益艾康膠囊對無癥狀期HIV感染者T淋巴細胞亞群的影響＊

劉萍萍，李倩如△，軒小燕，董子明，王 哲，杜 英

（鄭州大學基礎醫學院：1.微生物學與免疫學教研室；2.病理生理學教研室，鄭州 450001；3.河南省疾病控制中心性病艾滋病研究所，鄭州 450016）

獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）即艾滋病是由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）引起的免疫缺陷型疾病，導致CD4＋T細胞數量進行性減少，機體免疫功能缺失，最終引起機體各種機會性感染和腫瘤以致死亡。機體感染HIV后發展為AIDS的過程可大致分為3個階段：急性感染期、無癥狀期、AIDS期。目前，對AIDS的預防尚缺乏有效的特異性疫苗，世界普遍公認的有效治療手段是高效抗逆轉錄病毒療法（highly active antiretroviral therapy，HAART），但對無癥狀 HIV感染者，因尚未達到HAART療法應用標準，現無合適藥物可用。若任病情逐漸進展，不利于疾病的早期控制?；诖朔N原因，充分發揮中醫藥的優勢，對無癥狀HIV感染者進行中醫藥早期干預治療，以延緩感染者發病進程，提高感染者生存質量，具有重大現實意義。益艾康膠囊由人參、黃芪等多種中藥組成，具有健脾補胃，益氣養血、化痰解毒之功效，能增加機體免疫功能。故本研究通過檢測HIV早期無癥狀感染者經益艾康膠囊干預治療后CD4＋、CD8＋T細胞亞群的表達，探討益艾康藥物對T細胞亞群功能的影響，試圖尋找到能準確、敏感反映病情進展和藥物療效的指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 60例無癥狀HIV感染者（HIV抗體陽性、并經確認試驗證實，CD4＋T細胞介于200～500個／μL之間，僅表現為淋巴結腫大，未出現機會感染和腫瘤），其中，男34例，女26例，年齡35～45歲，均系河南確山縣及尉氏縣經有償獻血感染者。將上述60例感染者隨機分為兩組：益艾康干預組30例，接受益艾康膠囊干預治療6個月；對照組30例，未接受任何抗病毒治療。益艾康膠囊主要藥物組成：人參、黃芪、炒白術、茯苓、當歸、川芎、白芍、黃芩等。由河南省中醫藥研究院研制，規格：0.5g／粒，60粒／瓶，每次3.0g，每日3次。

1.2 主要試劑和儀器 10mL乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝負壓真空采血管、免洗溶血劑、CD4／CD8／CD3三色單抗標記試劑盒，FITC－CD4、FITC－CD8、PE－CD45RA、PE－CD45RO、PECD95、PE－CD28和PE－CD38單抗及同型對照抗體、流式細胞儀FASCAN，均為Becton Dicknson公司產品。

1.3 標本采集 用10mL EDTA抗凝真空負壓采血管采集受試者靜脈血5mL，4℃冷藏保存運輸。

1.4 細胞絕對值計數 將20μL CD4／CD8／CD3三色單抗加入絕對計數管中，加入50μL抗凝全血，室溫避光15min，加入免洗溶血素450μL室溫避光15min，流式細胞儀檢測，FACSMULTISET軟件自動分析，得到CD4＋、CD8＋、CD3＋淋巴細胞絕對值、百分比及CD4／CD8比值。

1.5 淋巴細胞亞群檢測 取5mL抗凝靜脈血加入紅細胞裂解液2mL，振蕩混勻后繼續孵育15min，1 500r／min離心5 min收集細胞，用PBS溶液洗2次，去上清液，再重懸于PBS溶液中，取100μL細胞懸液，加入相應的熒光標記抗體各5 μL，室溫避光孵育30min，離心后棄上清液，每管加0.5mL PBS液，上流式細胞儀檢測，每管收集5 000個細胞進行分析。

1.6 統計學處理 采用SPSS10.0進行統計學處理，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 益艾康膠囊治療前、后病毒載量變化情況 益艾康干預組干預后感染者病毒載量與藥物干預前相比有所下降（P＜0.05），見表1。

2.2 益艾康膠囊干預對外周血CD4＋T淋巴細胞亞群的影響益艾康干預前，干預組和對照組CD4計數經t檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）；干預6個月后干預組CD4計數與對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。無癥狀HIV感染者接受益艾康膠囊干預后外周血CD4＋CD45RA＋、CD4＋CD45RO＋、CD4＋CD28＋、CD4＋CD95＋細胞比例顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表1 益艾康膠囊干預前、后兩組患者病毒載量比較±s）

表1 益艾康膠囊干預前、后兩組患者病毒載量比較±s）

＊：P＜0.05，與干預組干預前比較。

病毒載量（log 10copy／mL）組別干預前 干預后干預組 4.55±1.25 3.47±0.79＊對照組4.37±0.87 4.78±1.14

表2 兩組患者干預前、后CD4計數比較±s，個／μL）

表2 兩組患者干預前、后CD4計數比較±s，個／μL）

＊：P＜0.05，與對照組干預后比較。

時間 干預組 對照組干預前437.64±64.12 431.25±65.67干預后 546.23±87.65＊406.48±75.81

表3 兩組患者外周血CD4＋T淋巴細胞亞群比例比較［s），%］

表3 兩組患者外周血CD4＋T淋巴細胞亞群比例比較［s），%］

＊：P＜0.05，與對照組比較。

組別 CD4＋ CD4＋CD45RA＋ CD4＋CD45RO＋ CD4＋CD28＋ CD4＋CD95＋干預組 25.81±3.21＊ 9.21±1.24＊ 12.69±2.53＊ 12.05±2.67＊ 17.41±3.08＊對照組 13.43±1.85 4.17±0.87 9.80±2.14 9.04±1.78 8.56±1.74

2.3 益艾康膠囊干預對外周血CD8＋T淋巴細胞亞群的影響

益艾康膠囊干預組CD8＋、CD8＋CD38＋T細胞比例顯著低于對照組（P＜0.05）；而兩組CD8＋CD95＋T細胞比例比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表4。

表4 兩組患者外周血CD8＋T淋巴細胞亞群比例比較±s），%］

表4 兩組患者外周血CD8＋T淋巴細胞亞群比例比較±s），%］

＊：P＜0.05，與對照組比較。

組別 CD8＋ CD8＋CD38＋ CD8＋CD95＋干預組 50.90±5.67＊ 40.52±4.23＊41.18±4.17對照組64.48±5.81 57.15±4.79 42.50±3.84

3 討 論

AIDS是由HIV感染引起的以細胞免疫缺陷為主的繼發性免疫缺陷病。HIV感染屬慢發病毒感染，一般有較長潛伏期。但是，一旦發病，疾病往往呈進行性加重。目前，HAART療法主要是針對AIDS期患者，而HIV感染后的無癥狀期持續時間長，感染者數量最多。根據中醫學“未病先防、既病防變”的學術思想，可把無癥狀期作為中醫藥治療AIDS的切入點，對此期感染者進行免疫學和病毒學指標的監控，有利于及時了解病情并采取相應的治療方案，控制疾病進展［1－2］。近年來，國內外對于中醫藥治療艾滋病進行了多方面探索，中醫藥在改善臨床癥狀、減輕病痛、延緩病情進展、維護免疫功能的穩定、減輕西醫聯合抗病毒治療藥物的毒副作用等方面展現出較大的優勢［3］，但其機制多不明了。

外周血CD4細胞的絕對值對于HIV感染狀況、臨床分期、預測機會性感染的可能性和治療效果的評價具有極其重要的作用［4］。本研究結果顯示，經過益艾康膠囊干預6個月后，患者CD4＋T淋巴細胞絕對值上升，與干預前相比，差異有統計學意義（P＜0.05），并且與對照組相比CD4＋T的百分率顯著提高，提示HIV感染無癥狀期服用益艾康膠囊可以明顯穩定或減緩CD4＋T淋巴細胞的下降幅度，促進免疫功能重建，同時通過抑制病毒復制或其他作用途徑，降低或穩定病毒載量。

外周循環CD4＋T細胞主要有兩類：幼稚細胞（CD45RA＋T）和記憶細胞（CD45RO＋T），HIV感染后，無論是未經抗原刺激的幼稚細胞，還是接觸過抗原刺激的記憶細胞都不斷減少［5］。本研究結果顯示，益艾康膠囊干預后，CD45RA＋T細胞和CD45RO＋T百分比與對照組相比均顯著升高（P＜0.05）。同時觀察到CD4＋CD28＋T和CD4＋CD95＋T的比例均較對照組升高（P＜0.05）。CD28和CD95分別是T細胞表面的共刺激分子和細胞凋亡分子，與CD25分子一樣，能在一定程度上反映CD4＋T細胞的活化、凋亡及其功能狀態［6－7］，說明活化T細胞下降幅度減緩，提示益艾康膠囊干預能提高CD4＋T細胞的輸出和促進其活化，有助于恢復HIV感染者的免疫功能，有利于免疫重建。

CD8＋T淋巴細胞是特異性細胞免疫的效應細胞，能通過特異性識別病毒感染的靶細胞，并對其產生殺傷作用，是機體內直接殺傷 HIV病毒的主要免疫細胞［8］。CD8＋CD38＋T細胞是一群激活的亞群，在HIV感染時能發生擴增，是評價HIV感染者免疫激活的又一指標［9］，本研究顯示益艾康干預6個月后，CD8＋T細胞百分比減少的同時，CD8＋CD38＋T細胞百分比也下降，與對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05），提示通過益艾康膠囊干預可以使HIV感染者異常的免疫激活得到抑制。

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［3］李勇，王階，林洪生，等.中醫“治未病”思想在艾滋病早期免疫重建中的作用［J］.遼寧中醫雜志，2010，37（11）：2117－2119.

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