胃炎清膠囊對慢性胃炎大鼠模型治療作用的實驗研究

邱賽紅 ，李 笑 ，李 俠 ，曾曉艷 ，余 娜

（1．湖南中醫藥大學藥學院，湖南 長沙 410208；2.湖南中醫藥大學2013級碩士研究生班，湖南 長沙 410208；3.湖南省嘉禾中醫院，湖南 郴州 424500）

胃炎清膠囊對慢性胃炎大鼠模型治療作用的實驗研究

邱賽紅1，李 笑2，李 俠3，曾曉艷1，余 娜1

（1．湖南中醫藥大學藥學院，湖南 長沙 410208；2.湖南中醫藥大學2013級碩士研究生班，湖南 長沙 410208；3.湖南省嘉禾中醫院，湖南 郴州 424500）

目的分析以清熱燥濕和胃法組方的胃炎清膠囊對慢性胃炎的治療作用及機制。方法取成年大鼠，交替用新鮮牛膽汁、丙三醇及乙酰水楊酸大劑量灌胃制備慢性胃炎模型。模型成立后分組給藥，并設空白與陽性藥對照。治療6周后取胃，分析胃液成分并進行胃組織形態學病理分析。結果造模使大鼠胃液的pH升高，胃酸分泌減少，胃黏液屏障的黏液游離。病理學可見胃黏膜上皮變性，固有膜水腫充血和炎細胞浸潤，腺體變短、數目減少及結締組織增生等萎縮性改變。與模型組比較，胃炎清使胃液游離酸和總酸度明顯提高，胃液蛋白酶活性增強，胃液中游離黏液分泌減少；胃黏膜組織的病變程度減輕，病理計分下降。作用隨劑量的增加而增強，差異有統計學意義（P<0.05，P<0.01）。結論胃炎清膠囊對治療大鼠慢性胃炎有效。可緩解消化不良的臨床癥狀，并減輕胃黏膜的病理改變。

胃炎清膠囊；慢性胃炎；動物模型

1 材料

1．1 藥物

胃炎清膠囊由湖南省嘉禾縣中醫院制劑室提供，為供灌制膠囊用的內容物，含生藥量0.84 g/kg，批號：20090925。試驗時用蒸餾水配制成所需濃度。胃復舒膠囊由昆明滇虹藥業有限公司生產，0.3 g/粒，批號：20090510。試驗時去膠囊取內容物用蒸餾水配制成所需濃度。

1．2 動物

SD大鼠70只，清潔級。體質量220～250 g，雌雄各半。由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，生產許可證號SCXK(湘)2009-0004。在湖南中醫藥大學實驗動物中心飼養、觀察，使用許可證號SYXK(湘)2009-0001。

1.3 儀器

FA1004電子天平（上海天平廠生產）；754型分光光度計（上海第三分析儀器廠生產）；Motic顯微鏡攝影系統（北京麥克奧迪公司生產）。

1.4 試劑

玉敏沒有讓步，堅持請許沁配合。玉敏不再脆弱了，脆弱是沒有用的，就是把萬里長城哭倒了，也不會飛來三十萬。玉敏繼續給許沁打電話，許沁一直未接。四五天后，許沁停機了。

新鮮牛膽汁取自長沙市定點屠宰場。乙酰水楊酸片由湖南新匯制藥有限公司生產，批號：20090402。45度白酒為北京紅星二鍋頭酒廠生產。阿利新藍為Fluka公司產品。胃蛋白酶測試盒由南京建成生物工程研究所提供，批號：20090829。其他試劑均為市售AR級。

2 方法

2．1 慢性胃炎模型的建立

參照文獻[2-4]，先制備造模用的兩種試劑。試劑A：將新鮮牛膽汁與丙三醇（甘油）按1∶1體積配成。試劑B：取乙酰水楊酸用45度白酒配制成3%溶液。大鼠稱質量、編號后，隨機取14只作為正常對照，其余均進行灌胃造模：每周2次以試劑A按4 mL/只灌胃；每周1次以試劑B按10 mL/kg灌胃。造模5周后，每周抽檢雌雄大鼠各1只，剖檢觀察胃黏膜與正常動物比較。觀察造模動物是否已有充血、水腫及缺損、出血點等形成，以確定模型是否建立。

2．2 動物分組及給藥

上述造模方法連續6周后，觀察造模動物胃黏膜呈灰白色且無光澤，伸展性較差，表面黏液少，可見散在出血點。而正常動物胃黏膜表面則平整光滑，呈粉紅色，附有一層較厚的黏液，彈性好。由此表明，所制備的大鼠慢性胃炎模型已建立，即進行分組給藥。造模后的大鼠按體質量分層，隨機分為5組。即模型對照組，胃炎清高、中、低劑量組和胃復舒陽性對照組，每組10只。模型組和正常組給蒸餾水，胃炎清膠囊低、中、高劑量分別為1.94、3.88、7.77 g/（kg·d）（分別相當于臨床等效劑量 0.75、1.5、3 倍）；胃復舒膠囊為 0.5 g/（kg·d）(相當于臨床等效劑量)。每日灌胃給藥，灌胃容量均為10 mL/（kg·d）。連續6周，每周稱大鼠體質量1次，根據體質量變化調整灌胃量。給藥期間，仍按原造模方法繼續灌胃造模。當天需造模灌胃時，與試驗用藥分別在上、下午進行。

2．3 檢測指標

2．3．1 標本采集 末次給藥結束后，大鼠禁食24 h，不禁水。3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉動物后腹中線切口，結扎幽門。從十二指腸給藥1次。縫合創口。5 h后以頸椎脫臼法處死動物，摘取全胃。沿胃大彎剖開胃腔，收集胃液。并用4 mL蒸餾水分2次沖洗胃腔。將收集的胃液離心(3 000 r/min，15 min)后取上清液，供胃液分析用。觀察記錄各組大鼠胃黏膜大體情況后，剪取前胃至幽門處1.5 cm×1.5 cm全層胃壁1塊，用4%甲醛固定供病理學檢查。

2．3．2 胃液分析 取胃液分別進行胃酸、胃蛋白酶活性及游離黏液量測定。（1）胃酸測定：取胃液1 mL。加入甲基橙和酚酞指示劑各2滴，混勻后呈櫻紅色。用0.01 mol／L NaOH標準溶液滴定至櫻紅色消失、開始出現橙黃色所用的NaOH量為胃液的游離酸終點量。繼續滴定至出現紅色所用的NaOH量總和為胃液的總酸度終點量。按下式計算游離酸和總酸度：游離酸(mmol／L)=游離酸度終點量×NaOH 濃度×1 000；總酸度(mmol／L)=總酸度終點量×NaOH 濃度×1 000。（2）胃蛋白酶活性測定：按照胃蛋白酶試劑盒說明書方法進行。（3）胃液中游離黏液量測定：取胃液1 mL，加入 1%阿利新藍溶液 0．1 mL 和 PBS(pH 5．8)3.3 mL，再加蒸餾水至5．0 mL，混勻。 室溫靜置24 h；3 000 r/min離心10 min。取上清液于波長615 nm處比色，計算阿利新藍量。所得值與加入胃液標本中的阿利新藍量的差值，即為游離黏液量。

2．3．3 胃壁組織病理組織學檢查 取經固定的胃壁組織，經常規脫水、包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察胃黏膜的病理變化情況。就上皮細胞變性、壞死，黏膜及黏膜下炎癥細胞浸潤及腺體減少與結締組織增生的程度進行分析判斷。對所觀察的組織學改變進行病變程度分析。依次按 “-”、“+”、“++”、“+++”進行半定量。其中“-”為無明顯改變，“+”為病理改變輕微，“++”為病理改變明顯，“+++”為病理改變嚴重。分別計為0、1、2、3分，對病變計分進行統計學分析。

2．4 統計學分析

3 結果

3．1 對慢性胃炎模型胃液酸度的影響

與正常對照組比較，模型組動物的胃液游離酸減少，總酸排出量明顯下降（P<0.01）。采用胃炎清治療的各組，胃液中游離酸和總酸度與模型組比較均有提高，其作用隨劑量的增加而更明顯，其中中、高劑量組與模型組比較差異均有統計學意義（P<0.01）。表明胃炎清對慢性胃炎模型的胃酸減少有治療作用。胃復舒膠囊的作用與模型組比較明顯（P<0.01）。 見表 1。

表1胃炎清對慢性胃炎大鼠胃液酸度的影響（±s，n=10，mmol/L）

表1胃炎清對慢性胃炎大鼠胃液酸度的影響（±s，n=10，mmol/L）

注：與正常組比較☆P<0.05，☆☆P<0.01；與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。下表同。

組 別正常組模型組胃炎清組低胃炎清組中胃炎清組高胃復舒組劑量[g/（kg·d）]— —1.94 3.88 7.77 0.50胃液游離酸52.32±4.85 34.68±4.23☆☆33.98±4.22 40.92±3.15**42.10±5.72**40.86±3.79**胃液總酸90.99±10.33 60.36±7.85☆☆61.36±7.95 73.01±3.74**74.11±9.44**72.93±4.95**

3．2 對慢性胃炎模型胃蛋白酶活性與游離胃黏液的影響

模型組大鼠胃液胃蛋白酶活性明顯低于正常組（P<0.01），胃液中游離黏液較正常組動物明顯升高（P<0.01）。不同劑量的胃炎清膠囊對模型大鼠的胃液蛋白酶活性有提高的作用，游離黏液量分泌減少，中、高劑量與模型組比較差異有統計學意義（P<0.05，P<0.01）。見表 2。

表2 胃炎清對慢性胃炎大鼠胃蛋白酶活性與游離胃黏液的影響 （±s，n=10）

表2 胃炎清對慢性胃炎大鼠胃蛋白酶活性與游離胃黏液的影響 （±s，n=10）

組 別正常組模型組胃炎清組低胃炎清組中胃炎清組高胃復舒組劑量[g/（kg·d）]— —1.94 3.88 7.77 0.50胃蛋白酶活性（U/mL）98.35±12.32 49.05±18.87☆☆49.40±9.47 65.97±8.95*74.30±23.98**69.40±12.45**游離黏液量（mg阿利新藍）0.72±0.07 0.82±0.04☆☆0.78±0.03 0.76±0.05*0.75±0.03*0.76±0.06*

3．3 胃壁組織結構形態觀察結果

肉眼觀察，正常組胃黏膜組織表面呈粉紅色，光滑而有光澤，有較多透明的黏液。造模動物的胃黏膜顏色較淺呈灰白色或暗紅，缺少光澤，表面黏液少，部分可見散在出血點。部分胃黏膜表面有苔狀物，去除后暴露出黏膜下血管。其中模型組上述病變程度最為明顯，各治療組較模型組均有不同程度的減輕。

HE染色后光鏡下觀察，正常組胃壁組織各層結構清晰。黏膜上皮完整，固有膜內腺體排列密集，黏膜下層無血管擴張充血。模型組大鼠黏膜層變薄，上皮細胞變性壞死、脫落明顯，黏膜層及黏膜下均有較多的炎細胞浸潤。間質內胃腺減少、或呈囊狀擴張，可見結締組織增生。采用胃炎清及胃復舒治療的各組，胃組織的病理改變均較模型組不同程度減輕。上皮的變性、壞死、脫落減輕，炎細胞浸潤減少。腺體減少程度較輕。病變計分統計學結果，中劑量以上較模型組降低，差異有統計學意義 （P<0.05，P<0.01）。見表3及圖1所示，彩圖見64頁。

4 討論

慢性胃炎作為消化系統最常見的疾病，發病率有隨年齡的增長而增高的趨勢。有報道[5]認為，年過50歲的人約有半數患過此病。慢性胃炎的臨床表現缺乏特異性癥狀，主要表現為消化不良癥狀：上腹部飽脹，疼痛，噯氣，惡心，食欲減退等。組織學上，胃黏膜持續性存在慢性炎癥性病變，常易發展為萎縮性改變。

表3 各組胃壁組織切片病理學檢查結果（±s，n=10，分）

表3 各組胃壁組織切片病理學檢查結果（±s，n=10，分）

病理計分組 別正常組模型組胃炎清組低胃炎清組中胃炎清組高胃復舒組劑量[g/（kg·d）]— —1.94 3.88 7.77 0.50上皮細胞變性0 2.30±0.82☆☆2.10±0.88 1.80±0.79 1.30±0.95**1.50±1.08*炎細胞浸潤0.10±0.32 2.30±0.67☆☆1.70±0.95 1.20±0.79**1.00±0.67**1.30±0.82**腺體減少及纖維化0.10±0.32 1.70±0.48☆☆1.20±0.79 0.80±0.63**0.60±0.52**1.00±0.82*

慢性胃炎的具體發病原因雖然尚不十分清楚，但各種不良因素的持續刺激對胃的損害仍是最主要的原因。現代生活中，嗜食辛辣、滋膩之物，和進食無規律等不良的生活習性，是造成慢性胃炎發病率增加的重要因素。故本研究制備慢性胃炎模型的方法，綜合了文獻報告的多種方法，模擬生活中多因素對胃刺激，采用大劑量牛膽汁及水楊酸與酒交替灌胃。灌胃的幾種物質都含有對胃刺激成分。膽汁中的膽鹽削弱胃黏膜的保護，使胃腔中的酸反彌散入胃黏膜；水楊酸和酒直接損傷胃黏膜。造模時的大體積灌胃量模擬暴飲暴食環節。采用本法造模可引起動物胃黏膜壁細胞的受損，造成胃液pH升高，胃酸分泌減少，組成黏液屏障的胃黏液游離和胃蛋白酶的分泌減少。上述改變與黏膜上皮受損及隨著病變加劇而出現的胃腺萎縮有關。

研究顯示，胃炎清能減輕造成消化不良癥狀反應的胃酸異常，可針對性改善慢性胃炎的臨床癥狀；可減輕慢性胃炎病變過程中的上皮細胞變性、胃壁組織炎細胞浸潤、腺體減少及纖維化等胃壁組織的病變程度。由此認為，胃炎清膠囊治療慢性胃炎具有較好的藥理學基礎。

一般認為，慢性胃炎的中醫辨證有虛、實不同的多種證型[6]。嘉禾具中醫院通過對臨床診療進行總結發現，當地以脾胃濕熱證型居多。其原因有可能與嘉禾地處湘南，氣候潮濕，人們嗜食酒、煙、火鍋等辛辣滋膩之物有關。治宜清熱燥濕，理氣和胃為主。故以黃連、黃芩、厚樸等組成“胃炎清膠囊”。立法組方與臨床實際密切聯系，是該制劑多年來能取得較好療效的重要基礎。另也有研究報道認為，濕熱毒邪留戀脾胃是導致慢性胃炎反復發作的重要病機，清熱燥濕和胃法對本病的治療具有重要的作用[7-8]。故在中醫藥對慢性胃炎的臨床治療中，清熱燥濕和胃法是值得引起重視的有效治法。

圖1 各組胃黏膜組織病理切片顯微圖（HE 10×25）

[1]中華醫學會消化病學分會．中國慢性胃炎共識意見(J]．胃腸病學，2006，11(11)：674-684．

[2]項 尊，姒安敏，黃懷德.大鼠慢性胃炎模型的快速建立及致萎縮因素探討[J].浙江大學學報（醫學版），2001，30（1）：16-18.

[3]朱烈彬，盧訓叢，石新蘭，等.乳鹿膏治療大鼠慢性胃炎的試驗研究[J].湖北中醫雜志，2008，30（2）：12-14.

[4]鄭 億，王玉華，付麗佳，等.胃樂沖劑對大鼠慢性萎縮性胃炎的實驗研究[J].中國傷殘醫學，2008，16（5）：22-24.

[5]單兆偉．內科多發病中西醫綜合治療[M]．北京：人民衛生出版社，2003：229.

[6]中國中西醫結合學會消化系統疾病專業委員會．慢性胃炎中西醫結合診療共識意見(2011·天津)[J]．現代消化及介入診療，2012，17(3)：172-177.

[7]梁玉瑛，張淑娥.清熱化濕顆粒治療急、慢性胃炎104例[J].陜西中醫，2007，28（9）：1 143-1 144.

[8]蔡星暉.清熱燥濕解毒法治療膽汁反流性胃炎78例[J].長春中醫藥大學學報，2009，25（3）：370-371.

（本文編輯 楊 瑛）

Experimental Study on Treatment of Chronic Gastritis Rat Models by Weiyanqing Capsule

QIU Saihong1,LI Xiao2,LI Xia3,ZENG Xiaoyan1,YU Na1
(1.School of Pharmacy,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China;2.2013 Master Degree Candidate,Hunan University of Chinese Medicine,Hunan Changsha 410208,China;3.Jiahe Hospital of TCM,Chenzhou,Hunan 424500,China)

ObjectiveTo analyze the effect and pharmacological basis of Weiyanqing capsule composed of heat-clearing,dampness-eliminating and stomach-regulating medicine on chronic gastritis.MethodsThe adult rats were given a gavage of fresh oxgall,glycerol andacetylsalicylic acid with large doses alternately to prepare the chronic gastritis models.After the modles built successfully,each group was given medicine.The blank group and positive control group were set at the same time.Their stomachs were taken out after 6 weeks of treatment,the composition of gastric juice and the pathology of stomach tissue morphological were analyzed.ResultsThe increased pH of gastricjuice,decreased gastric acid secretion,free gastric mucus which composed mucous barrier were showed through molding.Some atrophic changes,such as gastric mucosal epithelial degeneration,laminapropria edemaand hyperemia,and inflammatory cellsinfiltration were observed in pathology,glands became shorter and less in some rats,also with connective tissue hyperplasia.Gastric mucosal epithelial degeneration,lamina propria edema and hyperemia,and inflammatory cells infiltration were observed in pathology,glands became shorter and less in some rats,also with connective tissue hyperplasia.Compared with the model group,the free acid of gastric juice and total acidity treated with Weiyanqing were improved obviously,the activity of gastric protease was strengthened,the secretion of free mucus in gastric juice decreased,the degree of gastric mucosal tissue lesions was relieved and a number of pathological scoring went down in gastritis-qing treatment group.These functions enhanced with the increase of the dose.ConclusionWeiyanqing capsule is effective on relieving symptoms ofindigestion in the pathologicalprocess of chronic gastritis and reducing the pathologicalchangesofgastricmucosadamage in the treatment of chronic gastritis.

Weiyanqing capsule;chronic gastritis;animal models

R285.5；R573.3

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2014.11.003.010.05

2014-07-01

湖南省“十二·五”藥學重點學科建設項目。

邱賽紅，女，教授，主要從事中藥學教學及中藥新藥藥理與毒理研究。

·基礎研究·