基于生物信息學(xué),QSAR及分子對(duì)接的菜籽ACE抑制肽篩選

,,*,吳建

(1.浙江大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)系,浙江杭州 310058;2. 阿爾貝塔大學(xué)農(nóng)業(yè)食品營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院,阿爾伯塔省埃德蒙頓市,加拿大)

基于生物信息學(xué),QSAR及分子對(duì)接的菜籽ACE抑制肽篩選

鄒平1,何國(guó)慶1,*,吳建平2

(1.浙江大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)系,浙江杭州 310058;2. 阿爾貝塔大學(xué)農(nóng)業(yè)食品營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院,阿爾伯塔省埃德蒙頓市,加拿大)

本研究的目的是篩選菜籽蛋白來源的高活性ACE抑制肽。研究中先是利用生物信息學(xué)工具對(duì)菜籽蛋白進(jìn)行計(jì)算機(jī)輔助酶解,建立樣品肽集,再運(yùn)行QSAR模型預(yù)測(cè)IC50值進(jìn)行初篩,而后結(jié)合NANO-Q-TOF質(zhì)譜技術(shù)尋找出6條目標(biāo)多肽,并將目標(biāo)多肽與ACE的Zn2+活性中心進(jìn)行水合分子對(duì)接,結(jié)果表明多肽GRD具有高活性,其預(yù)測(cè)IC50為7.54μmol/L,是一條未報(bào)道的新ACE抑制肽,對(duì)ACE的Zn2+活性中心形成競(jìng)爭(zhēng)性抑制。序列比對(duì)結(jié)果顯示,GRD的來源蛋白是一種Napin蛋白(oleosin-like protein,NCBI中ID:ABD14345),其胃蛋白酶Pepsin酶切位點(diǎn)為ABD14345/50。

菜籽蛋白,ACE抑制肽,生物信息學(xué),QSAR,分子對(duì)接

油菜是我國(guó)主要的油料作物之一,2012年油菜籽產(chǎn)量超過1200萬t,并進(jìn)口近300萬t[1],這些菜籽加工后產(chǎn)生了數(shù)百萬噸的菜粕。菜籽蛋白是一種優(yōu)質(zhì)蛋白,其中儲(chǔ)存蛋白Napin和Cruciferin占60%～70%[2]。目前菜粕主要經(jīng)脫毒、發(fā)酵等加工處理后作為飼料,應(yīng)用在禽類[3],畜類[4]及水產(chǎn)養(yǎng)殖[5]等行業(yè)。

雖然菜籽蛋白已經(jīng)在一些行業(yè)得到應(yīng)用,但對(duì)其深層次的研究還遠(yuǎn)不如雞蛋、牛奶、豆類等傳統(tǒng)的食品源蛋白[6-8]。近年有關(guān)菜籽蛋白源的生物活性肽的研究已取得一定的成果,據(jù)報(bào)道,菜籽蛋白來源的多肽具有多種生物活性,如:抗氧化活性肽(Antioxidant Peptide,AOP)[9],血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽(Angiotensin I-converting Enzyme Inhibitory Peptide,ACEIP)[10]等,其中ACEIP的研究一直備受關(guān)注,主要原因在于高血壓是世界上最嚴(yán)重的健康問題之一,中國(guó)的成年人高血壓發(fā)病率也是越來越高,更讓人擔(dān)憂的是,未成年人和兒童的整體血壓也呈現(xiàn)上升趨勢(shì),所以,研究高血壓的預(yù)防和治療就十分重要[11]。然而雖然藥物治療高血壓的效果明顯,但是副作用也不容小覷,因此開發(fā)新的降壓藥物及功能性食品成為預(yù)防和治療高血壓的有效措施。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE,EC3.4.15.1)在血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)中有著重要作用,所以抑制其活性可以降低血壓。近年有許多ACEIP的研究報(bào)道[12-13],它們都是可能的高血壓預(yù)防治療藥物替代品。

傳統(tǒng)的活性肽研究路線基本上遵循蛋白質(zhì)提取→不同酶的水解及條件優(yōu)化→反復(fù)分離純化→活性測(cè)定→結(jié)構(gòu)鑒定這一路線,不僅耗時(shí)耗力,而且在反復(fù)分離純化過程中活性肽損失嚴(yán)重,更重要的是,目前的分離方法,最終分離純化出水解液中含量較高的多肽,卻很大可能錯(cuò)過了活性更高的。本研究中建立的運(yùn)用生物信息學(xué)工具和QSAR建模預(yù)測(cè),結(jié)合NANO-Q-TOF質(zhì)譜技術(shù),并利用分子對(duì)接進(jìn)行活性評(píng)價(jià)的方法,可以快速高效鑒別和篩選高活性ACE抑制肽,為進(jìn)一步的分離純化和體內(nèi)外活性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

油菜(Brassicanapus)的主要儲(chǔ)存蛋白Napin和Cruciferin以及油體蛋白Oleosin序列來自NCBI蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov),共包括47條Napin序列,32條Cruciferin序列和60條Oleosin序列。

脫油菜粕 購(gòu)自浙江國(guó)豐油脂有限公司(衢州,浙江)；Pepsin(1∶3000) 購(gòu)自Amresco；Thermolysin 購(gòu)自Sigma；其它試劑為分析純。

DEL320型pH計(jì) 梅特勒-托萊多設(shè)備上海有限公司；Milli-Q純水生成系統(tǒng) Millipore,美國(guó)Bedford公司；JB90D型強(qiáng)力電動(dòng)攪拌機(jī) 上海標(biāo)本模型廠；Eppendorf 5417冷凍離心機(jī) 上海艾本德生物技術(shù)國(guó)際貿(mào)易有限公司；DK-8D型電熱恒溫水槽 上海一恒科技有限公司；(NANOLC-Q-TOF)MS4-APIQSTAR液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀 美國(guó)ABI應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菜籽蛋白計(jì)算機(jī)輔助水解及多肽IC50預(yù)測(cè) 計(jì)算機(jī)輔助水解(in-silicoproteolysis)是由在線軟件Peptidecutter(http://www.exp-asy.ch/tools/peptidecutter/)完成,其中單獨(dú)或聯(lián)合使用了Trypsin,Thermolysin和Pepsin,并將水解得到的多肽整理分類構(gòu)建多肽集。ExPASy是瑞士生物信息學(xué)研究所(Swiss Institute of Bioinformatics,SIB)提供的獲取科學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和軟件工具的平臺(tái),Peptidecutter工具就是其中的軟件工具之一,用于預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)序列在特定蛋白酶或化學(xué)物質(zhì)在給定條件下的切割位點(diǎn)。

多肽的IC50值預(yù)測(cè)采用Wu等[14]構(gòu)建的QSAR模型計(jì)算完成,該模型利用20種氨基酸的z值描述符,采用基于偏最小二乘法(PLS)回歸計(jì)算研究了多肽與血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶(ACE)的定量構(gòu)效關(guān)系,對(duì)二肽、三肽IC50的預(yù)測(cè)能力分別為73.2%和71.1%。

其中ACE:1U單位定義為,在標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)條件下,在37℃,1min時(shí)間內(nèi)催化底物(Hippuryl-Histidy-Leucine,HHL),產(chǎn)生1μmol/L馬尿酸所消耗ACE的量；IC50值定義為在確定的檢測(cè)條件下,抑制50%的ACE活性時(shí)所需要的水解產(chǎn)物的濃度[15]。

1.2.2 菜粕水解液的制備 菜粕的預(yù)處理:5%(w/v)的菜粕樣品在配有磁力攪拌系統(tǒng)的80℃水浴中加熱15min,然后冷卻降溫。

Thermolysin單步水解條件:pH為8.0,55℃水浴中水解3h；Pepsin單步水解條件:pH為2.0,37℃水浴中反應(yīng)3h；Thermolysin-Pepsin聯(lián)用兩步水解方法:進(jìn)行Thermolysin單步水解后,迅速降溫并調(diào)節(jié)pH進(jìn)行Pepsin水解。

菜粕的水解在配有pH計(jì)和帶磁力攪拌功能的恒溫水浴的反應(yīng)器中進(jìn)行,并通過滴加1N的NaOH溶液維持水解體系的pH,水解后在95℃水浴中加熱15min終止反應(yīng)。所有水解液均經(jīng)10000r/min離心25min(4℃),上清液冷藏備用。

1.2.3 NANO-Q-TOF尋找目標(biāo)多肽 水解液的分析質(zhì)譜條件:采用離子噴霧方法進(jìn)行離子化,電壓5.50kV,溫度100℃,質(zhì)荷比m/z掃描范圍0～1000；進(jìn)樣量:20μL,并以50%甲醇送樣,流速10μL/min。質(zhì)譜結(jié)果利用儀器配套的BioAnalys軟件系統(tǒng)進(jìn)行分析,對(duì)m/z值進(jìn)行0.02級(jí)差掃描并作圖分析。

1.2.4 水合分子對(duì)接 水分子對(duì)人體的生理生化反應(yīng)有著重要的作用,幾乎參與人體全部的生命活動(dòng),所以在研究多肽與ACE的抑制作用時(shí),必須考慮多肽、水分子、ACE蛋白分子之間的相互作用,而水合分子對(duì)接方法就是通過給多肽及蛋白附加電荷、力場(chǎng)等,模擬和描述其在人體水分子環(huán)境中的相互作用關(guān)系,可以更準(zhǔn)確地解釋多肽對(duì)ACE的抑制機(jī)理。

人體ACE的Zn活性中心用于此次水合分子對(duì)接,ACE-l復(fù)合體晶體結(jié)構(gòu)來源于PDB分子庫(kù)(PDB code:1O86)[16],對(duì)接前去除水分子和lisinopril分子。多肽配體結(jié)構(gòu)由Avogadro軟件構(gòu)建,并采用力場(chǎng)MMFF94優(yōu)化幾何構(gòu)型[17]。用Autodocktools 4合并非極性氫,并添加Gasteiger電荷,其中ACE中的Zn為2+[18]。采用 Autodock 4.2軟件進(jìn)行水合對(duì)接,以Lamarkian遺傳算法進(jìn)行對(duì)接能量評(píng)估[19]。

1.2.5 ACE抑制肽的來源蛋白及位點(diǎn)分析 將篩選所得多肽序列與Napin和Cruciferin蛋白序列進(jìn)行比對(duì),尋找其對(duì)應(yīng)的來源蛋白以及酶切位點(diǎn)。

2 結(jié)果與討論

2.1 QSAR預(yù)測(cè)計(jì)算機(jī)輔助水解多肽的IC50值

在本研究中,選擇了油菜的兩種儲(chǔ)存蛋白Napin和Cruciferin分別用Thermolysin-Pepsin,Thermolysin-Trypsin組合水解得到的2-6肽,進(jìn)行整理得到了數(shù)千的多肽總量以及幾百種不同多肽(表1,表2),其中2肽、3肽種類最多,約占總數(shù)的一半。另外,相比之下,Thermolysin-Pepsin組合得到的多肽數(shù)量和種類比Thermolysin-Trypsin更多,所以在后續(xù)研究中選擇了Thermolysin-Pepsin組合。

表1 Thermolysin-Pepsin計(jì)算機(jī)輔助水解結(jié)果Table 1 Results Of In-Silico Proteolysis By Thermolysin-Pepsin

表3 QSAR預(yù)測(cè)的高活性ACE抑制肽Table 3 Peptides with high predicted ACE inhibitory activity

表4 Q-TOF質(zhì)譜發(fā)現(xiàn)的ACE抑制肽Table 4 ACEIP found by Q-TOF mass spectrometry

表5 多肽/藥物與ACE對(duì)接能量Table 5 Docking energy of peptide/medicine-ACE

利用QSAR模型,對(duì)Thermolysin-Pepsin組合水解獲得的112條二肽和164條三肽的IC50進(jìn)行預(yù)測(cè)篩選,得到23條IC50小于等于10μmol/L的多肽,其中包括3個(gè)二肽,20個(gè)三肽,為進(jìn)一步研究的高活性目標(biāo)多肽(表3)。

表2 Thermolysin-Trypsin計(jì)算機(jī)輔助水解結(jié)果Table 2 Results Of In-Silico Proteolysis By Thermolysin-Trypsin

2.2 NANO-Q-TOF鑒定的目標(biāo)多肽

利用BioAnalys軟件系統(tǒng)的Peptide模塊對(duì)Q-TOF質(zhì)譜結(jié)果進(jìn)行分析,并對(duì)m/z值在0～1000范圍進(jìn)行0.02級(jí)差掃描作圖,并與目標(biāo)多肽的分子量進(jìn)行比對(duì),結(jié)果發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)的23條多肽中有6條存在于水解液中(表4,圖1),說明通過Thermolysin-Pepsin實(shí)際的組合水解確實(shí)獲得了部分的預(yù)測(cè)多肽。實(shí)際獲得的多肽少于理論預(yù)測(cè)數(shù)量的主要原因可能是:雖然經(jīng)過加熱處理,但仍有很大部分菜粕蛋白被纖維等其它成分包裹或部分形成了結(jié)合蛋白,或者由于蛋白結(jié)構(gòu)的折疊隱藏了酶切位點(diǎn),導(dǎo)致其未能與蛋白酶接觸,故不能被完全水解。預(yù)計(jì)在后續(xù)的研究中,采用超聲等處理輔助菜籽蛋白的溶出和展開,將可獲得更多的預(yù)測(cè)多肽。

圖1 菜籽蛋白水解液的Q-TOF結(jié)果Fig.1 Q-TOF mass spectrometry of rapeseed protein hydrolyzate

2.3水合分子對(duì)接

和Captopril這一類藥物類似,多肽對(duì)ACE的抑制也有著復(fù)雜的作用機(jī)理,其中最主要的是一種水分子參與的對(duì)Zn2+活性中心的競(jìng)爭(zhēng)性抑制[20],所以將6個(gè)目標(biāo)多肽與ACE的Zn2+活性中心進(jìn)行分子對(duì)接,并與降血壓藥Captopril、報(bào)道的高活性ACE抑制肽VAP比較,可以從分子層面解析多肽與ACE的相互作用機(jī)理并進(jìn)行篩選。結(jié)果顯示(表5),三肽GRD,IRC的對(duì)接能量與VAP接近,都在-8.0kcal/mol左右,而RW,LRP,LQY和VRY相對(duì)差距較大,所以GRD和IRC是高活性的ACE抑制肽,其中GRD活性最高,其預(yù)測(cè)為7.54μm,且目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)道,是一條新發(fā)現(xiàn)的ACE抑制肽。從圖2可以看到,GRD與ACE的Zn2+活性中心部分疊合,從而對(duì)ACE的催化作用進(jìn)行抑制。另一方面,雖然ACE抑制肽已經(jīng)具有較高活性,但與藥物Captopril相比,其對(duì)接能量還是有較大差距,表明多肽對(duì)ACE的抑制能力還遠(yuǎn)低于Captopril,所以目前這些多肽只可以作為輔助降壓的保健食品,還不能完全替代藥物的作用。

圖2 GRD與ACE的對(duì)接構(gòu)象Fig.2 The docking pose of GRD-ACE

2.4 ACE抑制肽的來源蛋白及酶切位點(diǎn)

將多肽序列與Napin和Cruciferin蛋白序列進(jìn)行比對(duì),得到每條多肽對(duì)應(yīng)的來源蛋白編號(hào)及酶切位點(diǎn),從表6可以看出,同一種多肽可以由不同的蛋白水解產(chǎn)生。獲取多肽對(duì)應(yīng)的來源蛋白編號(hào)及酶切位點(diǎn),對(duì)多肽制備和分離純化及活性具有指導(dǎo)性意義。本研究中篩選獲得的高ACE抑制活性肽GRD,其來源蛋白是一種由187個(gè)氨基酸殘基組成的Napin蛋白(oleosin-like protein,NCBI中ID:ABD14345),可由Pepsin水解獲得。在進(jìn)一步的研究中,我們可以更準(zhǔn)確地分離或合成這種Napin蛋白,并優(yōu)化Pepsin的各種水解條件,實(shí)現(xiàn)目標(biāo)多肽GRD在水解液中的富集,將有利于后續(xù)的分離純化和活性研究。

表6 ACE抑制肽對(duì)應(yīng)的來源蛋白及酶切位點(diǎn)Table 6 The Resource Of ACEIP And The Corresponding Restriction Sites

傳統(tǒng)的酶解→反復(fù)分離純化→活性測(cè)定→結(jié)構(gòu)鑒定路線耗時(shí)耗力成本高,而且在純化過程中多肽損失量較大,往往最終錯(cuò)過了水解液中活性最高的而得到了含量最高的,在一定程度上,是一種數(shù)量主導(dǎo)(Quantity-oriented),而非活性主導(dǎo)(Activity-oriented)。相比之下,本方法借助現(xiàn)在生物信息學(xué)方法,可以預(yù)知水解液中可能存在的活性肽并預(yù)測(cè)活性進(jìn)行初步篩選,而后準(zhǔn)確定位其來源蛋白和酶切位點(diǎn),為蛋白的定向水解提供可能,并為進(jìn)一步的分離純化提供依據(jù),是一種低成本高效率的鑒別和篩選高活性ACE抑制肽的方法。

3 結(jié)論

本研究建立了一種從菜籽蛋白水解液中高效快速篩選高活性ACE抑制肽的方法。通過QSAR預(yù)測(cè)由計(jì)算機(jī)輔助水解菜籽蛋白得到多肽的IC50,并結(jié)合NANO-Q-TOF質(zhì)譜技術(shù)確證了水解液中存在6條ACE抑制肽,分別為RW,GRD,LRP,LQY與VRY,并利用分子對(duì)接方法評(píng)價(jià)其活性,篩選獲得了一條高活性的ACE抑制肽GRD,其預(yù)測(cè)活性為7.54μmol/L,且目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)道,是一條新發(fā)現(xiàn)的ACE抑制肽。與傳統(tǒng)方法相比,此方法成本低且更高效快速準(zhǔn)確。由于此方法是基于生物信息學(xué)的研究結(jié)果及計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展,故可以運(yùn)用于其他天然活性肽的研究,而且隨著酶切位點(diǎn)和數(shù)據(jù)庫(kù)的進(jìn)一步豐富,日后必將有更廣泛的應(yīng)用范圍。

[1]陳艷君. 2012年我國(guó)油菜籽及菜籽油市場(chǎng)分析暨2013年展望[J]. 糧食與油脂,2013(1):44-8.

[2]Murphy DJ,Cummins I,Kang AS. Synthesis of the major oil-body membrane-protein in developing rapeseed(brassica-napus)embryos-integration with storage-lipid and storage-protein synthesis and implications for the mechanism of oil-body formation[J]. Biochem J,1989:258:285-93.

[3]胡永娜,王之盛,李愛科. 固態(tài)發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能、免疫功能及消化酶活性的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2012(7):1293-301.

[4]侯生珍,呂凱,趙宗鵬. 雙低菜籽粕飼喂生長(zhǎng)肥育豬的效果研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011(2):1034-5.

[5]金素雅,葉元土,蔡春芳,等. 4種菜籽餅粕對(duì)草魚生長(zhǎng)性能的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2011(23):349-56.

[6]Coda R,Rizzello CG,Pinto D,etal. Selected Lactic Acid Bacteria Synthesize Antioxidant Peptides during Sourdough Fermentation of Cereal Flours[J]. Applied Environmental Microbiology,2012(78):1087-96.

[7]Yu X,Wu X,Dong D,etal. Purification and Antioxidant Activity Determination of Soybean Peptide Fermented from Soy Film By-products by aspergillus oryzae[J]. Journal of the Chinese Cereals and Oils Association,2012(27):20-3.

[8]Niu L-Y,Jiang S-T,Pan L-J. Preparation and Evaluation of Antioxidant Activities of Peptides Obtained from Defatted Wheat germ by Fermentation[J]. Journal of Food Science and Technology-Mysore,2013(50):53-61.

[9]Zhang S-B,Wang Z,Xu SY. Antioxidant and Antithrombotic Activities of Rapeseed Peptides[J]. Journal of the American Oil Chemical Society,2008(85):521-7.

[10]Wu J,Aluko RE,Muir AD. Purification of Angiotensin I-converting Enzyme-Inhibitory Peptides from the Enzymatic Hydrolysate of Defatted Canola Meal[J]. Food Chemistry,2008(111):942-50.

[11]Liang Y-J,Xi B,Hu Y-H,etal. Trends in Blood Pressure and Hypertension among Chinese Ahildren and Adolescents China Health and Nutrition Surveys[J]. Blood Pressure,2011(1):45-53.

[12]Liu L,Lu B,Xia D,etal. Evaluation of Antihypertensive and Antihyperlipidemic Effects of Bamboo Shoot Angiotensin Converting Enzyme Inhibitory Peptideinvivo[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2012(45):11351-8.

[13]Ming L,Yi S,Chi L,etal. Long-term Antihypertensive Effect of Angiotensin-converting Enzyme Inhibitory Peptide Lap[J]. Kidney Blood Press R,2011(5):358-64.

[14]Wu J P,Aluko R E,Nakai S. Structural Requirements of Angiotensin I-Converting Enzyme Inhibitory Peptides:Quantitative Structure-Activity Relationship Study of Di-and Tripeptides[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2006(54):732-738.

[15]Hyoung Lee D,Ho Kim J,Jeong Sik Park,etal. Isolation and characterization of a novel angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptide derived from the edible mushroom Tricholoma giganteum[J]. Peptides,2004,25(4):621-627.

[16]Natesh R,Schwager SLU,Sturrock ED,etal. Crystal Structure of the Human Angiotensin-Converting Enzyme-Lisinopril Complex[J]. Nature,2003(6922):551-4.

[17]Hanwell MD,Curtis DE,Lonie DC,etal. Avogadro:An Advanced Semantic Chemical Editor,Visualization,and Analysis Platform[J]. Journal of Cheminformatics,2012(4):1-17.

[18]Morris GM,Huey R,Lindstrom W,etal. Autodock4 and Autodocktools4:Automated Docking with Selective Receptor Flexibility[J]. Journal of Compuort Chemistry,2009(16):2785-2791.

[19]Laskowski RA,Swindells MB. Ligplot+:Multiple Ligand-Protein Interaction Diagrams for Drug Discovery[J]. Journal of Chemical Information and Modeling,2011(10):2778-86.

[20]Wang Zhan-Li,Zhang Sai-Sai,Wang Wei,etal. A novel angiotensin-i converting enzyme inhibitory peptide from the milk casein:virtual screening and docking studies[J]. Agricultural Sciences in China,2011,10(3):463-467.

Screening of angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides from rapeseed by bioinformatics,QSAR and molecular docking

ZOUPing1,HEGuo-qing1,*,WUJian-ping2

(1 .Department of Food Science and Nutrition,Zhejiang University,Hangzhou 310058,China;2. Department of Agricultural,Food and Nutritional Science,University of Alberta,Edmonton,Canada)

The purpose of this study was to screen ACE inhibitory peptides with high activity from rapeseed protein hydrolyzate. Firstly a peptide library was established throughin-silicohydrolysis on rapeseed protein,and the IC50values were predicted by the QSAR model. Then six target peptides were found with the combined use of NANO-Q-TOF mass spectrometry. Finally the target peptides were hydrated molecular docked with the Zn2+active sites of ACE. The results indicated that the peptides GRD,with a predicted IC50of 7.54μmol/L,showed high ACE inhibitory activity,and it was a new unreported ACE inhibitory peptide which formed competitive inhibition of the Zn2+active center on ACE. Sequence alignment showed the source protein of GRD was a Napin protein(oleosin-like protein,NCBI in ID:ABD14345),and the Pepsin cleavage sites for GRD was ABD14345/50.

Rapeseed protein;ACEIP;bioinformatics;QSAR;molecular docking

2013-12-02 *通訊聯(lián)系人

鄒平(1985-),男,博士研究生,研究方向:生物活性肽。

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31130042)。

TS201.2

A

1002-0306(2014)17-0000-00

10.13386/j.issn1002-0306.2014.17.001