綠原酸的提取與分離

汪玉秀，王俊儒，常君成，來冬梅，高錦明

摘要：根據(jù)現(xiàn)代分離技術(shù)課程的特點(diǎn)，選擇任課教師科研課題中與現(xiàn)代分離技術(shù)密切相關(guān)的內(nèi)容：金銀花中綠原酸的提取與分離，將原本孤立的分離技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)改為綜合性實(shí)驗(yàn)，其內(nèi)容涉及固體中有效成分的提取技術(shù)、減壓濃縮技術(shù)、紫外檢測技術(shù)以及硅膠吸附柱層析、硅膠吸附薄層層析和高效液相色譜等現(xiàn)代分離技術(shù)。使學(xué)生在系統(tǒng)地掌握實(shí)驗(yàn)技能的同時(shí)，親身體驗(yàn)了現(xiàn)代分離技術(shù)在天然產(chǎn)物研究中的重要作用。

關(guān)鍵詞：提取；分離；現(xiàn)代分離技術(shù)；實(shí)驗(yàn)課程

中圖分類號(hào)：G642.0；Q946-33 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1674-9324（2014）06-0241-02

現(xiàn)代分離技術(shù)是西北農(nóng)林科技大學(xué)應(yīng)用化學(xué)專業(yè)的學(xué)科基礎(chǔ)課程，課程內(nèi)容包括蒸餾、萃取、結(jié)晶、經(jīng)典色譜、現(xiàn)代色譜等技術(shù)。過去我們采用4個(gè)實(shí)驗(yàn)完成這些技術(shù)的操作練習(xí)，有些實(shí)驗(yàn)技術(shù)重復(fù)，有些分離技術(shù)沒有接觸到，更主要的是這些分離技術(shù)是孤立完成的。為了讓學(xué)生系統(tǒng)地理解這些分離技術(shù)相互之間的關(guān)聯(lián)性，并為天然產(chǎn)物化學(xué)等專業(yè)課程奠定一定的基礎(chǔ)，現(xiàn)代分離技術(shù)實(shí)驗(yàn)課程將原本孤立的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)改為綜合性實(shí)驗(yàn)，選擇了任課教師科研課題中部分相關(guān)內(nèi)容：金銀花中綠原酸的提取與分離，此實(shí)驗(yàn)包括了現(xiàn)代分離技術(shù)課程中大部分技術(shù)內(nèi)容。

一、金銀花與綠原酸

金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬多種植物的干燥花蕾，它是一種“藥食同源”的綠色植物，是臨床常用的中藥之一。另外，金銀花還被廣泛地應(yīng)用于保健品、化妝品、卷煙、食品等行業(yè)。近代研究一般認(rèn)為金銀花的主要生物活性有效成分為綠原酸類化合物，并且常以綠原酸含量的高低來評(píng)價(jià)金銀花質(zhì)量的優(yōu)劣。綠原酸結(jié)構(gòu)式表示如下：

二、實(shí)驗(yàn)方案

金銀花中綠原酸的提取分離過程：將金銀花粉碎成粉末，然后用75%乙醇索氏提取，所得濾液減壓濃縮后60℃干燥得粗提物，將粗提物與硅膠1∶1拌樣，將拌好的混合樣上硅膠柱，用乙酸乙酯∶甲酸∶水不同比例進(jìn)行洗脫得到綠原酸的洗脫液，將其濃縮至干，得到綠原酸粗品，再將粗品用硅膠柱分離，用氯仿∶甲醇混合溶液梯度洗脫得到綠原酸精品，最后用高效液相色儀譜檢測含量即可。

三、實(shí)驗(yàn)方法及預(yù)作結(jié)果

1.提取過程。將金銀花制成粗粉，稱取約30g，以75%的乙醇為溶劑，采用索氏提取器提取4h，其提取液減壓濃縮后60℃干燥得浸膏。

2.分離過程。（1）粗分離。取一定量上述浸膏，按1∶1加入200～300目硅膠拌樣，晾干。用乙酸乙酯濕法裝柱（柱型？4.5cm×53cm，硅膠100～200目），干法上樣，柱體依次用乙酸乙酯（A）、乙酸乙酯-甲酸-水（20∶1∶0.1）（B）、乙酸乙酯-甲酸-水（10∶1∶0.1）（C）、甲醇（D）洗脫。流速控制在每分鐘1/10柱體積即可。分部收集，每管30mL，其中（A）液洗脫收集4管，（B）液洗脫收集8管，（C）液洗脫收集12管，（D）液洗脫收集2管，共4個(gè)部分。薄層（TLC）檢測，結(jié)合顯色劑顯色，將相同餾分合并。（2）粗分離過程中TLC檢測。采用TLC對(duì)粗分離過程中柱子的洗脫情況進(jìn)行跟蹤檢測，展開劑為乙酸丁酯∶甲酸∶水（7∶2.5∶2.5）。從某個(gè)餾分開始有綠原酸出現(xiàn)（365nm波長下顯蘭色熒光）至幾乎看不到蘭色熒光，表示綠原酸已基本收集完全。具體方法描述如下：①收集液的TLC預(yù)檢。在對(duì)各收集管進(jìn)行TLC分析之前，為了節(jié)約薄板，可用毛細(xì)管將各收集管中的液體依次在一塊薄板上并對(duì)各點(diǎn)樣按照相應(yīng)的管號(hào)一次編號(hào)，等樣點(diǎn)上的溶劑徹底揮發(fā)干后，置于波長365nm的紫外燈下觀察，有明顯斑點(diǎn)的表明其對(duì)應(yīng)接受管中含有化合物，沒有斑點(diǎn)的表明對(duì)應(yīng)管中沒有化合物。然后再對(duì)有斑點(diǎn)的各管進(jìn)行TLC分析。②TLC分析。TLC分析的內(nèi)容包括：第一，判斷斑點(diǎn)數(shù)的多少。展開后，斑點(diǎn)數(shù)多表明所含化合物越多。只有一個(gè)斑點(diǎn)者表明對(duì)應(yīng)管中可能含有純化合物。斑點(diǎn)顏色越深表明所含對(duì)應(yīng)化合物的量越多。第二，根據(jù)Rf值或斑點(diǎn)高度判斷不同管中是否含有相同的化合物。在同一高度具有相同斑點(diǎn)，表明兩管含有相同的成分。B7到C10部分經(jīng)TLC檢測含有大量的綠原酸，這些部分合并濃縮至干后得綠原酸粗品（E）。③精制。將綠原酸粗品再經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，得單一化合物（F），即為綠原酸精品（0.85g）。

3.檢測。對(duì)E和F兩部分分別進(jìn)行高效液相色譜分析。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～10μL，注入液相色譜儀，檢測兩部分的綠原酸含量。測定條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑以乙腈-0.4%磷酸（13：87）為流動(dòng)相，SPD-10AV紫外檢測器λ327nm下檢測。E含綠原酸75%左右，F(xiàn)含綠原酸98%以上。

四、教改效果

上述實(shí)驗(yàn)內(nèi)容需要16學(xué)時(shí)，要求學(xué)生在兩天的時(shí)間內(nèi)完成，期間許多操作技術(shù)交叉進(jìn)行，大大提高了實(shí)驗(yàn)效率，使學(xué)生在系統(tǒng)地掌握固體中有效成分的提?。ㄋ魇戏ǎ┘夹g(shù)、減壓濃縮（旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)）技術(shù)、紫外檢測技術(shù)以及硅膠吸附柱層析、硅膠吸附薄層層析和高效液相色譜現(xiàn)代分離技術(shù)實(shí)驗(yàn)技能的同時(shí)，親身體驗(yàn)了現(xiàn)代分離技術(shù)在天然產(chǎn)物研究中的重要作用，收到了預(yù)期的效果。

參考文獻(xiàn)：

[1]王俊儒，高錦明，張玉林，等.天然產(chǎn)物提取分離與鑒定技術(shù)[J].咸陽：西北農(nóng)林科技大學(xué)出版社，2005，125-134.

[2]陸九芳，李總成，包鐵竹，等.分離過程化學(xué)[M].北京：清華大學(xué)出版社，1993：35-36，106-110，141-146.

[3]丁明玉.現(xiàn)代分離方法與技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2006：92-99，127-132，174-176.

[4]高素蓮，周寧國.現(xiàn)代分離純化與分析[M].北京：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社，2004：15-16，42-43，121-123，130-131.

[5]盧艷花，魏東芝，蔣曉萌.中藥有效成分提取分離技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008，10-13，22-39，123-124.

基金項(xiàng)目：陜西省教學(xué)改革重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（11BG05），西北農(nóng)林科技大學(xué)2011年校級(jí)教學(xué)改革研究項(xiàng)目（JY1101012，JY1102115）。

作者簡介：汪玉秀，女，副教授，主要研究方向：植物資源化學(xué)。endprint

摘要：根據(jù)現(xiàn)代分離技術(shù)課程的特點(diǎn)，選擇任課教師科研課題中與現(xiàn)代分離技術(shù)密切相關(guān)的內(nèi)容：金銀花中綠原酸的提取與分離，將原本孤立的分離技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)改為綜合性實(shí)驗(yàn)，其內(nèi)容涉及固體中有效成分的提取技術(shù)、減壓濃縮技術(shù)、紫外檢測技術(shù)以及硅膠吸附柱層析、硅膠吸附薄層層析和高效液相色譜等現(xiàn)代分離技術(shù)。使學(xué)生在系統(tǒng)地掌握實(shí)驗(yàn)技能的同時(shí)，親身體驗(yàn)了現(xiàn)代分離技術(shù)在天然產(chǎn)物研究中的重要作用。

關(guān)鍵詞：提取；分離；現(xiàn)代分離技術(shù)；實(shí)驗(yàn)課程

中圖分類號(hào)：G642.0；Q946-33 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1674-9324（2014）06-0241-02

現(xiàn)代分離技術(shù)是西北農(nóng)林科技大學(xué)應(yīng)用化學(xué)專業(yè)的學(xué)科基礎(chǔ)課程，課程內(nèi)容包括蒸餾、萃取、結(jié)晶、經(jīng)典色譜、現(xiàn)代色譜等技術(shù)。過去我們采用4個(gè)實(shí)驗(yàn)完成這些技術(shù)的操作練習(xí)，有些實(shí)驗(yàn)技術(shù)重復(fù)，有些分離技術(shù)沒有接觸到，更主要的是這些分離技術(shù)是孤立完成的。為了讓學(xué)生系統(tǒng)地理解這些分離技術(shù)相互之間的關(guān)聯(lián)性，并為天然產(chǎn)物化學(xué)等專業(yè)課程奠定一定的基礎(chǔ)，現(xiàn)代分離技術(shù)實(shí)驗(yàn)課程將原本孤立的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)改為綜合性實(shí)驗(yàn)，選擇了任課教師科研課題中部分相關(guān)內(nèi)容：金銀花中綠原酸的提取與分離，此實(shí)驗(yàn)包括了現(xiàn)代分離技術(shù)課程中大部分技術(shù)內(nèi)容。

一、金銀花與綠原酸

金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬多種植物的干燥花蕾，它是一種“藥食同源”的綠色植物，是臨床常用的中藥之一。另外，金銀花還被廣泛地應(yīng)用于保健品、化妝品、卷煙、食品等行業(yè)。近代研究一般認(rèn)為金銀花的主要生物活性有效成分為綠原酸類化合物，并且常以綠原酸含量的高低來評(píng)價(jià)金銀花質(zhì)量的優(yōu)劣。綠原酸結(jié)構(gòu)式表示如下：

二、實(shí)驗(yàn)方案

金銀花中綠原酸的提取分離過程：將金銀花粉碎成粉末，然后用75%乙醇索氏提取，所得濾液減壓濃縮后60℃干燥得粗提物，將粗提物與硅膠1∶1拌樣，將拌好的混合樣上硅膠柱，用乙酸乙酯∶甲酸∶水不同比例進(jìn)行洗脫得到綠原酸的洗脫液，將其濃縮至干，得到綠原酸粗品，再將粗品用硅膠柱分離，用氯仿∶甲醇混合溶液梯度洗脫得到綠原酸精品，最后用高效液相色儀譜檢測含量即可。

三、實(shí)驗(yàn)方法及預(yù)作結(jié)果

1.提取過程。將金銀花制成粗粉，稱取約30g，以75%的乙醇為溶劑，采用索氏提取器提取4h，其提取液減壓濃縮后60℃干燥得浸膏。

2.分離過程。（1）粗分離。取一定量上述浸膏，按1∶1加入200～300目硅膠拌樣，晾干。用乙酸乙酯濕法裝柱（柱型？4.5cm×53cm，硅膠100～200目），干法上樣，柱體依次用乙酸乙酯（A）、乙酸乙酯-甲酸-水（20∶1∶0.1）（B）、乙酸乙酯-甲酸-水（10∶1∶0.1）（C）、甲醇（D）洗脫。流速控制在每分鐘1/10柱體積即可。分部收集，每管30mL，其中（A）液洗脫收集4管，（B）液洗脫收集8管，（C）液洗脫收集12管，（D）液洗脫收集2管，共4個(gè)部分。薄層（TLC）檢測，結(jié)合顯色劑顯色，將相同餾分合并。（2）粗分離過程中TLC檢測。采用TLC對(duì)粗分離過程中柱子的洗脫情況進(jìn)行跟蹤檢測，展開劑為乙酸丁酯∶甲酸∶水（7∶2.5∶2.5）。從某個(gè)餾分開始有綠原酸出現(xiàn)（365nm波長下顯蘭色熒光）至幾乎看不到蘭色熒光，表示綠原酸已基本收集完全。具體方法描述如下：①收集液的TLC預(yù)檢。在對(duì)各收集管進(jìn)行TLC分析之前，為了節(jié)約薄板，可用毛細(xì)管將各收集管中的液體依次在一塊薄板上并對(duì)各點(diǎn)樣按照相應(yīng)的管號(hào)一次編號(hào)，等樣點(diǎn)上的溶劑徹底揮發(fā)干后，置于波長365nm的紫外燈下觀察，有明顯斑點(diǎn)的表明其對(duì)應(yīng)接受管中含有化合物，沒有斑點(diǎn)的表明對(duì)應(yīng)管中沒有化合物。然后再對(duì)有斑點(diǎn)的各管進(jìn)行TLC分析。②TLC分析。TLC分析的內(nèi)容包括：第一，判斷斑點(diǎn)數(shù)的多少。展開后，斑點(diǎn)數(shù)多表明所含化合物越多。只有一個(gè)斑點(diǎn)者表明對(duì)應(yīng)管中可能含有純化合物。斑點(diǎn)顏色越深表明所含對(duì)應(yīng)化合物的量越多。第二，根據(jù)Rf值或斑點(diǎn)高度判斷不同管中是否含有相同的化合物。在同一高度具有相同斑點(diǎn)，表明兩管含有相同的成分。B7到C10部分經(jīng)TLC檢測含有大量的綠原酸，這些部分合并濃縮至干后得綠原酸粗品（E）。③精制。將綠原酸粗品再經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，得單一化合物（F），即為綠原酸精品（0.85g）。

3.檢測。對(duì)E和F兩部分分別進(jìn)行高效液相色譜分析。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～10μL，注入液相色譜儀，檢測兩部分的綠原酸含量。測定條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑以乙腈-0.4%磷酸（13：87）為流動(dòng)相，SPD-10AV紫外檢測器λ327nm下檢測。E含綠原酸75%左右，F(xiàn)含綠原酸98%以上。

四、教改效果

上述實(shí)驗(yàn)內(nèi)容需要16學(xué)時(shí)，要求學(xué)生在兩天的時(shí)間內(nèi)完成，期間許多操作技術(shù)交叉進(jìn)行，大大提高了實(shí)驗(yàn)效率，使學(xué)生在系統(tǒng)地掌握固體中有效成分的提?。ㄋ魇戏ǎ┘夹g(shù)、減壓濃縮（旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)）技術(shù)、紫外檢測技術(shù)以及硅膠吸附柱層析、硅膠吸附薄層層析和高效液相色譜現(xiàn)代分離技術(shù)實(shí)驗(yàn)技能的同時(shí)，親身體驗(yàn)了現(xiàn)代分離技術(shù)在天然產(chǎn)物研究中的重要作用，收到了預(yù)期的效果。

參考文獻(xiàn)：

[1]王俊儒，高錦明，張玉林，等.天然產(chǎn)物提取分離與鑒定技術(shù)[J].咸陽：西北農(nóng)林科技大學(xué)出版社，2005，125-134.

[2]陸九芳，李總成，包鐵竹，等.分離過程化學(xué)[M].北京：清華大學(xué)出版社，1993：35-36，106-110，141-146.

[3]丁明玉.現(xiàn)代分離方法與技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2006：92-99，127-132，174-176.

[4]高素蓮，周寧國.現(xiàn)代分離純化與分析[M].北京：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社，2004：15-16，42-43，121-123，130-131.

[5]盧艷花，魏東芝，蔣曉萌.中藥有效成分提取分離技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008，10-13，22-39，123-124.

基金項(xiàng)目：陜西省教學(xué)改革重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（11BG05），西北農(nóng)林科技大學(xué)2011年校級(jí)教學(xué)改革研究項(xiàng)目（JY1101012，JY1102115）。

作者簡介：汪玉秀，女，副教授，主要研究方向：植物資源化學(xué)。endprint

摘要：根據(jù)現(xiàn)代分離技術(shù)課程的特點(diǎn)，選擇任課教師科研課題中與現(xiàn)代分離技術(shù)密切相關(guān)的內(nèi)容：金銀花中綠原酸的提取與分離，將原本孤立的分離技術(shù)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)改為綜合性實(shí)驗(yàn)，其內(nèi)容涉及固體中有效成分的提取技術(shù)、減壓濃縮技術(shù)、紫外檢測技術(shù)以及硅膠吸附柱層析、硅膠吸附薄層層析和高效液相色譜等現(xiàn)代分離技術(shù)。使學(xué)生在系統(tǒng)地掌握實(shí)驗(yàn)技能的同時(shí)，親身體驗(yàn)了現(xiàn)代分離技術(shù)在天然產(chǎn)物研究中的重要作用。

關(guān)鍵詞：提取；分離；現(xiàn)代分離技術(shù)；實(shí)驗(yàn)課程

中圖分類號(hào)：G642.0；Q946-33 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1674-9324（2014）06-0241-02

現(xiàn)代分離技術(shù)是西北農(nóng)林科技大學(xué)應(yīng)用化學(xué)專業(yè)的學(xué)科基礎(chǔ)課程，課程內(nèi)容包括蒸餾、萃取、結(jié)晶、經(jīng)典色譜、現(xiàn)代色譜等技術(shù)。過去我們采用4個(gè)實(shí)驗(yàn)完成這些技術(shù)的操作練習(xí)，有些實(shí)驗(yàn)技術(shù)重復(fù)，有些分離技術(shù)沒有接觸到，更主要的是這些分離技術(shù)是孤立完成的。為了讓學(xué)生系統(tǒng)地理解這些分離技術(shù)相互之間的關(guān)聯(lián)性，并為天然產(chǎn)物化學(xué)等專業(yè)課程奠定一定的基礎(chǔ)，現(xiàn)代分離技術(shù)實(shí)驗(yàn)課程將原本孤立的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)改為綜合性實(shí)驗(yàn)，選擇了任課教師科研課題中部分相關(guān)內(nèi)容：金銀花中綠原酸的提取與分離，此實(shí)驗(yàn)包括了現(xiàn)代分離技術(shù)課程中大部分技術(shù)內(nèi)容。

一、金銀花與綠原酸

金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬多種植物的干燥花蕾，它是一種“藥食同源”的綠色植物，是臨床常用的中藥之一。另外，金銀花還被廣泛地應(yīng)用于保健品、化妝品、卷煙、食品等行業(yè)。近代研究一般認(rèn)為金銀花的主要生物活性有效成分為綠原酸類化合物，并且常以綠原酸含量的高低來評(píng)價(jià)金銀花質(zhì)量的優(yōu)劣。綠原酸結(jié)構(gòu)式表示如下：

二、實(shí)驗(yàn)方案

金銀花中綠原酸的提取分離過程：將金銀花粉碎成粉末，然后用75%乙醇索氏提取，所得濾液減壓濃縮后60℃干燥得粗提物，將粗提物與硅膠1∶1拌樣，將拌好的混合樣上硅膠柱，用乙酸乙酯∶甲酸∶水不同比例進(jìn)行洗脫得到綠原酸的洗脫液，將其濃縮至干，得到綠原酸粗品，再將粗品用硅膠柱分離，用氯仿∶甲醇混合溶液梯度洗脫得到綠原酸精品，最后用高效液相色儀譜檢測含量即可。

三、實(shí)驗(yàn)方法及預(yù)作結(jié)果

1.提取過程。將金銀花制成粗粉，稱取約30g，以75%的乙醇為溶劑，采用索氏提取器提取4h，其提取液減壓濃縮后60℃干燥得浸膏。

2.分離過程。（1）粗分離。取一定量上述浸膏，按1∶1加入200～300目硅膠拌樣，晾干。用乙酸乙酯濕法裝柱（柱型？4.5cm×53cm，硅膠100～200目），干法上樣，柱體依次用乙酸乙酯（A）、乙酸乙酯-甲酸-水（20∶1∶0.1）（B）、乙酸乙酯-甲酸-水（10∶1∶0.1）（C）、甲醇（D）洗脫。流速控制在每分鐘1/10柱體積即可。分部收集，每管30mL，其中（A）液洗脫收集4管，（B）液洗脫收集8管，（C）液洗脫收集12管，（D）液洗脫收集2管，共4個(gè)部分。薄層（TLC）檢測，結(jié)合顯色劑顯色，將相同餾分合并。（2）粗分離過程中TLC檢測。采用TLC對(duì)粗分離過程中柱子的洗脫情況進(jìn)行跟蹤檢測，展開劑為乙酸丁酯∶甲酸∶水（7∶2.5∶2.5）。從某個(gè)餾分開始有綠原酸出現(xiàn)（365nm波長下顯蘭色熒光）至幾乎看不到蘭色熒光，表示綠原酸已基本收集完全。具體方法描述如下：①收集液的TLC預(yù)檢。在對(duì)各收集管進(jìn)行TLC分析之前，為了節(jié)約薄板，可用毛細(xì)管將各收集管中的液體依次在一塊薄板上并對(duì)各點(diǎn)樣按照相應(yīng)的管號(hào)一次編號(hào)，等樣點(diǎn)上的溶劑徹底揮發(fā)干后，置于波長365nm的紫外燈下觀察，有明顯斑點(diǎn)的表明其對(duì)應(yīng)接受管中含有化合物，沒有斑點(diǎn)的表明對(duì)應(yīng)管中沒有化合物。然后再對(duì)有斑點(diǎn)的各管進(jìn)行TLC分析。②TLC分析。TLC分析的內(nèi)容包括：第一，判斷斑點(diǎn)數(shù)的多少。展開后，斑點(diǎn)數(shù)多表明所含化合物越多。只有一個(gè)斑點(diǎn)者表明對(duì)應(yīng)管中可能含有純化合物。斑點(diǎn)顏色越深表明所含對(duì)應(yīng)化合物的量越多。第二，根據(jù)Rf值或斑點(diǎn)高度判斷不同管中是否含有相同的化合物。在同一高度具有相同斑點(diǎn)，表明兩管含有相同的成分。B7到C10部分經(jīng)TLC檢測含有大量的綠原酸，這些部分合并濃縮至干后得綠原酸粗品（E）。③精制。將綠原酸粗品再經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，得單一化合物（F），即為綠原酸精品（0.85g）。

3.檢測。對(duì)E和F兩部分分別進(jìn)行高效液相色譜分析。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～10μL，注入液相色譜儀，檢測兩部分的綠原酸含量。測定條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑以乙腈-0.4%磷酸（13：87）為流動(dòng)相，SPD-10AV紫外檢測器λ327nm下檢測。E含綠原酸75%左右，F(xiàn)含綠原酸98%以上。

四、教改效果

上述實(shí)驗(yàn)內(nèi)容需要16學(xué)時(shí)，要求學(xué)生在兩天的時(shí)間內(nèi)完成，期間許多操作技術(shù)交叉進(jìn)行，大大提高了實(shí)驗(yàn)效率，使學(xué)生在系統(tǒng)地掌握固體中有效成分的提?。ㄋ魇戏ǎ┘夹g(shù)、減壓濃縮（旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)）技術(shù)、紫外檢測技術(shù)以及硅膠吸附柱層析、硅膠吸附薄層層析和高效液相色譜現(xiàn)代分離技術(shù)實(shí)驗(yàn)技能的同時(shí)，親身體驗(yàn)了現(xiàn)代分離技術(shù)在天然產(chǎn)物研究中的重要作用，收到了預(yù)期的效果。

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基金項(xiàng)目：陜西省教學(xué)改革重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目（11BG05），西北農(nóng)林科技大學(xué)2011年校級(jí)教學(xué)改革研究項(xiàng)目（JY1101012，JY1102115）。

作者簡介：汪玉秀，女，副教授，主要研究方向：植物資源化學(xué)。endprint