FISH檢測宮頸上皮內瘤變及其旁組織中hTERC基因表達的變化及意義

曹志星+呂威+趙曄+等

【摘要】 目的：檢測宮頸活檢組織中上皮內瘤變（CIN）及其旁組織中hTERC基因的表達情況，對比分析其陽性率的變化，試圖找到基因水平上CIN手術治療范圍。方法：采用熒光原位雜交技術（FISH）檢測63例宮頸活檢標本中hTERC基因的表達變化情況。結果：宮頸高級別上皮內瘤變（HSIL）區、瘤變邊緣≤1 mm、1 mm<瘤變邊緣≤2 mm、2 mm<瘤變邊緣≤3 mm以及3 mm<瘤變邊緣≤4 mm的hTERC基因陽性率分別為100%、92.31%、87.18%、64.10%和30.77%，其中，HSIL與瘤變邊緣2 mm以內范圍各點比較差異無統計學意義（P>0.05）；HSIL與瘤變邊緣2 mm以外范圍各點比較差異有統計學意義（P<0.05）；宮頸低級別上皮內瘤變（LSIL）區、瘤變邊緣≤1 mm范圍、1 mm<瘤變邊緣≤2 mm、2 mm<瘤變邊緣≤3 mm以及3 mm<瘤變邊緣≤4 mm的hTERC基因陽性率分別為41.67%、25.00%、4.17%、4.17%和4.17%，其中，LSIL與瘤變邊緣1 mm以內范圍各點比較差異無統計學意義（P>0.05），而LSIL與瘤變邊緣1 mm以外范圍點比較差異有統計學意義（P<0.05）。結論：活檢標本中，隨著距瘤變區范圍的增加，hTERC基因的陽性率明顯下降，其中，距瘤變邊緣>2 mm和>1 mm或許可以分別作為HSIL和LSIL基因水平上（更精確意義上的）CIN的手術治療范圍。

【關鍵詞】 熒光原位雜交； 宮頸上皮內瘤變； hTERC基因； 宮頸活檢組織； 手術治療范圍

在世界范圍內，女性宮頸癌發病率居女性生殖系統惡性腫瘤第2位[1]。近年來，其發病呈年輕化趨勢，但因宮頸癌有較長的癌前病變期，早期診斷及合理治療便成為改善預后的關鍵[2]。目前研究得知，宮頸細胞由非典型性異常病變細胞轉化成癌細胞的過程中幾乎都伴有3號染色體長臂的擴增，其中涉及到的最重要的基因可能是人染色體末端酶基因（human telomerase gene，hTERC），它有望成為非典型細胞癌變的基因[3]。Heselmeyer-haddad等[4]研究認為hTERC基因可以作為預測高度病變（HSIL）的指標，隨訪這些病例1～3年后，hTERC基因擴增病例中CINⅠ/Ⅱ進展到CINⅢ多于hTERC基因不擴增病例，表明特異的基因組改變是CIN發展到宮頸癌所必需的[5]。同時，多項研究表明，采用FISH技術檢測宮頸細胞hTERC基因的陽性率，可作為宮頸上皮內瘤變由低級別進展到高級別的指標，還可以提高宮頸癌前病變的篩查幾率，是一種損傷較小的、比較可靠的檢測手段[6-10]。有研究報道不同制片方法中，hTERC基因雜交成功率石蠟包埋組織切片為85.7%，其熒光信號滿意率也最高，且在指導宮頸病變及宮頸癌的治療中，石蠟包埋組織切片法的染色體破壞最小，實際意義更大。因而，不同于以往的使用脫落細胞進行的研究，本實驗全部采用組織活檢標本。同時，除檢測CIN處的hTERC基因陽性率外，還對病變旁組織做不同范圍的hTERC基因表達研究，試圖找到規律性變化，探討基因水平上CIN的手術治療范圍。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2013年10月-2014年7月本院宮頸組織活檢標本63例，每例均完整包含連續的瘤變組織及其旁組織（距瘤變邊緣≥4 mm）。其中，低級別病變24例，高級別病變39例，年齡22～62歲，取標本前所有患者均未進行放療、化療及其他特殊治療。另外選取20例正常宮頸組織活檢標本建立閾值。

1.2 FISH探針 北京金菩嘉醫療科技有限公司生產的TERC/CSP3 DNA雙色探針。TERC基因標記在3q26.3位點，CSP3 DNA標記在3號染色體著絲粒處（3q11.1-q11.1），分別用紅色和綠色熒光信號標記，以CSP3探針作為對照。

1.3 方法

1.3.1 樣本制備 將普通載玻片清洗干凈后，涂多聚賴氨酸以防脫片，自然晾干備用。將預先篩選出的石蠟包埋組織做2 μm連續切片，展開后撈片，置70 ℃烤箱中2 h。

1.3.2 樣本預處理 將玻片置于二甲苯中脫蠟，兩缸，各10 min，依次經100%乙醇、85%乙醇、75%乙醇至去離子水，各1缸，各2 min，然后置于火力60的微波爐內水煮20 min，在2×SSC溶液中浸泡5 min后晾干，加胃蛋白酶20 μL（20 mg/mL），消化5 min左右，室溫下2×SSC溶液中漂洗2次，5 min/次。最后將玻片依次置于75%乙醇、85%乙醇、100%乙醇各2 min脫水，烤片至56 ℃，干燥備用。

1.3.3 雜交 避光環境中，將探針混合液10 μL（2 μL探針，8 μL雜交緩沖液）滴于玻片雜交區域，加上蓋玻片，封膠；83 ℃水浴中變性5 min，將玻片置于預熱的濕盒中，42 ℃恒溫培養箱中過夜雜交。

1.3.4 洗片 第2天在暗處移去蓋玻片，依次經46 ℃預熱的2×SSC溶液和NP40溶液（40 mL 2×SSC溶液，40μL NP40洗滌液）洗滌，各1缸，分別為10 min和5 min，70%乙醇浸泡3 min，自然干燥，滴加15 μL DAPI（聯咪二苯吲哚）復染劑，加蓋玻片，分析。

1.4 FISH信號分析 復染后的玻片用OLYMPUS B×51熒光顯微鏡在DAPI/FIFC/RHOD三色濾光鏡激發下，觀察間期細胞的熒光雜交信號。

1.5 閾值建立 20例正常宮頸組織活檢標本，在100×10油鏡下觀察，每例隨機計數100個細胞。單個間期細胞核中紅綠信號比2：2為正常細胞；紅色信號>2個，綠色信號≥2個判斷為陽性細胞。計算每例出現陽性細胞的百分比，建立閾值，閾值=平均數（x）+3×標準差（SD）。本例閾值為8.66%，取整數9。

1.6 結果判定 100×10倍油鏡下觀察，每例隨機計數100個間期細胞，單個間期細胞核中紅綠信號比2∶2為正常細胞；紅色信號>2個，綠色信號≥2個判斷為陽性細胞。記錄紅綠信號數hTERC：CSP3，陽性細胞個數≥閾值（本實驗為9個）為hTERC基因擴增陽性。endprint

1.7 統計學處理 采用SPSS 13.0統計學軟件對數據進行處理，計數資料比較采用 字2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.2 宮頸活檢高級別上皮內瘤變（HSIL）區及其旁組織中hTERC基因的擴增情況 宮頸高級別上皮內瘤變（HSIL）區、瘤變邊緣≤1 mm、1 mm<瘤變邊緣≤2 mm、2 mm<瘤變邊緣≤3 mm以及3 mm<瘤變邊緣≤4 mm的hTERC基因陽性率分別為100%、92.31%、87.18%、64.10%和30.77%，其中，HSIL與瘤變邊緣≤1 mm、1 mm<瘤變邊緣≤2 mm比較差異無統計學意義（字2=5.10，P>0.05；字2=3.20，P>0.05）；HSIL與2 mm<瘤變邊緣≤3 mm、HSIL與3 mm<瘤變邊緣≤4 mm、1 mm<瘤變邊緣≤2 mm范圍與2 mm<瘤變邊緣≤3 mm、2 mm<瘤變邊緣≤3 mm與3 mm<瘤變邊緣≤4 mm范圍的比較差異均有統計學意義（字2=17.06，P<0.05； 字2=41.29，P<0.05； 字2=5.64，P<0.05； 字2=8.69，P<0.05）。

2.3 宮頸活檢低級別上皮內瘤變（LSIL）區及其旁組織中hTERC基因的擴增情況 宮頸低級別上皮內瘤變（LSIL）區、瘤變邊緣≤1 mm、1 mm<瘤變邊

緣≤2 mm、2 mm<瘤變邊緣≤3 mm以及3 mm<瘤變邊緣≤4 mm范圍的hTERC基因陽性率分別為41.67%、25.00%、4.17%、4.17%和4.17%，其中，LSIL與瘤變邊緣≤1 mm、1 mm<瘤變邊緣≤2 mm與2 mm<瘤變邊緣≤3 mm、2 mm<瘤變邊緣≤3 mm與3 mm<瘤變邊緣≤4 mm比較差異均無統計學意義（字2=1.50，P>0.05； 字2=0，P>0.05； 字2=0，P>0.05），而LSIL與1 mm<瘤變邊緣≤2mm、LSIL與2 mm<瘤變邊緣≤3 mm、LSIL與3 mm<瘤變邊緣≤4 mm、瘤變邊緣≤1 mm與1 mm<瘤變邊緣≤2 mm的比較差異均有統計學意義（字2=9.55，P<0.05； 字2=9.55，P<0.05； 字2=9.55，P<0.05； 字2=4.18，P<0.05）。

3 討論

宮頸癌的發生發展是一個多因素參與的、漫長而又復雜的過程，歷經鱗狀上皮不典型增生、宮頸上皮內瘤變（CIN）等癌前病變過程。因此，對CIN進行有效的早期篩查、診治，是非常有必要的[12]。

目前宮頸癌的早期篩查主要依靠TCT和HPV檢測，但兩者的臨床應用有一定局限性。細胞學檢查（TCT）是一種形態學檢查，受觀察者主觀因素的影響，有時難以做出正確診斷[13]；而針對HPV DNA的實驗也只能測出當時HPV的狀態，大多數婦女特別是性生活活躍的年輕女性，HPV感染是暫時的，且HPV陽性不能反映細胞變異的狀態，使HPV陽性的預測意義較低，事實上ASCUS和輕度細胞學異常在年輕女性中很常見，但低度病變發展到宮頸癌的比率并不高。因此需要尋找其他檢測指標以彌補這些檢測方法的不足。

近幾年，大量針對宮頸癌的研究表明，宮頸細胞癌變的過程中幾乎都伴有3號染色體3q26～3q27區域的擴增，而hTERC基因定位于該區域，提示，hTERC基因是與宮頸癌相關的一個重要基因[14]。熒光原位雜交（FISH）技術是一項分子細胞遺傳學技術，采用標記單鏈核苷酸為探針，按照堿基互補配對原則，與待測未知單鏈核苷酸雜交，形成熒光顯微鏡下可見的熒光信號，近年來應用日益廣泛[15-16]。FISH技術敏感性高、特異性好、定位準確、結果直接清晰，是一項客觀有效的指標，已被用于膀胱癌、乳腺浸潤癌等的基因檢測中。利用FISH技術來檢測宮頸脫落細胞和石蠟包埋組織細胞中hTERC基因的擴增也已被證實可行，且其陽性率隨宮頸病變分級的上升而逐漸增高[17-21]。

本研究應用FISH技術檢測宮頸活檢組織細胞中hTERC基因的表達情況，不僅檢測病變部位組織的hTERC基因表達情況，而且利用測微尺，連續觀測及檢測距病變部位不同距離的組織中hTERC基因表達情況，以期證實：（1）隨著距瘤變部位的距離增加，hTERC基因的擴增是突然降低還是逐漸降低；（2）如果是隨著距瘤變區距離的增加，hTERC基因擴增逐漸減少，那么距瘤變區多少的距離處，hTERC基因表達降至與正常鱗狀上皮一致。

本研究中，應用FISH技術檢測宮頸活檢組織細胞中hTERC基因的表達情況，利用測微尺連續觀察宮頸活檢高級別上皮內瘤變（HSIL）區及其旁組織中hTERC基因的擴增情況，發現：（1）隨著距瘤變部位距離的增加，hTERC基因的擴增表達是逐漸下降的，即病變處hTERC基因的擴增100%表達，距病變區越遠該基因的擴增率越小并逐漸達到正常，說明hTERC基因的擴增率與距瘤變部位的距離有相關性；（2）HSIL在距瘤變邊緣約2 mm處以外hTERC基因的表達下降至接近正常鱗狀上皮水平，其各范圍陽性率比較差異無統計學意義（P>0.05），表明2 mm以內雖然HE染色鏡下觀察細胞已無明顯異型性，但是2 mm及以外是基因水平上較正常上皮，是否可以在HSIL術中將距病變2 mm作為安全的手術范圍仍是值得探討的問題；（3）對LSIL區及其旁組織中hTERC基因擴增情況的觀察表明，病變旁1 mm處兩側的組織中hTERC基因表達率有差異，即距病變部位邊緣約1 mm處該基因的表達率可能降至正常鱗狀上皮表達水平，其各范圍陽性率比較差異無統計學意義（P>0.05）。雖然對LSIL患者不主張手術治療，但在臨床上常遇到患者hTERC基因檢測表達率升高，患者因過分緊張、擔心而要求手術者，在這種情況下，將距病變1 mm作為安全的手術范圍也是值得探討的。

本實驗希望能為今后CIN手術在保證治療安全的前提下最大可能減少創傷，起到拋磚引玉的作用，為宮頸癌前病變的篩查、早期診斷及治療提供新的途徑。endprint

參考文獻

[1] Liu H Q，Liu S L，Wang H，et al.Genomic amplification of the human telomerase gene （hTERC） associated with human papillomabirus is related to the progression of uterine cervical dysplasia to infasive cancer[J].Diagnostic Pathology，2012，7（4）：147.

[2]兆宏圖，馮曉杰，馬杰，等.FISH技術檢測宮頸病變中hTERC基因的表達及意義[J].河南醫學研究，2010，19（3）：257，262.

[3]陳柯霖，王雅杰，康熙雄，等.FISH技術探討hTERC基因與子宮頸上皮內瘤樣病變和宮頸癌的相關性[J].中國實驗診斷學，2012，16（7）：1199-1201.

[4] Heselmeyer-Haddad K，Janz V，Castle P E，et al.Detection of genomic amplification of the human telomerase gene （TERC） in cytologic specimens as a genetic test for the diagnosis of cervical dysplasia[J].Am J of Pathol，2003，163（15）：1406-1416.

[5] Heselmeyer-Haddad K，Sommerfeld K，White N M，et al.Genomic amplification of the human telomerase gene （TERC） in pap smears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005，166（8）：1229-1238.

[6] Lan Y L，Yu L，Jia C W，et al.Gain of human telomerase gene is associated with progression of cervical intraepithelial neoplasia grade I or II[J].Chinese Medical Journal，2012，125（9）：1599-1602.

[7] Yin G P，Li J，Zhu T Y，et al.The detection of hTERC amplification using fluorescence in situ hybridization in the diagnosis and prognosis of cervical intraepithelial neoplasia：a case control study[J].World Journal of Surgical Oncology，2012，10（8）：168.

[8] Zheng X H，Liang P H，Zheng Y R，et al.Clinical significance of hTERC gene detection in exfoliated cervical epithelial cells for cervical lesions[J].Gynecol Cancer，2013，23（5）：785-790.

[9] Xiang L B，Yang H J，Li J，et al.Different amplification patterns of the human telomerase RNA gene in invasive cervical carcinomas and cervical intraepithelial neoplasia grade III[J].Diagnostic Cytopatholoty，2011，163（5）：1206-1213.

[10]李靜然，魏麗惠，劉寧，等.FISH檢測宮頸脫落細胞hTERC基因的表達及其臨床意義的研究[J].現代婦科進展，2008，17（2）：725-729.

[11] Ren F F，Zhao S P，Ma D H，et al.The study of the production methods to detect the hTERC gene with Fluorescence in situ hybridization[J].Progress in Modern Biomedicine，2009，9（5）：4126-4129.

[12]甘丹卉，蔣光愉，羅新.FISH技術檢測hTERC基因對宮頸上皮內瘤變發展的前瞻性評估[J].中國計劃生育和婦產科，2013，5（1）：18-23.

[13] Hopman A H N，Theelen W，Hommelberg P P H，et al.Genomic integration of HPV and gain of human telomerase gene TERC at 3q26 are strongly associated events in the progression of uterine cervical dysplasia to invasive cancer[J].J Pathol，2006，210（4）：412-419.

[14]陳道楨，耿金花，薛文群，等.染色體不穩定性及其與婦科腫瘤形成關系的研究進展[J].東南大學學報，2004，23（5）：355.

[15] Jehan Z，Uddin S，AL-Kuraya K S.Insitu hybtidization as a molecular tool in cancer diagnosis and treatment[J].Curr Med Chem，2012，19（22）：3730-3738.

[16] Schwenner C，Stenzl A，Gakis G.Monitoring high-risk bladder cancer[J].Curr Opn Urol，2012，22（5）：421-426.

[17] Li Y，Ye F，Lu W G，et al.Detection of human telomerase RNA gene in cervical cancer and precancerous lesions：comparison with cytological and human papillomavirus DNA test findings[J].Int J Gynecol Cancer，2010，20（4）：631-637.

[18]羅新，陳舒，陳芳，等.FISH技術檢測宮頸hTERC基因的表達及其臨床意義[J].中國婦產科臨床雜志，2010，11（2）：88-91.

[19]劉爽，李亞里，姜淑芳，等.FISH技術檢測宮頸組織TERC基因擴增[J].中國婦產科臨床雜志，2012，13（5）：334-337.

[20]袁艷龍，何春年，徐明堂，等.應用熒光原位雜交技術在組織標本中檢測宮頸上皮病變的端粒酶RNA基因擴增[J].暨南大學學報，2011，40（3）：182-186.

[21]段清，馬洪達，楊維娜，等.應用熒光原位雜交法檢測宮頸脫落細胞中hTERC基因的擴增[J].天津醫藥，2009，6（37）：489-491.

（收稿日期：2014-07-16） （本文編輯：蔡元元）endprint

參考文獻

[1] Liu H Q，Liu S L，Wang H，et al.Genomic amplification of the human telomerase gene （hTERC） associated with human papillomabirus is related to the progression of uterine cervical dysplasia to infasive cancer[J].Diagnostic Pathology，2012，7（4）：147.

[2]兆宏圖，馮曉杰，馬杰，等.FISH技術檢測宮頸病變中hTERC基因的表達及意義[J].河南醫學研究，2010，19（3）：257，262.

[3]陳柯霖，王雅杰，康熙雄，等.FISH技術探討hTERC基因與子宮頸上皮內瘤樣病變和宮頸癌的相關性[J].中國實驗診斷學，2012，16（7）：1199-1201.

[4] Heselmeyer-Haddad K，Janz V，Castle P E，et al.Detection of genomic amplification of the human telomerase gene （TERC） in cytologic specimens as a genetic test for the diagnosis of cervical dysplasia[J].Am J of Pathol，2003，163（15）：1406-1416.

[5] Heselmeyer-Haddad K，Sommerfeld K，White N M，et al.Genomic amplification of the human telomerase gene （TERC） in pap smears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005，166（8）：1229-1238.

[6] Lan Y L，Yu L，Jia C W，et al.Gain of human telomerase gene is associated with progression of cervical intraepithelial neoplasia grade I or II[J].Chinese Medical Journal，2012，125（9）：1599-1602.

[7] Yin G P，Li J，Zhu T Y，et al.The detection of hTERC amplification using fluorescence in situ hybridization in the diagnosis and prognosis of cervical intraepithelial neoplasia：a case control study[J].World Journal of Surgical Oncology，2012，10（8）：168.

[8] Zheng X H，Liang P H，Zheng Y R，et al.Clinical significance of hTERC gene detection in exfoliated cervical epithelial cells for cervical lesions[J].Gynecol Cancer，2013，23（5）：785-790.

[9] Xiang L B，Yang H J，Li J，et al.Different amplification patterns of the human telomerase RNA gene in invasive cervical carcinomas and cervical intraepithelial neoplasia grade III[J].Diagnostic Cytopatholoty，2011，163（5）：1206-1213.

[10]李靜然，魏麗惠，劉寧，等.FISH檢測宮頸脫落細胞hTERC基因的表達及其臨床意義的研究[J].現代婦科進展，2008，17（2）：725-729.

[11] Ren F F，Zhao S P，Ma D H，et al.The study of the production methods to detect the hTERC gene with Fluorescence in situ hybridization[J].Progress in Modern Biomedicine，2009，9（5）：4126-4129.

[12]甘丹卉，蔣光愉，羅新.FISH技術檢測hTERC基因對宮頸上皮內瘤變發展的前瞻性評估[J].中國計劃生育和婦產科，2013，5（1）：18-23.

[13] Hopman A H N，Theelen W，Hommelberg P P H，et al.Genomic integration of HPV and gain of human telomerase gene TERC at 3q26 are strongly associated events in the progression of uterine cervical dysplasia to invasive cancer[J].J Pathol，2006，210（4）：412-419.

[14]陳道楨，耿金花，薛文群，等.染色體不穩定性及其與婦科腫瘤形成關系的研究進展[J].東南大學學報，2004，23（5）：355.

[15] Jehan Z，Uddin S，AL-Kuraya K S.Insitu hybtidization as a molecular tool in cancer diagnosis and treatment[J].Curr Med Chem，2012，19（22）：3730-3738.

[16] Schwenner C，Stenzl A，Gakis G.Monitoring high-risk bladder cancer[J].Curr Opn Urol，2012，22（5）：421-426.

[17] Li Y，Ye F，Lu W G，et al.Detection of human telomerase RNA gene in cervical cancer and precancerous lesions：comparison with cytological and human papillomavirus DNA test findings[J].Int J Gynecol Cancer，2010，20（4）：631-637.

[18]羅新，陳舒，陳芳，等.FISH技術檢測宮頸hTERC基因的表達及其臨床意義[J].中國婦產科臨床雜志，2010，11（2）：88-91.

[19]劉爽，李亞里，姜淑芳，等.FISH技術檢測宮頸組織TERC基因擴增[J].中國婦產科臨床雜志，2012，13（5）：334-337.

[20]袁艷龍，何春年，徐明堂，等.應用熒光原位雜交技術在組織標本中檢測宮頸上皮病變的端粒酶RNA基因擴增[J].暨南大學學報，2011，40（3）：182-186.

[21]段清，馬洪達，楊維娜，等.應用熒光原位雜交法檢測宮頸脫落細胞中hTERC基因的擴增[J].天津醫藥，2009，6（37）：489-491.

（收稿日期：2014-07-16） （本文編輯：蔡元元）endprint

參考文獻

[1] Liu H Q，Liu S L，Wang H，et al.Genomic amplification of the human telomerase gene （hTERC） associated with human papillomabirus is related to the progression of uterine cervical dysplasia to infasive cancer[J].Diagnostic Pathology，2012，7（4）：147.

[2]兆宏圖，馮曉杰，馬杰，等.FISH技術檢測宮頸病變中hTERC基因的表達及意義[J].河南醫學研究，2010，19（3）：257，262.

[3]陳柯霖，王雅杰，康熙雄，等.FISH技術探討hTERC基因與子宮頸上皮內瘤樣病變和宮頸癌的相關性[J].中國實驗診斷學，2012，16（7）：1199-1201.

[4] Heselmeyer-Haddad K，Janz V，Castle P E，et al.Detection of genomic amplification of the human telomerase gene （TERC） in cytologic specimens as a genetic test for the diagnosis of cervical dysplasia[J].Am J of Pathol，2003，163（15）：1406-1416.

[5] Heselmeyer-Haddad K，Sommerfeld K，White N M，et al.Genomic amplification of the human telomerase gene （TERC） in pap smears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005，166（8）：1229-1238.

[6] Lan Y L，Yu L，Jia C W，et al.Gain of human telomerase gene is associated with progression of cervical intraepithelial neoplasia grade I or II[J].Chinese Medical Journal，2012，125（9）：1599-1602.

[7] Yin G P，Li J，Zhu T Y，et al.The detection of hTERC amplification using fluorescence in situ hybridization in the diagnosis and prognosis of cervical intraepithelial neoplasia：a case control study[J].World Journal of Surgical Oncology，2012，10（8）：168.

[8] Zheng X H，Liang P H，Zheng Y R，et al.Clinical significance of hTERC gene detection in exfoliated cervical epithelial cells for cervical lesions[J].Gynecol Cancer，2013，23（5）：785-790.

[9] Xiang L B，Yang H J，Li J，et al.Different amplification patterns of the human telomerase RNA gene in invasive cervical carcinomas and cervical intraepithelial neoplasia grade III[J].Diagnostic Cytopatholoty，2011，163（5）：1206-1213.

[10]李靜然，魏麗惠，劉寧，等.FISH檢測宮頸脫落細胞hTERC基因的表達及其臨床意義的研究[J].現代婦科進展，2008，17（2）：725-729.

[11] Ren F F，Zhao S P，Ma D H，et al.The study of the production methods to detect the hTERC gene with Fluorescence in situ hybridization[J].Progress in Modern Biomedicine，2009，9（5）：4126-4129.

[12]甘丹卉，蔣光愉，羅新.FISH技術檢測hTERC基因對宮頸上皮內瘤變發展的前瞻性評估[J].中國計劃生育和婦產科，2013，5（1）：18-23.

[13] Hopman A H N，Theelen W，Hommelberg P P H，et al.Genomic integration of HPV and gain of human telomerase gene TERC at 3q26 are strongly associated events in the progression of uterine cervical dysplasia to invasive cancer[J].J Pathol，2006，210（4）：412-419.

[14]陳道楨，耿金花，薛文群，等.染色體不穩定性及其與婦科腫瘤形成關系的研究進展[J].東南大學學報，2004，23（5）：355.

[15] Jehan Z，Uddin S，AL-Kuraya K S.Insitu hybtidization as a molecular tool in cancer diagnosis and treatment[J].Curr Med Chem，2012，19（22）：3730-3738.

[16] Schwenner C，Stenzl A，Gakis G.Monitoring high-risk bladder cancer[J].Curr Opn Urol，2012，22（5）：421-426.

[17] Li Y，Ye F，Lu W G，et al.Detection of human telomerase RNA gene in cervical cancer and precancerous lesions：comparison with cytological and human papillomavirus DNA test findings[J].Int J Gynecol Cancer，2010，20（4）：631-637.

[18]羅新，陳舒，陳芳，等.FISH技術檢測宮頸hTERC基因的表達及其臨床意義[J].中國婦產科臨床雜志，2010，11（2）：88-91.

[19]劉爽，李亞里，姜淑芳，等.FISH技術檢測宮頸組織TERC基因擴增[J].中國婦產科臨床雜志，2012，13（5）：334-337.

[20]袁艷龍，何春年，徐明堂，等.應用熒光原位雜交技術在組織標本中檢測宮頸上皮病變的端粒酶RNA基因擴增[J].暨南大學學報，2011，40（3）：182-186.

[21]段清，馬洪達，楊維娜，等.應用熒光原位雜交法檢測宮頸脫落細胞中hTERC基因的擴增[J].天津醫藥，2009，6（37）：489-491.

（收稿日期：2014-07-16） （本文編輯：蔡元元）endprint