不同真菌菌株對蠐螬的毒力測定

章駿

摘要：選擇幾種真菌的不同菌株及其混合物對蠐螬進行毒力測定。結果表明，綠僵菌Ma1較其它菌株校正累積死亡率最高，致死速度最快，平均累計校正死亡率達62.50%，LT50為10.31d，在花生蠐螬的防治上具有較大的應用價值。

關鍵詞：綠僵菌；蠐螬；防治；毒力測定

中圖分類號S476.1文獻標識碼A文章編號1007-7731（2014）13-29-02

蠐螬（Anmala cuprea）是鞘翅目金龜甲幼蟲的總稱，是我國地下害蟲分布最廣、為害最重的一類害蟲，主要為害花生、大豆、麥類、高粱、玉米、甘蔗、棉花等多種大田作物，以及一些中藥材等，其中以為害花生較為嚴重，嚴重時造成作物顆粒無收［1］。長期以來，主要依賴化學農藥防治該害蟲，易使其產生抗性，并且造成土壤中農藥殘留，導致作物產品農藥含量超標，使花生有異味，影響到出口創匯及人體健康。為此，筆者選用幾種真菌的不同菌株及其混合物，分別對蠐螬進行毒力測定，以期篩選出對蠐螬具有高毒力的菌株。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試蟲源 蠐螬幼蟲是5月上旬從安徽省廬江縣采集的越冬幼蟲，室內飼養數天，挑選大小均勻且健康的個體備用。

1.1.2 供試菌種 菌種為安徽農業大學植保學院生防研究室儲存菌種，編號分別為Ma1、Bbr84、Ma2、Ma3、Ma4。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌劑的制備 培養采用薩氏葡萄糖酵母浸膏培養基（SDAY）、蛋白胨馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PPDA）和察氏瓊脂培養基培養（Czapek），置于光照培養箱內26℃下恒溫培養15d后，放入冰箱低溫（4℃）保存備用。用無菌的塑料藥匙將真菌的分生孢子粉刮到一個干凈的盛有10mL0.05%Tween-80潤濕劑的三角瓶中，在渦旋振蕩器上充分振蕩（10min左右），然后按比例稀釋，經血球計數板測定每mL孢子數，通過計算把各菌的孢子懸浮液濃度配成基本一致，即1.0×108孢子/mL，以測定致死中時（LT50），比較各菌種間的毒力［2］。

1.2.2 測定方法 用毛筆將蠐螬3齡幼蟲挑起，在盛有孢子懸浮液的培養皿中浸蘸一下（約3～5s），而后迅速取出，置于潔凈濾紙上，任其爬行，片刻后，移入潔凈的小指型管（1cm×8cm）中單頭飼養。為了避免相互殘殺，每管放一小塊人工飼料。養蟲器皿事先在1%甲醛液中浸泡片刻，取出后涼干備用。不同處理用不同毛筆，避免不同菌株之間相互干擾，影響試驗結果。以0.05%吐溫水為對照，共設7個處理，重復3次，每處理試蟲數30頭。試驗每天定時觀察一次直至化蛹，每次記下死蟲數，并及時將蟲尸移出。蟲尸在26℃保濕培養（相對濕度大于90%）觀察是否有僵蟲出現，統計僵蟲率。

1.2.3 數據處理 計算公式如下：每mL孢子總量=平均每小格孢子數×4×106×稀釋倍數；累積死亡率（%）=（處理的總死蟲數×100）/處理的總蟲數；累積校正死亡率（%）=（處理組累積死亡率-對照組累積死亡率）/（1-對照組累積死亡率）；僵蟲率（%）=僵蟲數×100/總死亡蟲數。

以LT50、校正死亡率及僵蟲率作為分析毒力的指標，將觀察時間分為間隔相等的時間區段，分別統計整理每個時間區段內的累積死亡率，并校正，以時間（d）的對數值為X，死亡率的機率值為Y，采用機率值分析法（Doberski，J.W.1981）算出毒力回歸方程和致死中時（LT50）。

2 結果與分析

2.1 不同真菌菌株對蠐螬的致病效果 由表1可知，幾種真菌的不同菌株及其混合物對蠐螬均有不同程度的致病性，但致死率表現出明顯差異。Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3校正累積死亡率分別為62.50%、50.00%、43.75%、43.75%、37.50%和24.98%，致死中時LT50分別為10.31d、15.06d、15.30d、15.65d、15.40d和27.56d。其中綠僵菌Ma1校正累積死亡率最高，達到了62.50%，而其它處理都≤50.00%，差異極顯著；同時綠僵菌Ma1致死中時LT50最小，為10.31d，而其它處理都＞15d，由此可見綠僵菌Ma1的致病力最強。 表1 不同真菌對蠐螬3齡幼蟲的致病效果及僵蟲率

[處理&累積死亡率（%）&校正累計

死亡率（%）&差異顯著性&回歸方程&相關系數

r& 致死中時

LT50（d）&僵蟲率

（%）&0.05&0.01&Ma1&66.67&62.50&a&A&Y=7.912 35-2.874 40x&0.993 81&10.31&66.64&Bbr84&55.56&50.00&b&B&Y=8.167 74-2.689 32x&0.985 38&15.06&56.23&Bbr84+Ma4&50.00&43.75&c&BC&Y=8.078 05-2.591 80x&0.967 44&15.30&58.78&Ma3&50.00&43.75&c&BC&Y=7.737 21-2.291 35x&0.988 16&15.65&46.64&Ma2&44.44&37.50&d&C&Y=8.323 49-2.798 60x&0.927 23&15.40&52.12&Bbr84+Ma3&33.33&24.98&e&D&Y=7.538 93-1.762 76x&0.984 51&27.56&49.87&ck&11.11&&&&&&&&]

2.2 不同真菌的僵蟲率 在濃度為1.0×108孢子/mL時，各處理死亡幼蟲24h后均出現僵蟲，Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3僵蟲率分別為66.64%、56.23%、58.78%、46.64%、52.12%和49.87%，其中Ma1僵蟲率最高，達到66.64%，而其它處理的僵蟲率均在60%以下（表1）。說明各供試真菌菌株都能侵染致死蠐螬3齡幼蟲，而Ma1表現出對蠐螬明顯的高毒力。

3 小結與討論

化學農藥的長期施用造成大面積土壤和農作物污染，并對人畜產生危害，而生物防治以其獨特的優越性，在世界范圍得以迅速應用［3-4］。為了探索蠐螬的無公害防治措施，開發利用昆蟲病原真菌資源，本文選用幾種真菌的不同菌株及其混合物對蠐螬進行毒力測定，篩選出對蠐螬高毒力綠僵菌Ma1菌株，其致死率和致死速度均明顯高于其它處理，在花生蠐螬的防治上具有較大的應用價值。

本次篩選的菌株及其混合物的數量較少，建議擴大菌株篩選范圍。同時毒力測定是在室內人為控制的條件下進行的，而田間防效則受到溫濕度等各種環境因子的影響，因此要運用于實際生產中，仍需要進一步研究。

參考文獻

［1］魏鴻鈞，張子良.中國地下害蟲［M］.上海：上海科技出版社，1989.

［2］浦蟄龍，李增智.昆蟲真菌學［M］.合肥：安徽科技出版社，1996.

［3］張克勤.我國殺蟲真菌的研究現狀與展望［J］.植物保護，1996，22（1）：43-46.

［4］謝明杰，宋玉媛，曹文偉，等.微生物殺蟲劑應用的研究進展［J］.遼寧師范大學學報，1998，21（4）：226-229.（責編：張宏民）

endprint

摘要：選擇幾種真菌的不同菌株及其混合物對蠐螬進行毒力測定。結果表明，綠僵菌Ma1較其它菌株校正累積死亡率最高，致死速度最快，平均累計校正死亡率達62.50%，LT50為10.31d，在花生蠐螬的防治上具有較大的應用價值。

關鍵詞：綠僵菌；蠐螬；防治；毒力測定

中圖分類號S476.1文獻標識碼A文章編號1007-7731（2014）13-29-02

蠐螬（Anmala cuprea）是鞘翅目金龜甲幼蟲的總稱，是我國地下害蟲分布最廣、為害最重的一類害蟲，主要為害花生、大豆、麥類、高粱、玉米、甘蔗、棉花等多種大田作物，以及一些中藥材等，其中以為害花生較為嚴重，嚴重時造成作物顆粒無收［1］。長期以來，主要依賴化學農藥防治該害蟲，易使其產生抗性，并且造成土壤中農藥殘留，導致作物產品農藥含量超標，使花生有異味，影響到出口創匯及人體健康。為此，筆者選用幾種真菌的不同菌株及其混合物，分別對蠐螬進行毒力測定，以期篩選出對蠐螬具有高毒力的菌株。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試蟲源 蠐螬幼蟲是5月上旬從安徽省廬江縣采集的越冬幼蟲，室內飼養數天，挑選大小均勻且健康的個體備用。

1.1.2 供試菌種 菌種為安徽農業大學植保學院生防研究室儲存菌種，編號分別為Ma1、Bbr84、Ma2、Ma3、Ma4。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌劑的制備 培養采用薩氏葡萄糖酵母浸膏培養基（SDAY）、蛋白胨馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PPDA）和察氏瓊脂培養基培養（Czapek），置于光照培養箱內26℃下恒溫培養15d后，放入冰箱低溫（4℃）保存備用。用無菌的塑料藥匙將真菌的分生孢子粉刮到一個干凈的盛有10mL0.05%Tween-80潤濕劑的三角瓶中，在渦旋振蕩器上充分振蕩（10min左右），然后按比例稀釋，經血球計數板測定每mL孢子數，通過計算把各菌的孢子懸浮液濃度配成基本一致，即1.0×108孢子/mL，以測定致死中時（LT50），比較各菌種間的毒力［2］。

1.2.2 測定方法 用毛筆將蠐螬3齡幼蟲挑起，在盛有孢子懸浮液的培養皿中浸蘸一下（約3～5s），而后迅速取出，置于潔凈濾紙上，任其爬行，片刻后，移入潔凈的小指型管（1cm×8cm）中單頭飼養。為了避免相互殘殺，每管放一小塊人工飼料。養蟲器皿事先在1%甲醛液中浸泡片刻，取出后涼干備用。不同處理用不同毛筆，避免不同菌株之間相互干擾，影響試驗結果。以0.05%吐溫水為對照，共設7個處理，重復3次，每處理試蟲數30頭。試驗每天定時觀察一次直至化蛹，每次記下死蟲數，并及時將蟲尸移出。蟲尸在26℃保濕培養（相對濕度大于90%）觀察是否有僵蟲出現，統計僵蟲率。

1.2.3 數據處理 計算公式如下：每mL孢子總量=平均每小格孢子數×4×106×稀釋倍數；累積死亡率（%）=（處理的總死蟲數×100）/處理的總蟲數；累積校正死亡率（%）=（處理組累積死亡率-對照組累積死亡率）/（1-對照組累積死亡率）；僵蟲率（%）=僵蟲數×100/總死亡蟲數。

以LT50、校正死亡率及僵蟲率作為分析毒力的指標，將觀察時間分為間隔相等的時間區段，分別統計整理每個時間區段內的累積死亡率，并校正，以時間（d）的對數值為X，死亡率的機率值為Y，采用機率值分析法（Doberski，J.W.1981）算出毒力回歸方程和致死中時（LT50）。

2 結果與分析

2.1 不同真菌菌株對蠐螬的致病效果 由表1可知，幾種真菌的不同菌株及其混合物對蠐螬均有不同程度的致病性，但致死率表現出明顯差異。Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3校正累積死亡率分別為62.50%、50.00%、43.75%、43.75%、37.50%和24.98%，致死中時LT50分別為10.31d、15.06d、15.30d、15.65d、15.40d和27.56d。其中綠僵菌Ma1校正累積死亡率最高，達到了62.50%，而其它處理都≤50.00%，差異極顯著；同時綠僵菌Ma1致死中時LT50最小，為10.31d，而其它處理都＞15d，由此可見綠僵菌Ma1的致病力最強。 表1 不同真菌對蠐螬3齡幼蟲的致病效果及僵蟲率

[處理&累積死亡率（%）&校正累計

死亡率（%）&差異顯著性&回歸方程&相關系數

r& 致死中時

LT50（d）&僵蟲率

（%）&0.05&0.01&Ma1&66.67&62.50&a&A&Y=7.912 35-2.874 40x&0.993 81&10.31&66.64&Bbr84&55.56&50.00&b&B&Y=8.167 74-2.689 32x&0.985 38&15.06&56.23&Bbr84+Ma4&50.00&43.75&c&BC&Y=8.078 05-2.591 80x&0.967 44&15.30&58.78&Ma3&50.00&43.75&c&BC&Y=7.737 21-2.291 35x&0.988 16&15.65&46.64&Ma2&44.44&37.50&d&C&Y=8.323 49-2.798 60x&0.927 23&15.40&52.12&Bbr84+Ma3&33.33&24.98&e&D&Y=7.538 93-1.762 76x&0.984 51&27.56&49.87&ck&11.11&&&&&&&&]

2.2 不同真菌的僵蟲率 在濃度為1.0×108孢子/mL時，各處理死亡幼蟲24h后均出現僵蟲，Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3僵蟲率分別為66.64%、56.23%、58.78%、46.64%、52.12%和49.87%，其中Ma1僵蟲率最高，達到66.64%，而其它處理的僵蟲率均在60%以下（表1）。說明各供試真菌菌株都能侵染致死蠐螬3齡幼蟲，而Ma1表現出對蠐螬明顯的高毒力。

3 小結與討論

化學農藥的長期施用造成大面積土壤和農作物污染，并對人畜產生危害，而生物防治以其獨特的優越性，在世界范圍得以迅速應用［3-4］。為了探索蠐螬的無公害防治措施，開發利用昆蟲病原真菌資源，本文選用幾種真菌的不同菌株及其混合物對蠐螬進行毒力測定，篩選出對蠐螬高毒力綠僵菌Ma1菌株，其致死率和致死速度均明顯高于其它處理，在花生蠐螬的防治上具有較大的應用價值。

本次篩選的菌株及其混合物的數量較少，建議擴大菌株篩選范圍。同時毒力測定是在室內人為控制的條件下進行的，而田間防效則受到溫濕度等各種環境因子的影響，因此要運用于實際生產中，仍需要進一步研究。

參考文獻

［1］魏鴻鈞，張子良.中國地下害蟲［M］.上海：上海科技出版社，1989.

［2］浦蟄龍，李增智.昆蟲真菌學［M］.合肥：安徽科技出版社，1996.

［3］張克勤.我國殺蟲真菌的研究現狀與展望［J］.植物保護，1996，22（1）：43-46.

［4］謝明杰，宋玉媛，曹文偉，等.微生物殺蟲劑應用的研究進展［J］.遼寧師范大學學報，1998，21（4）：226-229.（責編：張宏民）

endprint

摘要：選擇幾種真菌的不同菌株及其混合物對蠐螬進行毒力測定。結果表明，綠僵菌Ma1較其它菌株校正累積死亡率最高，致死速度最快，平均累計校正死亡率達62.50%，LT50為10.31d，在花生蠐螬的防治上具有較大的應用價值。

關鍵詞：綠僵菌；蠐螬；防治；毒力測定

中圖分類號S476.1文獻標識碼A文章編號1007-7731（2014）13-29-02

蠐螬（Anmala cuprea）是鞘翅目金龜甲幼蟲的總稱，是我國地下害蟲分布最廣、為害最重的一類害蟲，主要為害花生、大豆、麥類、高粱、玉米、甘蔗、棉花等多種大田作物，以及一些中藥材等，其中以為害花生較為嚴重，嚴重時造成作物顆粒無收［1］。長期以來，主要依賴化學農藥防治該害蟲，易使其產生抗性，并且造成土壤中農藥殘留，導致作物產品農藥含量超標，使花生有異味，影響到出口創匯及人體健康。為此，筆者選用幾種真菌的不同菌株及其混合物，分別對蠐螬進行毒力測定，以期篩選出對蠐螬具有高毒力的菌株。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試蟲源 蠐螬幼蟲是5月上旬從安徽省廬江縣采集的越冬幼蟲，室內飼養數天，挑選大小均勻且健康的個體備用。

1.1.2 供試菌種 菌種為安徽農業大學植保學院生防研究室儲存菌種，編號分別為Ma1、Bbr84、Ma2、Ma3、Ma4。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌劑的制備 培養采用薩氏葡萄糖酵母浸膏培養基（SDAY）、蛋白胨馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PPDA）和察氏瓊脂培養基培養（Czapek），置于光照培養箱內26℃下恒溫培養15d后，放入冰箱低溫（4℃）保存備用。用無菌的塑料藥匙將真菌的分生孢子粉刮到一個干凈的盛有10mL0.05%Tween-80潤濕劑的三角瓶中，在渦旋振蕩器上充分振蕩（10min左右），然后按比例稀釋，經血球計數板測定每mL孢子數，通過計算把各菌的孢子懸浮液濃度配成基本一致，即1.0×108孢子/mL，以測定致死中時（LT50），比較各菌種間的毒力［2］。

1.2.2 測定方法 用毛筆將蠐螬3齡幼蟲挑起，在盛有孢子懸浮液的培養皿中浸蘸一下（約3～5s），而后迅速取出，置于潔凈濾紙上，任其爬行，片刻后，移入潔凈的小指型管（1cm×8cm）中單頭飼養。為了避免相互殘殺，每管放一小塊人工飼料。養蟲器皿事先在1%甲醛液中浸泡片刻，取出后涼干備用。不同處理用不同毛筆，避免不同菌株之間相互干擾，影響試驗結果。以0.05%吐溫水為對照，共設7個處理，重復3次，每處理試蟲數30頭。試驗每天定時觀察一次直至化蛹，每次記下死蟲數，并及時將蟲尸移出。蟲尸在26℃保濕培養（相對濕度大于90%）觀察是否有僵蟲出現，統計僵蟲率。

1.2.3 數據處理 計算公式如下：每mL孢子總量=平均每小格孢子數×4×106×稀釋倍數；累積死亡率（%）=（處理的總死蟲數×100）/處理的總蟲數；累積校正死亡率（%）=（處理組累積死亡率-對照組累積死亡率）/（1-對照組累積死亡率）；僵蟲率（%）=僵蟲數×100/總死亡蟲數。

以LT50、校正死亡率及僵蟲率作為分析毒力的指標，將觀察時間分為間隔相等的時間區段，分別統計整理每個時間區段內的累積死亡率，并校正，以時間（d）的對數值為X，死亡率的機率值為Y，采用機率值分析法（Doberski，J.W.1981）算出毒力回歸方程和致死中時（LT50）。

2 結果與分析

2.1 不同真菌菌株對蠐螬的致病效果 由表1可知，幾種真菌的不同菌株及其混合物對蠐螬均有不同程度的致病性，但致死率表現出明顯差異。Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3校正累積死亡率分別為62.50%、50.00%、43.75%、43.75%、37.50%和24.98%，致死中時LT50分別為10.31d、15.06d、15.30d、15.65d、15.40d和27.56d。其中綠僵菌Ma1校正累積死亡率最高，達到了62.50%，而其它處理都≤50.00%，差異極顯著；同時綠僵菌Ma1致死中時LT50最小，為10.31d，而其它處理都＞15d，由此可見綠僵菌Ma1的致病力最強。 表1 不同真菌對蠐螬3齡幼蟲的致病效果及僵蟲率

[處理&累積死亡率（%）&校正累計

死亡率（%）&差異顯著性&回歸方程&相關系數

r& 致死中時

LT50（d）&僵蟲率

（%）&0.05&0.01&Ma1&66.67&62.50&a&A&Y=7.912 35-2.874 40x&0.993 81&10.31&66.64&Bbr84&55.56&50.00&b&B&Y=8.167 74-2.689 32x&0.985 38&15.06&56.23&Bbr84+Ma4&50.00&43.75&c&BC&Y=8.078 05-2.591 80x&0.967 44&15.30&58.78&Ma3&50.00&43.75&c&BC&Y=7.737 21-2.291 35x&0.988 16&15.65&46.64&Ma2&44.44&37.50&d&C&Y=8.323 49-2.798 60x&0.927 23&15.40&52.12&Bbr84+Ma3&33.33&24.98&e&D&Y=7.538 93-1.762 76x&0.984 51&27.56&49.87&ck&11.11&&&&&&&&]

2.2 不同真菌的僵蟲率 在濃度為1.0×108孢子/mL時，各處理死亡幼蟲24h后均出現僵蟲，Ma1、Bbr84、Bb84r+Ma4、Ma3、Ma2及Bbr84+Ma3僵蟲率分別為66.64%、56.23%、58.78%、46.64%、52.12%和49.87%，其中Ma1僵蟲率最高，達到66.64%，而其它處理的僵蟲率均在60%以下（表1）。說明各供試真菌菌株都能侵染致死蠐螬3齡幼蟲，而Ma1表現出對蠐螬明顯的高毒力。

3 小結與討論

化學農藥的長期施用造成大面積土壤和農作物污染，并對人畜產生危害，而生物防治以其獨特的優越性，在世界范圍得以迅速應用［3-4］。為了探索蠐螬的無公害防治措施，開發利用昆蟲病原真菌資源，本文選用幾種真菌的不同菌株及其混合物對蠐螬進行毒力測定，篩選出對蠐螬高毒力綠僵菌Ma1菌株，其致死率和致死速度均明顯高于其它處理，在花生蠐螬的防治上具有較大的應用價值。

本次篩選的菌株及其混合物的數量較少，建議擴大菌株篩選范圍。同時毒力測定是在室內人為控制的條件下進行的，而田間防效則受到溫濕度等各種環境因子的影響，因此要運用于實際生產中，仍需要進一步研究。

參考文獻

［1］魏鴻鈞，張子良.中國地下害蟲［M］.上海：上海科技出版社，1989.

［2］浦蟄龍，李增智.昆蟲真菌學［M］.合肥：安徽科技出版社，1996.

［3］張克勤.我國殺蟲真菌的研究現狀與展望［J］.植物保護，1996，22（1）：43-46.

［4］謝明杰，宋玉媛，曹文偉，等.微生物殺蟲劑應用的研究進展［J］.遼寧師范大學學報，1998，21（4）：226-229.（責編：張宏民）

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