微量離心柱法檢測肝癌患者血清甲胎蛋白異質體臨床意義分析＊

黃海深，周永均，何蘭香，李宇鳴，唐光定，陳國強（.清遠市陽山縣人民醫院檢驗科，廣東清遠 5300；.清遠市陽山縣疾控中心，廣東清遠 5300）

原發性肝細胞癌（PLC）是最常見的惡性腫瘤之一，且病情進展快，療效欠佳，病死率較高［1］。近年來，國內PLC發病率呈明顯上升的趨勢。早期診治是PLC患者達到最佳治療效果的關鍵。甲胎蛋白（AFP）是當前用于PLC早期診斷的最有價值的血清腫瘤標志物，其診斷靈敏度較高，但診斷特異度相對較低，有可能導致部分除PLC以外的良性肝病患者也被診斷為PLC，給PLC的臨床診斷和鑒別診斷帶來一定的困難［2］。AFP存在多種異質體，依據與小扁豆凝集素（LCA）親和力的不同，AFP異質體可被分為非結合型（AFP－L1、AFP－L2）和結合型（AFP－L3）。其中AFP－Ll主要出現在良性肝臟疾病中（如慢性肝炎和肝硬化），AFP－L2多由卵黃囊腫癌組織產生，可在孕婦血清中檢出，AFP－L3則具有較高的肝癌細胞特異性［3］。已有研究證實，血清AFP－L3對PLC的診斷靈敏度和特異度均高于血清AFP，具有重要的臨床應用價值［4］。筆者采用微量離心柱法檢測了200例PLC、肝硬化和慢性肝炎患者血清AFP和AFP－L3水平，以探討血清AFP－L3對PLC的臨床診斷價值，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年6至2012年10月于陽山縣人民醫院就診的PLC及其他肝病患者200例。其中PLC患者80例（PLC組），男58例、女22例，年齡28～71歲，平均（52.3±13.5）歲，均經B超及病理學檢查確診，且符合1999年第四屆全國肝癌學術會議修訂的PLC診斷標準［5］；肝硬化患者66例（肝硬化組），男48例、女18例，年齡30～68歲，平均（53.1±12.9）歲；慢性肝炎患者54例（慢性肝炎組），男39例、女15例，年齡26～73歲，平均（49.8±11.2）歲。肝硬化及慢性肝炎患者均符合2000年中華醫學會傳染病與寄生蟲病學會、肝病學分會聯合修訂的病毒性肝炎防治方案中的診斷標準［6］。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 患者禁食12h后，于次日清晨采集空腹靜脈血5.0mL，3 000r／min離心10min后分離血清，用于各指標檢測。

1.2.2 AFP－L3的分離純化 采用北京熱景生物技術有限公司生產的含有LCA的微量親和吸附離心管分離純化AFPL3，具體分離操作嚴格按照試劑盒操作指南進行。主要原理為：離心柱內裝有耦聯了LCA的瓊脂糖微球（可以特異性結合AFP－L3），當受檢者血清流經離心柱時，與LCA結合力強的AFP－L3結合于離心柱內瓊脂糖微球表面，經過清洗后，未與瓊脂糖微球結合的AFP被洗脫，最后經離心洗脫可獲得AFPL3。

1.2.3 AFP的檢測 采用鄭州安圖公司LUMO化學發光分析儀及配套試劑分別檢測血清中的總AFP水平和經LCA親和純化后的AFP－L3水平，再計算AFP－L3在總AFP中所占比例（AFP－L3%）。以 AFP＞25ng／mL、AFP－L3%≥10%作為臨床判斷AFP、AFP－L3異常升高的標準，檢測結果超過上述標準時，判為檢測結果陽性。

1.3 統計學處理 采用SPSS13.0統計學軟件進行數據分析；計量資料以表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗；P＜0.05為比較差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各研究組血清AFP、AFP－L3%水平和陽性率比較 PLC組患者血清AFP、AFP－L3%水平均高于肝硬化組和慢性肝炎組（P＜0.05）。以 AFP＞25ng／mL，AFP－L3%≥10%作為陽性判斷標準，PLC組患者血清AFP陽性率高于肝硬化組和慢性肝炎組（P＜0.05），PLC組患者血清 AFP－L3%陽性率也高于肝硬化組和慢性肝炎組（P＜0.05），見表1。

表1 各研究組患者血清AFP、AFP－L3%水平和陽性率比較

2.2 不同AFP水平PLC患者血清AFP－L3%水平和陽性率比較 根據血清AFP水平，將PLC患者分為AFP低水平組（AFP＜200ng／mL）、AFP中水平組（200～400ng／mL）、AFP高水平組（AFP＞400ng／mL），各組患者間血清 AFP－L3%水平和陽性率比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同AFP水平PLC患者血清AFP－L3%水平和陽性率比較

3 討 論

PLC是一種嚴重威脅人體生命健康的疾病，就全球范圍而言，在癌癥類疾病中，PLC患者病死率居第三位，僅次于胃癌和肺癌，國內每年PLC死亡患者占全世界PLC死亡患者總數中的45%［7］。至今為止，AFP仍是臨床用于診斷PLC的最重要腫瘤標志物，已被廣泛用于PLC篩查、診斷、療效評價和預后評估等。但妊娠、活動性肝病、胚胎性腫瘤等因素也可導致血清AFP濃度出現不同程度的升高，這給PLC的臨床診斷帶來了很大的困難。尤其對于血清AFP濃度尚未出現明顯升高的PLC患者而言，僅檢測血清AFP很難實現與肝硬化、慢性肝炎的鑒別診斷［8］。本研究結果顯示，PLC患者血清AFP水平雖然明顯高于肝硬化和慢性肝炎患者，但肝硬化和肝炎患者血清AFP水平也有不同程度的升高，以AFP＞25ng／mL作為陽性判斷標準，肝硬化和慢性肝炎患者中還是存在較高的AFP陽性率。因此，單純血清AFP檢測在良、惡性肝病鑒別診斷方面存在一定的局限性，有必要尋找敏感性和特異性更高的PLC診斷標志物［9］。

在PLC臨床診斷中，AFP仍然具有不可替代的作用，但隨著對其研究的不斷深入，AFP－L3在PLC早期診斷、鑒別診斷、療效評價和預后評估等方面的應用價值逐漸受到重視。AFPL3是Purves等［10］于1970年首次發現的LCA結合型AFP異質體，為肝癌細胞所特有。研究還發現，AFP－L3的陽性率與PLC腫瘤組織體積大小及血清總AFP濃度無關，對血清AFP濃度較低的PLC具有較高的早期診斷價值，且相比影像學檢查，血清AFP－L3檢測可使PLC的診斷時間提前9～12個月［11］。本研究結果顯示，不同 AFP濃度的PLC患者血清AFP－L3%水平和陽性率比較差異無統計學意義（P＞0.05），提示血清AFP－L3%在低血清AFP濃度PLC的早期診斷和PLC與良性肝病的鑒別診斷中具有極為重要的價值［12］。美國食品藥品監督管理局（FDA）已于2005年10月批準將AFP－L3應用于臨床，國內在1999年第四屆全國肝癌學術會議上也將AFP－L3列為診斷肝癌的特異性指標。此外，AFP－L3還與PLC的惡性程度相關，可用于PLC療效評價和預后評估，也可以用作良、惡性肝病鑒別診斷及良性肝病惡變的預警指標［13－15］。

本研究顯示，以AFP－L3%≥10%作為診斷PLC的陽性判斷標準，則PLC患者AFP－L3%陽性率為87.5%，明顯高于肝硬化組（25.8%）和慢性肝炎組（24.1%）的陽性率（P＜0.05）；尤其在AFP＜200ng／mL的低濃度PLC患者中，AFP－L3%陽性率為86.7%，與肝硬化和慢性肝炎患者比較差異亦有統計學意義（P＜0.05）。上述結果也證實AFP－L3%適用于低血清AFP濃度PLC患者的早期診斷，對PLC與慢性肝炎、肝硬化等良性肝病的鑒別診斷具有重要意義。尤其是低血清AFP濃度的慢性肝炎、肝硬化等良性肝病患者，定期檢測、動態監測血清AFP－L3%水平，有助于及時發現疾病的惡變傾向，盡早明確診斷［16］。與此同時，對于AFP－L3%≥10%的肝病患者，有必要進行定期隨訪和密切追蹤。

AFP－L3檢測方法多利用其具有與LCA特異性結合的特性建立和發展而來，其中親和吸附離心管法因技術成熟，臨床應用較多［17］。本研究中采用的國產微量離心柱法試劑對在血清AFP－L3分離純化和檢測方面具有操作簡便快捷、穩定性好、成本低廉等特點，適宜在基層醫療機構中推廣應用［18］。

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