[9]。因此，提高SOD、GSH-Px活性與降低肝MDA含量對抗氧應激狀態，提高肝臟抗氧化能力。本研究結果表明青蒿琥酯可通過增加機體SOD和GSH-Px活性，增強機體抗氧化能力，加速自由基的清除，抑制脂質過氧化反應，清除過量的MDA，從而保護肝臟的結構和功能。

PPAR有3種亞型分別為α、β、γ，其中PPARγ是由多種脂肪酸及其衍生物激活，是胰島素細胞間信號傳遞和脂肪細胞基因表達的主要調控者，參與了脂代謝的調節及脂肪細胞分化，因此在NAFLD中起著重要作用[10]。SREBPs是一類膜連接蛋白，其位于內質網上。SREBP-1也是一種核轉錄因子，SREBP-1c是其中一個亞型，它主要參與糖代謝和脂肪酸的代謝，是脂肪合成基因轉錄的主要調節因子，與脂肪變性有密切聯系[11]。本實驗從蛋白水平結果顯示：PRARγ和SREBP-lc與肝細胞病變程度有很好的一致性關系，兩者可能協同作用參與并促進了非酒精性脂肪性肝病的發生、發展。進一步驗證青蒿琥酯抑制PRARγ和SREBP-lc的不適當表達可能是預防和治療NASH的一條有效途徑。

[參考文獻]

[1] Duvnjak M，Leroti I，Barsi N，et al. Pathogenesis and managementissues for nonalcoholic fatty liver disease [J]. World J Gastroenterol，2007，1（3）：4539-4550.

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[9] 王晶宇，馬笑燕，夏苗，等.藏藥柳茶提取物對非酒精性脂肪肝病大鼠肝臟保護作用及其機制研究[J].中國臨床藥理學雜志，2011，27（3）：191-194.

[10] Mcirhacghc A，Fajas I，Gouilleux F，et al. A functional polymorphism in a STA5B site of human PPAR gamma 3 gene promoter affects height and lipid metabolism in a French population [J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol，2003，23（2）：289.

[11] Shimomura I，Shimano H，Horton JD，et al. Differential expression of exons la and lc in Mrna for sterol regulatory element binding protein-1 in human and moumse organs and cultured cells [J]. J Clin Invest，1997，9（9）：838.

（收稿日期：2014-04-30 本文編輯：衛 軻）

3.2 各組大鼠肝臟組織HE染色結果

光鏡下，正常組大鼠肝臟肝小葉輪廓清晰，結構正常，細胞索排列整齊，肝細胞呈無明顯病變，核結構清晰。模型組大鼠肝組織可見中到重度脂肪肝，肝索出現紊亂，胞質疏松可見大小不一的脂滴空泡，肝小葉內出現點狀壞死，匯管區有炎癥細胞浸潤；青蒿琥酯組可見輕度到中度脂肪變，細胞腫脹，胞漿內可見大小不等的脂肪空泡，肝小葉未見明顯炎癥細胞浸潤。見封三（圖1）。

3.3各組大鼠肝臟組織免疫組化結果

采用免疫組化二步法進行免疫組化染色，PPARγ主要定位于肝細胞核內，呈棕黃色顆粒主要分布在匯管區周圍肝細胞胞核內；與正常組相比，模型組PPARγ陽性表達細胞明顯減少（P < 0.05）；青蒿琥酯中、低劑量組與模型組相比，PPARγ陽性表達細胞增多，并且呈劑量依賴性（均P < 0.05），青蒿琥酯高劑量組和模型組相比差異有高度統計學意義（P < 0.01）；SREBP-1c 表達于胞漿質中，可見肝細胞質中散在分布淺黃色顆；與正常組相比，模型組SREBP-1c陽性表達增強細胞質中可見大量棕褐色顆粒沉積，同時大部分細胞核也呈陽性著色，兩組比較差異有統計學意義（P < 0.05）；青蒿琥酯中、低劑量組與模型組相比，SREBP-1c陽性表達細胞減少，并且呈劑量依賴性減少，青蒿琥酯高劑量組和模型組相比差異有高度統計學意義（P < 0.01）。見封三（圖2、3），表2。4 討論

青蒿素是從植物黃花蒿中提取得到的一種內酯化合物。青蒿素及其衍生物具有抗病毒、抗腫瘤和免疫抑制等多方面藥理作用。青蒿琥酯為青蒿素水溶性的衍生物[4]。有學者發現青蒿琥酯對醋氨酚（AAP）與四氯化碳（CCl4）引起的小鼠急性肝損傷有保護作用[5-6]；來麗娜等[4]發現青蒿琥酯能降低牛血清白蛋白致大鼠肝纖維化程度。因此，本實驗初步探討青蒿琥酯是否能通過PPARγ和SREBP-1c途徑阻斷NASH的形成。

氧化應激與脂質過氧化是“二次打擊”學說的核心環節。正常情況下肝線粒體與內質網在脂肪酸β氧化過程中產生大量的活性氧（reactive oxygen species，ROS），使氧化和抗氧化處于動態平衡。在病理情況下，肝細胞內一旦ROS的過量產生與抗氧化能力降低，能促使氧化物與抗氧化物之間的動態平衡失調，從而導致脂質過氧化，很容易導致氧化應激狀態[7]。SOD是體內一種重要的自由基清除劑，能夠平衡機體的ROS，避免超氧陰離子自由基濃度過高時引起的不良反應。脂質過氧化終產物MDA可形成蛋白加合物，刺激機體產生抗體介導的免疫損傷[8]。GSH-Px是機體內存在的一種含硒抗氧化酶，它能特異性地催化GSH對H2O2的還原反應，進而清除H2O2，從而起到保護細胞膜結構和功能完整的作用。如果過氧化氫酶（CAT）在肝臟中含量極高，可以促使H2O2分解為分子氧和水，從而使細胞免于遭受H2O2的損害[9]。因此，提高SOD、GSH-Px活性與降低肝MDA含量對抗氧應激狀態，提高肝臟抗氧化能力。本研究結果表明青蒿琥酯可通過增加機體SOD和GSH-Px活性，增強機體抗氧化能力，加速自由基的清除，抑制脂質過氧化反應，清除過量的MDA，從而保護肝臟的結構和功能。

PPAR有3種亞型分別為α、β、γ，其中PPARγ是由多種脂肪酸及其衍生物激活，是胰島素細胞間信號傳遞和脂肪細胞基因表達的主要調控者，參與了脂代謝的調節及脂肪細胞分化，因此在NAFLD中起著重要作用[10]。SREBPs是一類膜連接蛋白，其位于內質網上。SREBP-1也是一種核轉錄因子，SREBP-1c是其中一個亞型，它主要參與糖代謝和脂肪酸的代謝，是脂肪合成基因轉錄的主要調節因子，與脂肪變性有密切聯系[11]。本實驗從蛋白水平結果顯示：PRARγ和SREBP-lc與肝細胞病變程度有很好的一致性關系，兩者可能協同作用參與并促進了非酒精性脂肪性肝病的發生、發展。進一步驗證青蒿琥酯抑制PRARγ和SREBP-lc的不適當表達可能是預防和治療NASH的一條有效途徑。

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[7] 鄭海音，趙錦燕，劉艷，等.粗葉懸鉤子總生物堿對大鼠非酒精性脂肪肝病的抗氧化作用研究[J].中國中藥雜志，2011，36（17）：2383-2387.

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[9] 王晶宇，馬笑燕，夏苗，等.藏藥柳茶提取物對非酒精性脂肪肝病大鼠肝臟保護作用及其機制研究[J].中國臨床藥理學雜志，2011，27（3）：191-194.

[10] Mcirhacghc A，Fajas I，Gouilleux F，et al. A functional polymorphism in a STA5B site of human PPAR gamma 3 gene promoter affects height and lipid metabolism in a French population [J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol，2003，23（2）：289.

[11] Shimomura I，Shimano H，Horton JD，et al. Differential expression of exons la and lc in Mrna for sterol regulatory element binding protein-1 in human and moumse organs and cultured cells [J]. J Clin Invest，1997，9（9）：838.

（收稿日期：2014-04-30 本文編輯：衛 軻）

3.2 各組大鼠肝臟組織HE染色結果

光鏡下，正常組大鼠肝臟肝小葉輪廓清晰，結構正常，細胞索排列整齊，肝細胞呈無明顯病變，核結構清晰。模型組大鼠肝組織可見中到重度脂肪肝，肝索出現紊亂，胞質疏松可見大小不一的脂滴空泡，肝小葉內出現點狀壞死，匯管區有炎癥細胞浸潤；青蒿琥酯組可見輕度到中度脂肪變，細胞腫脹，胞漿內可見大小不等的脂肪空泡，肝小葉未見明顯炎癥細胞浸潤。見封三（圖1）。

3.3各組大鼠肝臟組織免疫組化結果

采用免疫組化二步法進行免疫組化染色，PPARγ主要定位于肝細胞核內，呈棕黃色顆粒主要分布在匯管區周圍肝細胞胞核內；與正常組相比，模型組PPARγ陽性表達細胞明顯減少（P < 0.05）；青蒿琥酯中、低劑量組與模型組相比，PPARγ陽性表達細胞增多，并且呈劑量依賴性（均P < 0.05），青蒿琥酯高劑量組和模型組相比差異有高度統計學意義（P < 0.01）；SREBP-1c 表達于胞漿質中，可見肝細胞質中散在分布淺黃色顆；與正常組相比，模型組SREBP-1c陽性表達增強細胞質中可見大量棕褐色顆粒沉積，同時大部分細胞核也呈陽性著色，兩組比較差異有統計學意義（P < 0.05）；青蒿琥酯中、低劑量組與模型組相比，SREBP-1c陽性表達細胞減少，并且呈劑量依賴性減少，青蒿琥酯高劑量組和模型組相比差異有高度統計學意義（P < 0.01）。見封三（圖2、3），表2。4 討論

青蒿素是從植物黃花蒿中提取得到的一種內酯化合物。青蒿素及其衍生物具有抗病毒、抗腫瘤和免疫抑制等多方面藥理作用。青蒿琥酯為青蒿素水溶性的衍生物[4]。有學者發現青蒿琥酯對醋氨酚（AAP）與四氯化碳（CCl4）引起的小鼠急性肝損傷有保護作用[5-6]；來麗娜等[4]發現青蒿琥酯能降低牛血清白蛋白致大鼠肝纖維化程度。因此，本實驗初步探討青蒿琥酯是否能通過PPARγ和SREBP-1c途徑阻斷NASH的形成。

氧化應激與脂質過氧化是“二次打擊”學說的核心環節。正常情況下肝線粒體與內質網在脂肪酸β氧化過程中產生大量的活性氧（reactive oxygen species，ROS），使氧化和抗氧化處于動態平衡。在病理情況下，肝細胞內一旦ROS的過量產生與抗氧化能力降低，能促使氧化物與抗氧化物之間的動態平衡失調，從而導致脂質過氧化，很容易導致氧化應激狀態[7]。SOD是體內一種重要的自由基清除劑，能夠平衡機體的ROS，避免超氧陰離子自由基濃度過高時引起的不良反應。脂質過氧化終產物MDA可形成蛋白加合物，刺激機體產生抗體介導的免疫損傷[8]。GSH-Px是機體內存在的一種含硒抗氧化酶，它能特異性地催化GSH對H2O2的還原反應，進而清除H2O2，從而起到保護細胞膜結構和功能完整的作用。如果過氧化氫酶（CAT）在肝臟中含量極高，可以促使H2O2分解為分子氧和水，從而使細胞免于遭受H2O2的損害[9]。因此，提高SOD、GSH-Px活性與降低肝MDA含量對抗氧應激狀態，提高肝臟抗氧化能力。本研究結果表明青蒿琥酯可通過增加機體SOD和GSH-Px活性，增強機體抗氧化能力，加速自由基的清除，抑制脂質過氧化反應，清除過量的MDA，從而保護肝臟的結構和功能。

PPAR有3種亞型分別為α、β、γ，其中PPARγ是由多種脂肪酸及其衍生物激活，是胰島素細胞間信號傳遞和脂肪細胞基因表達的主要調控者，參與了脂代謝的調節及脂肪細胞分化，因此在NAFLD中起著重要作用[10]。SREBPs是一類膜連接蛋白，其位于內質網上。SREBP-1也是一種核轉錄因子，SREBP-1c是其中一個亞型，它主要參與糖代謝和脂肪酸的代謝，是脂肪合成基因轉錄的主要調節因子，與脂肪變性有密切聯系[11]。本實驗從蛋白水平結果顯示：PRARγ和SREBP-lc與肝細胞病變程度有很好的一致性關系，兩者可能協同作用參與并促進了非酒精性脂肪性肝病的發生、發展。進一步驗證青蒿琥酯抑制PRARγ和SREBP-lc的不適當表達可能是預防和治療NASH的一條有效途徑。

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（收稿日期：2014-04-30 本文編輯：衛 軻）