EphB4和VEGF在食管癌中表達與其胸腔鏡下根治術療效的相關性研究

張明燦，游 凱，黃 一，張明靜，陳虎平，裴家強，龔文清，游振飛

（1.解放軍三二四醫院心胸外科，重慶 400000；2.解放軍后勤工程學院醫院門診部，重慶 400000）

食管癌是臨床上較常見的消化道腫瘤，其發病率和致死率都較高。我國是食管癌的高發地區之一，每年的死亡人數在13萬人以上。尋找食管癌的特異性表達因子不管是對臨床療效、預后的評定，還是對新的治療方案的選擇都具有非常重要的臨床價值［1］。目前，腫瘤微血管密度（MVD）與實體腫瘤的關系越來越受到有關學者的關注。促紅細胞生成素的肝細胞癌B4受體（EphB4）屬于酪氨酸激酶受體家族的一員，在腫瘤的發生、發展過程中用起到重要的作用；血管內皮生長因子（VEGF）被認為是直接參與腫瘤血管生成的基因；MVD是反映腫瘤生物學行為的指標之一［2］。但是，食管癌組織中EphB4和VEGF的表達與MVD的關系仍尚未闡明，有關文獻報道較少［3］。因此，本研究旨在探討EphB4、VEGF在食管癌中的表達及其與血管密度的關系，并分析胸腔鏡下行根治術的療效，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年5月至2013年8月經行胸腔鏡改良Ivor－Lewis根治術治療的食管癌患者76例，其中男41例，女35例，年齡38～72歲，平均（56.24±17.35）歲。病理診斷為鱗癌50例，腺癌18例，腺鱗癌8例；TNM分期為Ⅰ期15例，Ⅱ期20例，Ⅲ期30例，Ⅳ期11例。并于術中采集全部患者食管癌組織標本及其對應的癌旁組織。

1.2 試劑與操作方法 EphB4兔抗人多克隆抗體（1∶50）由上海領成生物科技有限公司提供，VEGF單克隆抗體（1∶50）由福州邁新生物技術開發有限公司提供，CD34鼠抗人單克隆抗體（1∶50）由北京翰譜醫藥生物研究所提供，操作均按說明書進行。采用免疫組織化學法檢測癌組織標本及癌旁組織中EphB4、VEGF、CD34的表達。用已知陽性標本作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。實驗步驟按試劑盒說明書進行，DAB顯色后用蘇木素復染。

1.3 結果判斷 EphB4、VEGF表達：以細胞質、細胞膜和血管內皮細胞中出現棕褐色顆粒為陽性細胞。MVD表達：參照Weidner［4］的方法，先用低倍鏡尋找“熱點”（血管密集區），換用高倍鏡，隨機選擇5個不同視野以計數微血管數（直徑大于50 μm或管壁含有肌層則不計入范疇），算出平均值為MVD值。

1.4 統計學處理 采用SPSS15.0統計軟件進行分析，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 EphB4和VEGF在食管癌及癌旁組織中的表達情況EphB4、VEGF的陽性表達主要位于細胞質，其次為細胞膜和血管內皮細胞，見圖1、2。EphB4、VEGF在癌組織的陽性表達率分別為57.89%、61.84%顯著高于癌旁組織的0和7.89%（P＜0.05）。見表1。

圖1 EphB4在食管癌組織中的表達（×200）

2.2 EphB4、VEGF表達與 MVD的關系 食管癌EphB4表達陽性率為57.89%（44／76），200倍視野下，MVD為（28.24±6.32）個，以28個為界，評定大于28個為 MVD高組，小于或等于28個為 MVD低組；VEGF表達陽性率為61.84%（47／76），200倍視野下，MVD為（36.15±8.73）個，以36個為界，評定大于36個為MVD高組，小于或等于36個為MVD低組。其中高組的EphB4、VEGF陽性表達率分別為67.44%、76.19%顯著高于低組的45.45%、44.11%（P＜0.05）。見表2。

表1 EphB4和VEGF在食管癌及癌旁組織中的表達情況

圖2 VEGF在食管癌組織中的表達（×200）

2.3 EphB4、VEGF表達與患者臨床療效的關系 有淋巴結轉移組和有復發組的EphB4、VEGF表達陽性率分別為80.00%、82.22%和65.21%、72.00%，顯著高于無淋巴結轉移組和無復發組的45.16%、58.06%和32.08%、37.25%，差異有統計學意義（P＜0.05）；大于或等于5年生存率的患者中EphB4、VEGF表達陽性率分別為45.00%和45.45%，顯著低于小于5年生存率的患者80.36%和85.19%，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 EphB4、VEGF表達與患者臨床療效的關系

3 討 論

目前已有文獻報道，EphB4在多種癌組織中呈高表達，但在對應的癌旁組織中卻低表達，甚至不表達，如：前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌及膀胱癌等［5－6］。本研究中，應用免疫組織化學法對76例食管癌和癌旁組織中EphB4的表達進行檢測，結果發現，癌組織中44例呈陽性表達，而癌旁組織中陽性表達為0例，這與上述報道相吻合。但VEGF除了在癌組織中高表達外，還在癌旁組織呈少量表達。本研究結果顯示，VEGF在癌組織中的陽性表達主要位于細胞質和細胞膜，陽性表達率為61.84%，在癌旁組織的陽性表達率為7.89%。這與產松苗等［7］的報道相似。EphB4和VEGF不僅參與食管癌血管的生成，還與淋巴結轉移、復發及術后5年生存率有關［8］。本研究結果顯示，EphB4和VEGF陽性表達組的淋巴結轉移和復發的發生率均顯著高于EphB4和VEGF陰性表達組；大于或等于5年生存率的患者中EphB4、VEGF表達陽性率分別為45.00%和45.45%，顯著低于小于5年生存率的患者的80.36%和85.19%。說明，胸腔鏡下根治術后EphB4和VEGF陽性表達的患者，易出現淋巴結轉移和復發，且5年生存率較低；亦提示EphB4和VEGF陽性表達者術后療效較差［9］。MVD在腫瘤生長、侵襲及轉移的過程中起著重要的作用。CD34是血管內皮細胞的特異性標志物，通過免疫組織化學CD34染色判斷可測定 MVD，從而可反映腫瘤組織血管密度的表達水平，且特異性和敏感性更強［10］。本研究結果發現，MVD高的患者EphB4、VEGF陽性表達率分別為67.44%和76.19%，顯著高于MVD低的患者45.45%和44.11%。說明EphB4和VEGF均可促進食管腫瘤血管生成［11］。

綜上所述，EphB4和VEGF在食管癌中高表達，與血管密度密切相關，與淋巴結轉移、復發及患者5年生存率有關；EphB4和VEGF陽性表達者術后療效較差。

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