樟絨枝霉中一種低分子量木聚糖酶的純化及性質(zhì)研究

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(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)工學(xué)院,北京 100083；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院,北京 100083)

樟絨枝霉中一種低分子量木聚糖酶的純化及性質(zhì)研究

李延嘯1,范光森2，江正強(qiáng)2，楊紹青2,閆巧娟1,*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)工學(xué)院,北京 100083；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院,北京 100083)

本文研究了樟絨枝霉(Malbrancheacinnamonmea)S168中一種低分子量木聚糖酶(McXyn25)的純化和酶學(xué)性質(zhì)。采用硫酸銨沉淀和DEAE-52陰離子柱層析兩步純化,得到電泳級(jí)純酶,分子量為25ku。該酶的最適pH為8.0,在pH 4.5～11.0范圍內(nèi)穩(wěn)定；最適溫度為65℃,在60℃以下具有較高的穩(wěn)定性。McXyn25表現(xiàn)出嚴(yán)格的底物特異性,在紙漿漂白方面具有較好的應(yīng)用前景。此外,McXyn25能夠水解木聚糖產(chǎn)生低聚木糖,且無(wú)木糖產(chǎn)生,說(shuō)明該酶適合應(yīng)用于低聚木糖生產(chǎn)。

樟絨枝霉,木聚糖酶,純化,酶學(xué)性質(zhì)

木聚糖作為植物半纖維素的重要組分,是自然界中除纖維素以外含量最豐富的可再生生物質(zhì)資源。木聚糖可被用于降解生產(chǎn)低聚木糖。低聚木糖具有低熱量、潤(rùn)腸通便、難以消化吸收以及促進(jìn)雙歧桿菌增殖等作用,是一種倍受關(guān)注的功能性低聚糖,具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值[1]。目前,生物酶降解法是制備低聚木糖的主要方法之一。木聚糖酶(EC 3.2.1.8)是木聚糖降解酶系中最關(guān)鍵的酶,它能以內(nèi)切方式隨機(jī)作用于木聚糖主鏈上的β-1,4-木糖苷鍵,水解生成木糖及低聚木糖[2]。

嗜熱真菌是耐熱木聚糖酶的主要來(lái)源之一。目前,國(guó)際上已經(jīng)篩選出多株產(chǎn)耐熱木聚糖酶的嗜熱真菌,如嗜熱毛殼菌(Chaetomiumthermophilum)[3]、嗜熱擬青霉(Paecilomycesthermophila)[4]、耐熱子囊菌(Thermoascusaurantiacus)[5]、嗜熱棉毛菌(Thermomyceslanuginosus)[6]和嗜熱側(cè)孢霉(Sporotrichumthermophile)[7]等。樟絨枝霉(Malbrancheacinnamonmea)屬于嗜熱真菌,目前關(guān)于樟絨枝霉及其同屬真菌產(chǎn)木聚糖酶的研究報(bào)道相對(duì)較少。Matsuo等純化了Malbrancheapulchellavar.sulfurea所產(chǎn)的一種木聚糖酶,并研究了其酶學(xué)性質(zhì)[8-10]。Sharma等研究了Malbranchea flava所產(chǎn)的兩種木聚糖酶MFX I和MFX II,其中低分子量MFX I最適pH和最適溫度分別為9.0和70℃[11]。本研究室的范光森[12]等研究了樟絨枝霉所產(chǎn)的纖維質(zhì)降解酶系,發(fā)現(xiàn)其能同時(shí)分泌多種纖維質(zhì)降解酶,嚴(yán)燁[13]等優(yōu)化了樟絨枝霉固體發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶的發(fā)酵條件,但兩者均未對(duì)其相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究。根據(jù)樟絨枝霉的木聚糖酶譜分析表明該嗜熱真菌能夠分泌4種木聚糖酶,亞基分子量分別為25.0、30.0、43.0和70.0ku[12]。本文主要研究該菌所產(chǎn)25.0ku木聚糖酶的純化和酶學(xué)性質(zhì)。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

樟絨枝霉S168 本實(shí)驗(yàn)室自行篩選,并保存于中國(guó)微生物菌種保藏中心(CGMCC,菌株編號(hào):6022)；樺木木聚糖、櫸木木聚糖、燕麥木聚糖、地衣多糖、海帶多糖、大麥葡聚糖、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、果膠、槐豆膠、殼聚糖、對(duì)硝基苯酚化合物(pNP-β-D-glucopyranoside、pNP-β-D-xylopyranoside、pNP-β-D-galacopyranoside、pNP-β-D-fucoranoside和pNP-α-D-glucopyranoside) 均購(gòu)于Sigma公司；DEAE-52纖維素 購(gòu)于Whatman公司；蛋白胨、酵母膏 Oxiod產(chǎn)品；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

LRH-恒溫恒濕培養(yǎng)箱 廣東省醫(yī)療器械廠；HZQ-F160全溫振蕩培養(yǎng)箱 太倉(cāng)實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；TU-1800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器設(shè)備有限責(zé)任公司；Power Pac BasicTM型電泳儀 BIO-RAD；GL-20B高速冷凍離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；PB21型pH計(jì) 德國(guó)賽多利斯；蛋白純化系統(tǒng) 上海青浦滬西儀器廠；立式圓形壓力滅菌鍋 上海醫(yī)用核子儀器廠；JJT-900型潔凈工作臺(tái) 北京半導(dǎo)體設(shè)備一廠；DK-S22型電熱恒溫水浴鍋 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2發(fā)酵產(chǎn)酶

植物蛋白胨酵母瓊脂培養(yǎng)基(PYE,g/L):大豆蛋白胨10,酵母提取物5,葡萄糖40,瓊脂17,pH6.6。

發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):玉米芯(20～40目)30,酵母提取物10,胰蛋白胨10,KH2PO40.6,CaCl20.3,MgSO4·7H2O 0.3,FeSO40.3,pH 7.0。在250mL三角瓶中加入50mL發(fā)酵培養(yǎng)基,121℃滅菌20min。

將樟絨枝霉S168接種于PYE培養(yǎng)基上,50℃培養(yǎng)5d。切下1cm2左右的菌塊接種于50mL發(fā)酵培養(yǎng)基中,45℃ 200r/min條件下,搖瓶發(fā)酵5d。發(fā)酵結(jié)束后,用紗布過(guò)濾,濾液10000r/min離心10min,收集上清液即為粗酶液。

1.3木聚糖酶的純化

將粗酶液置于冰水浴中,緩慢攪拌,同時(shí)緩慢加入硫酸銨干粉,至粗酶液硫酸銨飽和度達(dá)到20%,繼續(xù)攪拌30min后,10000r/min離心10min收集上清液。向上清液中繼續(xù)加入硫酸銨,至硫酸銨飽和度達(dá)到40%,10000r/min離心10min收集沉淀。將沉淀用20mmol/L的磷酸緩沖液(pH7.2)溶解,在相同緩沖液體系中4℃透析過(guò)夜。

用20mmol/L pH7.2的磷酸緩沖液平衡DEAE-52離子交換柱,將透析好的酶液上樣。上樣后用相同緩沖液洗脫,分部收集洗脫液。整個(gè)過(guò)程流速為1mL/min。測(cè)定收集管中的木聚糖酶活力,并進(jìn)行電泳分析。

1.4木聚糖酶活力及蛋白濃度的測(cè)定

木聚糖酶活力測(cè)定:0.1mL適當(dāng)稀釋的酶液,加入到0.9mL 1%的樺木木聚糖底物溶液中(用50mmol/L pH 7.0的磷酸緩沖液配制),60℃水浴反應(yīng)10min,采用3,5-二硝基水楊酸(DNS)法[14]測(cè)定所釋放的還原糖量,同時(shí)以木糖作為標(biāo)準(zhǔn)。木聚糖酶的活力單位定義為:在上述反應(yīng)條件下,每分鐘反應(yīng)生成1μmol的還原糖(以木糖計(jì))所需要的酶量為一個(gè)酶活力單位(1U)。比酶活定義為1mg蛋白所具有的酶活力單位,表示為U/mg。

蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定按照Lowry法[15]進(jìn)行,以牛血清蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。

1.5 SDS-PAGE、木聚糖酶酶譜及分子量測(cè)定

SDS-PAGE電泳按照Laemmli[16]的方法進(jìn)行。分離膠濃度為12.5%,濃縮膠4.5%,電泳結(jié)束后用考馬斯亮藍(lán)R-250染色。木聚糖酶酶譜參照楊紹青等[17]的方法。

木聚糖酶變性和活性狀態(tài)下的分子量分別采用SDS-PAGE和Superdex-75凝膠過(guò)濾層析法測(cè)定[18]。凝膠過(guò)濾層析法中,緩沖液體系為含100mmol/L NaCl的20mmol/L磷酸緩沖液(pH7.2),測(cè)定用的標(biāo)準(zhǔn)蛋白為牛血清蛋白(68.0ku)、卵清白蛋白(45.0ku)、胰凝乳蛋白酶原A(25.7ku)及細(xì)胞色素c(12.3ku),整個(gè)過(guò)程流速為0.3mL/min。

1.6木聚糖酶的最適pH和pH穩(wěn)定性

木聚糖酶最適pH的測(cè)定:采用50mmol/L pH3.0～11.0范圍內(nèi)的緩沖液配制樺木木聚糖底物(1%,w/v),按標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定木聚糖酶酶活,以最大值為100%,分別計(jì)算各pH條件下的相對(duì)酶活。緩沖液體系包括:Citrate-Na2HPO4(3.0～6.0)、MES(5.5～6.5)、MOPS(6.5～7.5)、Tris-HCl(7.0～9.0)、CHES(8.0～10.0)、Gly-NaOH(9.0～10.5)、CAPS(10.0～11.0)和NaH2PO4-NaOH(10.5～12)。pH穩(wěn)定性的測(cè)定:將酶液與上述不同pH的緩沖液混合后,于50℃水浴保溫30min,立即冰水浴冷卻30min,在最適pH下按標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定殘余酶活力,以未經(jīng)處理的酶液為對(duì)照,分別計(jì)算各pH緩沖液處理后的殘余酶活。

1.7木聚糖酶的最適溫度和溫度穩(wěn)定性

最適反應(yīng)溫度的測(cè)定:用50mmol/L pH8.0的CHES緩沖液配制的樺木木聚糖底物(1%,w/v),在30～90℃范圍內(nèi)測(cè)定木聚糖酶活力,以最大值為100%,分別計(jì)算各溫度下的相對(duì)酶活。溫度穩(wěn)定性的測(cè)定:將酶液與50mmol/L pH8.0的CHES緩沖液混合,置于不同溫度下保溫30min,立即冰水浴冷卻30min,在最適溫度下按照標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定酶活,以未經(jīng)處理的酶液為對(duì)照,分別計(jì)算各溫度處理后的殘余酶活。

半衰期的測(cè)定:將酶液與50mmol/L pH8.0的CHES緩沖液混勻,分別置于50、55、60和65℃水浴中保溫不同時(shí)間,間隔取樣后立即冰水浴冷卻30min,在最適溫度下按標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定殘余酶活,以未經(jīng)處理的酶液為對(duì)照,分別計(jì)算處理后的殘余酶活。

1.8金屬離子和化合物對(duì)木聚糖酶的影響

將木聚糖酶酶液與不同金屬離子和化合物(終濃度1mmol/L)混勻,置于50℃條件下保溫30min,立即冰水冷卻30min,以加入相同濃度金屬離子和化合物的緩沖液為空白,在最適條件下按標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定木聚糖酶活力。以不加入金屬離子的酶活力為100%,計(jì)算相對(duì)酶活力及比酶活力。

金屬離子及化合物包括:Fe3+、Cu2+、Mn2+、Ca2+、Na+、Co2+、Zn2+、K+、Ni2+、Ag+、Fe2+、Sn2+、Ba2+、Cr3+、Hg2+、Li+、Mg2+、乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、二硫蘇糖醇(DTT)、β-巰基乙醇。

1.9木聚糖酶的底物特異性

用50mmol/L pH8.0的CHES緩沖液配制不同種類(lèi)的聚糖(1%,w/v)或人工合成化合物(5mmol/L)底物,在65℃下按標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定酶活力,以木聚糖酶對(duì)樺木木聚糖的酶活力為100%,分別計(jì)算木聚糖酶對(duì)各種底物的比酶活力和相對(duì)酶活力。以人工合成化合物為底物時(shí)在410nm下測(cè)定釋放對(duì)硝基苯酚(pNP)的量。一個(gè)酶活力單位(U)定義為在上述條件下每分鐘釋放1μmol pNP或還原糖所需酶的量。

聚糖底物包括:樺木木聚糖、櫸木木聚糖、燕麥木聚糖、地衣多糖、海帶多糖、大麥葡聚糖、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、果膠、槐豆膠、殼聚糖。人工合成底物包括:pNP-β-D-glucopyranoside、pNP-β-D-xylopyranoside、pNP-β-D-galacopyranoside、pNP-β-D-fucoranoside和pNP-α-D-glucopyranoside。

1.10木聚糖酶水解特性

用50mmol/mL pH8.0的CHES緩沖液配置濃度為1%(w/v)的木聚糖(樺木木聚糖、櫸木木聚糖和燕麥木聚糖)和低聚木糖(木二糖、木三糖、木四糖),分別加入5U/mL的木聚糖酶,50℃水浴水解,間隔取樣后立即沸水浴10min滅活,然后采用薄層層析法(TLC)分析水解產(chǎn)物。

薄層層析法:硅膠板Merck Slica Gel 254,展層劑為正丁醇∶乙酸∶水(2∶1∶1),顯色劑為甲醇∶濃硫酸(95∶5)。用木糖和低聚木糖作為標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與討論

2.1木聚糖酶純化

粗酶液經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀、陰離子交換層析純化后得到電泳級(jí)純酶(McXyn25)(圖1),純化過(guò)程中酶活力回收率為6.36%,木聚糖酶純化倍數(shù)為15.4,木聚糖酶比酶活升高到2182.5U/mg(表1)。該酶的純化倍數(shù)與酶活回收率偏低,主要是由于樟絨枝霉S168能夠產(chǎn)多種木聚糖酶,而McXyn25只是其中之一。這與菌株MalbrancheaflavaMTCC 4899相似,其產(chǎn)生的木聚糖酶MFX I和MFX II的酶活回收率和純化倍數(shù)也相對(duì)較低[11]。

表1 樟絨枝霉McXyn25純化表Table 1 Purification parameters of the McXyn25

圖1 樟絨枝霉McXyn25純化圖Fig.1 SDS-PAGE analysis of purified McXyn25注:M:低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白；1:粗酶液； 2:20%～40%硫酸銨沉淀； 3:DEAE-52層析；4：純酶(酶譜)。

注:a酶活力測(cè)定:以1%樺木木聚糖為底物,在50mmol/L pH 7.0的磷酸緩沖液體系下,于60℃反應(yīng)10min。b蛋白量測(cè)定:Lowry法[15],牛血清蛋白(BSA)為標(biāo)準(zhǔn)。

采用SDS-PAGE法測(cè)定McXyn25的分子量為24.8ku,采用Superdex75凝膠層析方法測(cè)定分子量為24.6ku,表明該酶為單亞基蛋白。與M. flava MTCC 4899[11]所產(chǎn)木聚糖酶MFX I相似,其分子量為25.2ku。

2.2酶學(xué)性質(zhì)

McXyn25在pH 8.0 CHES緩沖體系下酶活力最高,在pH 4.5～9.5之間時(shí),酶活力殘留50%以上(圖2A)。該酶在pH 4.5～11.0時(shí)表現(xiàn)出了很好的穩(wěn)定性,50℃下保溫30min后的木聚糖酶活力損失均在10%之內(nèi)(圖2B)。McXyn25的最適溫度為65℃。當(dāng)反應(yīng)溫度在50～75℃之間時(shí),木聚糖酶殘余酶活在50%以上(圖2C)。該酶在60℃以下的環(huán)境中具有良好的穩(wěn)定性,保溫30min后酶活力損失在6%之內(nèi),然而當(dāng)溫度升高到65℃時(shí),酶活力迅速下降,殘留酶活力為最高值的60%(圖2D)。McXyn25在50、55、60和65℃條件下的半衰期分別為2322.6、1402.2、207.7、107.3min。

圖2 McXyn25的最適pH(A)、pH穩(wěn)定性(B)、 最適溫度(C)及溫度穩(wěn)定性(D)Fig.2 Optimum pH(A),pH stability(B), optimum temperature(C)and temperature stability(D)of McXyn25

McXyn25的最適溫度和溫度穩(wěn)定性與大部分嗜熱真菌所產(chǎn)相似分子量木聚糖酶相似[19-21],但具有良好的耐堿性,即該酶具有較高的最適pH及較寬的pH穩(wěn)定范圍[4,7,21-23]。ChaetomiumthermophilumNIBGE1中克隆表達(dá)的分子量為24ku木聚糖酶的最適pH為6.5,在5.5～8.5范圍內(nèi)穩(wěn)定[22]。ThermomyceslanuginosusTHKU-49一種分子量為24.9ku的木聚糖酶其最適pH為6.0,僅在pH 3.5～8.0條件下穩(wěn)定[23]。Zhang[4]等克隆表達(dá)PaecilomycesthermophilaJ18的28ku木聚糖酶,該重組酶的最適pH為7.0,在pH6.5～10.5范圍內(nèi)穩(wěn)定。SporotrichumthermophileATCC 34628分子量為24ku木聚糖酶StXyn1的最適pH為5.0,在pH4.0～8.0條件下穩(wěn)定[7]。

2.3金屬離子及化合物對(duì)木聚糖酶活力的影響

不同金屬離子及化合物對(duì)McXyn25酶活力的影響結(jié)果如表2所示。Co2+、Sn2+、Li+能夠顯著提高木聚糖酶酶活力,而Zn2+、Hg+、Mn2+則對(duì)該酶具有明顯的抑制作用。此外,SDS對(duì)該酶有一定促進(jìn)作用,說(shuō)明該酶的酶活力不依賴于金屬離子。其他金屬離子和化合物對(duì)該酶酶活力影響均較小,表明該酶具有很好的金屬離子耐受性。與之相較,在Sharma[11]等人的研究中,SDS、DTT、β-巰基乙醇、Fe3+對(duì)M. flava MTCC 4899所產(chǎn)木聚糖酶MFX I存在一定的抑制作用,而Zn2+、Ca2+能夠提高M(jìn)FXI酶活。

表2 金屬離子及化合物對(duì)McXyn25酶活力的影響Table 2 Effect of metal ions and chemical reagents on the activity of McXyn25

注:a 酶活力測(cè)定:以1%樺木木聚糖為底物,在50mmol/L pH8.0的CHES緩沖液體系下,于65℃反應(yīng)10min,表3同。

2.4木聚糖酶的底物特異性

McXyn25對(duì)天然底物特異性測(cè)定結(jié)果如表3所示。McXyn25對(duì)燕麥木聚糖的比酶活力最高(4583.6U/mg),是對(duì)樺木木聚糖比酶活的150.9%；櫸木木聚糖次之(3302.8U/mg)。該酶以羧甲基纖維素、微晶纖維素、大麥葡聚糖、地衣多糖等其他天然和人工合成多糖以及人工合成糖苷底物為底物時(shí)均沒(méi)有表現(xiàn)出活性。說(shuō)明McXyn25對(duì)木聚糖有嚴(yán)格的底物特異性,較為適合應(yīng)用于紙漿漂白等需要特異性降解半纖維素的工業(yè)應(yīng)用中。不同的是,M.flavaMTCC 4899所產(chǎn)木聚糖酶MFX I不僅能夠降解木聚糖酶底物,同時(shí)可以降解地衣多糖[11]。

表3 樟絨枝霉McXyn25底物特異性Table 3 Substrate specificity of the purified McXyn25

2.5木聚糖酶的水解特性

圖3 McXyn25水解木聚糖和低聚木糖的產(chǎn)物TCL分析Fig.3 TLC analysis of the hydrolytic products of xylan and xylooligosaccharides by McXyn25注:X1:木糖；X2:木二糖；X3:木三糖； X4:木四糖；X5:木五糖。 A:樺木木聚糖水解；B:櫸木木聚糖水解； C:燕麥木聚糖水解D:木糖、木二糖、 木三糖水解；E:木四糖水解。

McXyn25水解樺木木聚糖、櫸木木聚糖、燕麥木聚糖及低聚木糖的水解產(chǎn)物薄層層析結(jié)果如圖3所示。McXyn25水解樺木木聚糖的產(chǎn)物前期主要為聚合度在2～5之間的低聚木糖,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),木四糖、木五糖含量逐漸減少,木二糖、木三糖的含量逐漸增多(圖3A),這可能是由于隨著水解時(shí)間的延長(zhǎng),前期產(chǎn)生的木四糖、木五糖被水解為木二糖和木三糖。櫸木木聚糖的水解過(guò)程與樺木木聚糖相似,最終主要產(chǎn)生木二糖及木三糖(圖3B)。在燕麥木聚糖的水解過(guò)程中,隨著水解時(shí)間的延長(zhǎng),產(chǎn)物中聚合度在2-5之間的低聚木糖含量均逐漸增加(圖3C),可能是由于大分子量木聚糖持續(xù)被水解所致。McXyn25能夠水解木四糖生產(chǎn)木三糖和木二糖,而不能水解木三糖和木二糖(圖3D、E)。值得注意的是McXyn25在水解木聚糖和低聚木糖底物時(shí),均沒(méi)有木糖生成,說(shuō)明該酶存在轉(zhuǎn)糖苷作用。M. flava MTCC 4899所產(chǎn)兩種木聚糖酶在水解木聚糖底物時(shí),均有一定量的木糖生成[11]。可見(jiàn),與MFX I相比McXyn25在生產(chǎn)低聚木糖方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

3 結(jié)論

樟絨枝霉發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨沉淀和DEAE-52陰離子交換層析兩步純化后,得到一種分子量為25ku的電泳級(jí)純酶(McXyn25)。McXyn25的最適pH為8.0,且能在pH 4.5～11.0范圍內(nèi)保持穩(wěn)定,可見(jiàn)該酶具有較好的耐堿性。其最適溫度為65℃,在60℃以下穩(wěn)定,具有一定的耐熱性。同時(shí),該酶具有嚴(yán)格的底物特異性,可以水解多種木聚糖產(chǎn)生低聚木糖,無(wú)木糖生成。McXyn25具有良好的耐堿性、穩(wěn)定性、底物特異性和水解特性,在低聚木糖生產(chǎn)等方面具有良好的應(yīng)用前景。此外,由于該酶的分子量較小,有利于其在紙漿中溶解擴(kuò)散,可見(jiàn)該酶在紙漿漂白等中高溫堿性生產(chǎn)條件中也有一定的應(yīng)用潛力。

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Purification and characterization of a low molecular xylanase fromMalbrancheacinnamonmea

LIYan-xiao1,FANGuang-sen2,JIANGZheng-qiang2,YANGShao-qing2,YANQiao-juan1,*

(1. College of Engineering,China Agricultural University,Beijing 100083,China;2. College of Food Science and Nutritional Engineering,China Agricultural University,Beijing 100083,China)

A low molecular xylanase(McXyn25)fromMalbrancheacinnamonmeaS168 was purified and characterized. The xylanase was purified to homogeneity by ammonium precipitation and anion-exchange chromatography with a subunit molecular mass of 25ku. The xylanase was most active at pH 8.0 and 65℃,and was stable with in pH 4.5～11.0 and under 60℃. The xylanase displayed strict substrate specificity,indicating that the enzyme had good application prospect in pulp bleaching. Moreover,the enzyme hydrolyzed various xylans to yield mainly xylooligosaccharides without xylose. Therefore,it may be suitable for the production of xylooligosaccharides.

Malbrancheacinnamonmea;xylanase;purification;enzymatic characterization

2013-11-27 *通訊聯(lián)系人

李延嘯(1989-),男,博士,研究方向：農(nóng)產(chǎn)品加工工程。

國(guó)家杰出青年科學(xué)基金(31325021)。

TS

A

1002-0306(2014)17-0000-00

10.13386/j.issn1002-0306.2014.17.001