高效液相色譜法測定洋參蟲草膠囊中人參皂苷Rb1的含量

張正瀅+杜子榮++鄒敏

摘 要 目的：采用高效液相色譜法測定洋參蟲草膠囊中人參皂苷Rb1的含量。方法：使用Intersil ODS-3色譜柱（4.6 mm x 250 mm, 5 μm）；乙腈-0.015%磷酸溶液（31∶69）為流動相；檢測波長為203 nm。結果：人參皂苷Rb1在0.426~21.3 μg線性關系良好（r=1.000 0），平均加樣回收率（n=5）為96.0%，RSD=1.03%，人參皂苷Rb1含量不少于0.7%。結論：本方法簡便、準確，重復性好，可用于洋參蟲草膠囊的質量控制。

關鍵詞洋參蟲草膠囊人參皂苷Rb1高效液相色譜法

中圖分類號：R927.2; O657.72文獻標識碼：A文章編號：1006-1533(2014)13-0077-04

Determination of ginsenoside Rb1 in Yangshen Chongcao capsule by HPLC

ZHANG Zhengying*, DU Zirong, ZHOU Min

(Shanghai Zhonghua Pharmaceutical(Group)Co. Ltd., shanghai 200052, China)

ABSTRACT Objective: To establish an HPLC method for determination of ginsenoside Rb1 in Yangshen Chongcao capsules. Methods: HPLC was performed by use of Intersil ODS-3 column (4.6 mm x 250 mm, 5 μm) with acetonitrile-0.015% phosphoric acid (31:69) as mobile phase and detection wavelength of 203 nm. Results: The standard curve of ginsenoside Rb1 was linear over the range of 0.426~21.3 μg (r=1.000 0). The average recovery rate (n=5) was 96.0% with RSD 1.03%. The content of ginsenoside Rb1 was not less than 0.7%. Conclusion: This method is simple, accurate, reproducible, and can be used for the quality control of Yangshen Chongcao capsule.

KEY WORDS Yangshen Chongcao capsule; ginsenoside Rb1; HPLC

洋參蟲草膠囊由西洋參、冬蟲夏草、紅景天、龜板膠組成，為益氣滋陰，填精補元佳品。西洋參屬五加科植物[1-2]，性味甘、微苦，涼，歸心、肺、腎經，功能補氣養陰，清熱生津。用于氣虛陰虧，虛熱煩倦，咳喘痰血，內熱消渴，口燥咽干。經現代科學研究，西洋參中含有人參皂苷等多種補益物質，能增強抗病能力，強心，抗疲勞，延緩衰老及預防腫瘤功效。西洋參為本品之君藥，人參皂苷Rb1是其主要活性成分之一，本文采用高效液相色譜法測定洋參膠囊中人參皂苷Rb1的含量，為控制產品的內在質量提供了實驗依據。

1儀器與試藥

Waters 510高效液相系統：Waters 2487 雙波長紫外檢測儀；人參皂苷Rb1（中國藥品生物制品檢定所，批號110704-200420）；洋參蟲草膠囊 （上海中華藥業有限公司，規格：每粒裝0.4 g，批號見表4）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件

Intersil ODS-3色譜柱（4.6 mm x 250 mm, 5 μm），流動相：乙腈-0.015%磷酸溶液（31∶69），流速為1.0 ml/min，檢測波長為203 nm。在此條件下，人參皂苷Rb1對照品的理論板數為4 336，故暫定色譜柱的理論塔板數按人參皂苷Rb1峰計算應不低于4 000。

2.2對照品溶液制備

精密稱取人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇制成含量為0.4 mg/ml的溶液。

2.3試品溶液制備

取本品內容物約0.9 g，精密稱定，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減少的重量，搖勻，過濾，精密量取續濾液20 ml，65 ℃水浴蒸干，殘余物用40 ml水飽和正丁醇分次溶解轉移至分液漏斗中，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次為20 ml，保留正丁醇液；合并二次水液，用水飽和的正丁醇萃取2次，分別為20 ml、15 ml，棄去水液；合并前后的正丁醇液，65 ℃減壓濃縮至干。殘余物加甲醇溶解，轉移至10 ml量瓶中，并加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取過濾液作為供試品溶液。

2.4空白試驗

去除西洋參的洋參蟲草膠囊空白樣品，同法制成空白對照供試液，進行HPLC分析，并與對照品和供試品比較，結果空白無干擾（圖1）。

2.5供試品提取方法的研究

2.5.1熱回流提取與超聲處理的比較

熱回流提取除65 ℃加熱回流1.5 h取代超聲處理30 min外，其它與2.3同。取過濾液作為熱回流提取供試品溶液。

將兩種方法獲得的溶液分別進行分析，結果表明：本品分別經加熱回流法和超聲法提取，其中人參皂苷Rb1含量分別為1.015%和1.020%，可見超聲提取效果與加熱回流法相似，從操作方便角度考慮，選用超聲處理。

2.5.2超聲時間考察

取本品內容物約0.9 g，共4份，除分別超聲處理10、20、30、45 min外，其余同2.3。進樣分析表明，供試品超聲30 min已基本提取完全（表1）。

2.6線性范圍

取濃度為426 μg/ml的人參皂苷Rb1對照品溶液，分別進樣10、20、50 μl分析；對照品溶液稀釋10倍后，再分別進樣10、20 μl分析。以峰面積為縱坐標(Y)，進樣量（μg）為橫坐標(X)進行線性回歸，得回歸方程為Y=235.30X-106 47, r=1.000 0。結果表明人參皂苷Rb1在0.426～21.3 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.7精密度試驗

精密量取人參皂苷Rb1對照品溶液（0.353 mg/ml）10 μl，進樣分析6次，其峰面積的RSD為0.57%，符合要求。

2.8重復性試驗

取同批號樣品（批號011001）5份，按2.3制備供試品溶液，測定含量（表2）。

2.9加樣回收率測定

取已測定含量的洋參蟲草膠囊樣品（批號011001）約0.4 g，共5份，精密稱定，分別精密加入濃度約為0.88 mg/ml的對照品溶液5 ml，同2.3處理，進樣分析，計算加樣回收率（表3）。

2.10穩定性試驗

精密吸取供試品溶液于0、2、4、6 h各進樣1次，人參皂苷Rb1含量分別為1.02%、1.01%、1.02%、1.02%，結果表明樣品溶液在6 h內保持穩定。

“百路達”銀杏葉膠囊獲加拿大注冊批準上海信誼百路達藥業有限公司主打產品“百路達”銀杏葉膠囊于2014年6月6日獲加拿大衛生部天然藥品局批準（上市許可證號：202598，品種批準文號：NPN80051461），其產品實現年銷售額超億元，系國內同類產品中品牌影響力排名第一位。作為“上海市高新技術企業”，上海信誼百路達藥業有限公司建立了以中國工程院侯惠民院士領銜的“院士專家企業工作站”，與第二軍醫大學、中國科學院昆明植物研究所等建立了聯合實驗室，并曾獲得“國家重點新產品”、“國家十五火炬計劃優秀項目獎”、“上海市重點新產品”、“上海市專利新產品”等眾多獎項。（大公網）

2.11樣品檢測結果：

分別收集10批洋參蟲草膠囊樣品，按2.3操作，平行制備2份，分別精密吸取對照品溶液10 μl、供試品溶液10 μl，分別進行HPLC分析并計算含量（表4）。

2000年版中國藥典一部西洋參藥材[3]含量測定項下規定：本品含人參皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于1.0%。本品處方（每1 000粒）中含西洋參量為266.7 g，其中人參皂苷Rb1占處方總量的0.67%。暫定每粒洋參蟲草膠囊內含人參皂苷Rb1含量不得少于3.0 mg。

3討論

目前，有關西洋參及其制劑的含量測定方法[4-10]報道較多，其中多數是以梯度洗脫法測定其中人參皂苷Rg1、Re、Rb1等含量。洋參蟲草膠囊為上海中華藥業有限公司自主研發產品，其中西洋參為君藥，由于該處方中還含有冬蟲夏草、龜板膠動物藥材，對該品種的質量控制難度增加，為有效控制成品質量，在中國藥典等文獻基礎上，探討成品的含量測定方法。

首先，按照中國藥典西洋參藥材[3]含量測定項下的流動相要求，適當調節比例，結果樣品不能達到基線分離，后加入適量磷酸，改善了這一情況；其次，對樣品前處理方法進行了摸索，比較了加熱回流法和超聲法，確定用超聲法進行處理，使操作更簡單，便于控制，亦不影響樣品中人參皂苷Rb1的提取和含量測定。結果表明本試驗建立的人參皂苷Rb1含量測定方法穩定、簡便、精密度高、重復性好，便于質量標準執行，為洋參蟲草膠囊的質量控制提供了依據。

參考文獻

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[9] 沈志濱, 朱俊訪, 李博. HPLC法測定益氣復脈口服液中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量[J]. 廣東藥學院學報, 2006, 22(3): 259-260, 267.

[10] 曾祥基. 人參皂苷的分離和定量測定[J]. 成都大學學報(自然科學版), 2003, 22(2): 1-9.

（收稿日期：2014-03-27）

“百路達”銀杏葉膠囊獲加拿大注冊批準上海信誼百路達藥業有限公司主打產品“百路達”銀杏葉膠囊于2014年6月6日獲加拿大衛生部天然藥品局批準（上市許可證號：202598，品種批準文號：NPN80051461），其產品實現年銷售額超億元，系國內同類產品中品牌影響力排名第一位。作為“上海市高新技術企業”，上海信誼百路達藥業有限公司建立了以中國工程院侯惠民院士領銜的“院士專家企業工作站”，與第二軍醫大學、中國科學院昆明植物研究所等建立了聯合實驗室，并曾獲得“國家重點新產品”、“國家十五火炬計劃優秀項目獎”、“上海市重點新產品”、“上海市專利新產品”等眾多獎項。（大公網）

2.11樣品檢測結果：

分別收集10批洋參蟲草膠囊樣品，按2.3操作，平行制備2份，分別精密吸取對照品溶液10 μl、供試品溶液10 μl，分別進行HPLC分析并計算含量（表4）。

2000年版中國藥典一部西洋參藥材[3]含量測定項下規定：本品含人參皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于1.0%。本品處方（每1 000粒）中含西洋參量為266.7 g，其中人參皂苷Rb1占處方總量的0.67%。暫定每粒洋參蟲草膠囊內含人參皂苷Rb1含量不得少于3.0 mg。

3討論

目前，有關西洋參及其制劑的含量測定方法[4-10]報道較多，其中多數是以梯度洗脫法測定其中人參皂苷Rg1、Re、Rb1等含量。洋參蟲草膠囊為上海中華藥業有限公司自主研發產品，其中西洋參為君藥，由于該處方中還含有冬蟲夏草、龜板膠動物藥材，對該品種的質量控制難度增加，為有效控制成品質量，在中國藥典等文獻基礎上，探討成品的含量測定方法。

首先，按照中國藥典西洋參藥材[3]含量測定項下的流動相要求，適當調節比例，結果樣品不能達到基線分離，后加入適量磷酸，改善了這一情況；其次，對樣品前處理方法進行了摸索，比較了加熱回流法和超聲法，確定用超聲法進行處理，使操作更簡單，便于控制，亦不影響樣品中人參皂苷Rb1的提取和含量測定。結果表明本試驗建立的人參皂苷Rb1含量測定方法穩定、簡便、精密度高、重復性好，便于質量標準執行，為洋參蟲草膠囊的質量控制提供了依據。

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[10] 曾祥基. 人參皂苷的分離和定量測定[J]. 成都大學學報(自然科學版), 2003, 22(2): 1-9.

（收稿日期：2014-03-27）

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2.11樣品檢測結果：

分別收集10批洋參蟲草膠囊樣品，按2.3操作，平行制備2份，分別精密吸取對照品溶液10 μl、供試品溶液10 μl，分別進行HPLC分析并計算含量（表4）。

2000年版中國藥典一部西洋參藥材[3]含量測定項下規定：本品含人參皂苷Rb1（C54H92O23）不得少于1.0%。本品處方（每1 000粒）中含西洋參量為266.7 g，其中人參皂苷Rb1占處方總量的0.67%。暫定每粒洋參蟲草膠囊內含人參皂苷Rb1含量不得少于3.0 mg。

3討論

目前，有關西洋參及其制劑的含量測定方法[4-10]報道較多，其中多數是以梯度洗脫法測定其中人參皂苷Rg1、Re、Rb1等含量。洋參蟲草膠囊為上海中華藥業有限公司自主研發產品，其中西洋參為君藥，由于該處方中還含有冬蟲夏草、龜板膠動物藥材，對該品種的質量控制難度增加，為有效控制成品質量，在中國藥典等文獻基礎上，探討成品的含量測定方法。

首先，按照中國藥典西洋參藥材[3]含量測定項下的流動相要求，適當調節比例，結果樣品不能達到基線分離，后加入適量磷酸，改善了這一情況；其次，對樣品前處理方法進行了摸索，比較了加熱回流法和超聲法，確定用超聲法進行處理，使操作更簡單，便于控制，亦不影響樣品中人參皂苷Rb1的提取和含量測定。結果表明本試驗建立的人參皂苷Rb1含量測定方法穩定、簡便、精密度高、重復性好，便于質量標準執行，為洋參蟲草膠囊的質量控制提供了依據。

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[6] 畢曉黎, 羅文匯, 李素梅. HPLC-ELSD法測定三七止血膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2011, 17(1): 75-77.

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[8] 沈嵐, 馮怡, 徐德生, 等. 反相高效液相色譜法測定三七花中人參皂苷Rb1的含量[J]. 時珍國醫國藥, 2009, 20(6): 1482-1483.

[9] 沈志濱, 朱俊訪, 李博. HPLC法測定益氣復脈口服液中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量[J]. 廣東藥學院學報, 2006, 22(3): 259-260, 267.

[10] 曾祥基. 人參皂苷的分離和定量測定[J]. 成都大學學報(自然科學版), 2003, 22(2): 1-9.

（收稿日期：2014-03-27）

“百路達”銀杏葉膠囊獲加拿大注冊批準上海信誼百路達藥業有限公司主打產品“百路達”銀杏葉膠囊于2014年6月6日獲加拿大衛生部天然藥品局批準（上市許可證號：202598，品種批準文號：NPN80051461），其產品實現年銷售額超億元，系國內同類產品中品牌影響力排名第一位。作為“上海市高新技術企業”，上海信誼百路達藥業有限公司建立了以中國工程院侯惠民院士領銜的“院士專家企業工作站”，與第二軍醫大學、中國科學院昆明植物研究所等建立了聯合實驗室，并曾獲得“國家重點新產品”、“國家十五火炬計劃優秀項目獎”、“上海市重點新產品”、“上海市專利新產品”等眾多獎項。（大公網）