不同方法檢測腸道病毒71型IgM抗體在手足口病診斷中的意義

杜 昆（荊州市第一人民醫院檢驗科，湖北荊州 434000）

手足口病是好發于嬰幼兒的感染性疾病，臨床癥狀主要表現為發熱和手足口部皰疹，少數患兒可出現無菌性腦膜炎、腦炎、心肌炎、肺水腫和呼吸循環衰竭等并發癥而導致死亡［1－3］。手足口病可由多種腸道病毒引起，主要包括腸道病毒71型（EV71）和柯薩奇病毒A16型（CA16），其中EV71感染是引起國內手足口病患兒死亡的主要原因［4－5］。進行EV71檢測不但有利于手足口病的早期診斷和早期治療，而且可以降低該病引起的并發癥發生率，具有重要的臨床價值。本研究采用免疫層析法（ICA）和酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測179例臨床標本，以分析兩種方法檢測EV71的臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年3～10月于本院兒科確診的手足口病患兒135例，男75例、女60例，年齡5個月至10歲，平均（3.02±2.51）歲，均符合衛生部頒發的《手足口病診療指南（2008年版）》診斷標準［6］。同期于本院排除手足口病診斷的患兒共44例，男25例、女19例，年齡6個月至9歲，平均（3.52±2.31）歲。

1.2 主要試劑 EV71IgM抗體ICA檢測試劑盒和ELISA檢測試劑盒均購自北京萬泰生物藥業股份有限公司。

1.3 方法 采集所有受試患兒未抗凝靜脈外周血2mL，常規方法離心后分離血清標本用于EV71IgM抗體檢測。（1）ICA檢測嚴格按照試劑盒說明書進行操作；結果判斷標準：測試區和對照區內同時出現條帶，判為陽性；僅對照區內出現條帶，判為陰性；測試區和對照區均無條帶，或只有測試區有條帶，均判為無效，需重新檢測。（2）ELISA檢測嚴格按照試劑盒說明書進行操作。取標準品和待測標本各50μL，分別加入反應孔內，然后加入50μL生物素標記抗體，輕輕振蕩混勻，37℃孵育1h；棄去孔內液體，用洗滌液洗滌4次，每孔加入80μL親和鏈霉素－辣根過氧化物酶，輕輕振蕩混勻，37℃孵育30min；用洗滌液洗滌4次，每孔加入底物A、B各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光孵育15min；加入50μL終止液，450nm波長處測定各孔的光密度值（OD值），根據標準曲線計算待測標本EV71IgM抗體濃度，并以說明書給出的臨界值進行陰、陽性結果判斷。

1.4 統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件進行數據分析；計數資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗；P＜0.05為比較差異有統計學意義。

2 結 果

135例手足口病患兒中，ICA檢出EV71IgM抗體陽性29例，陽性率為21.48%；44例非手足口病患兒中，ICA未檢出EV71IgM抗體陽性患兒；兩組患兒EV71IgM抗體ICA檢測陽性率比較差異有統計學意義（χ2＝21.05，P＜0.05）。135例手足口病患兒中，ELISA檢出EV71IgM抗體陽性27例，陽性率為20.00%；44例非手足口病患兒中，ELISA未檢出EV71 IgM抗體陽性患兒；兩組患兒EV71IgM抗體ELISA檢測陽性率比較差異有統計學意義（χ2＝18.36，P＜0.05），見表1。

表1 兩組患兒EV71IgM抗體ICA及ELISA檢測陽性率比較［n（n）］

3 討 論

手足口病是由EV71等病毒引起的一種常見的傳染病。EV71屬小RNA病毒科腸道病毒屬。EV71主要通過接觸傳播及飛沫傳播，具有較強的傳染性，可在短期內造成較大范圍的流行。EV71一年四季均可引起手足口病，其中以夏、秋季多見。癥狀較輕的感染患者臨床表現為發熱和手足口部皰疹，重者可累及神經、呼吸、循環等系統，甚至引起死亡。目前對于手足口病尚無有效的治療措施，故早期診斷對于手足口病的預防和控制具有重要意義。

傳統的病原學檢查是診斷手足口病的金標準，但該法對實驗設備、技術要求較高，且檢測周期長、靈敏度相對較低，主要用于實驗室研究，并不適合臨床推廣應用。目前，逆轉錄聚合酶鏈反應（RT－PCR）技術已成為診斷EV71感染的一種常用方法，但該檢測方法造成的假陽性率和假陰性率均較高。熒光定量PCR（FQ－PCR）檢測EV71不僅能大大降低假陽性率和假陰性率，而且與常規RT－PCR技術相比，在敏感性和特異性等方面都更具有優勢［7－11］。但由于FQ－PCR檢測需要的儀器昂貴，且對實驗室條件要求較高，不適宜在基層醫療機構開展。本研究比較了ICA和ELISA檢測EV71IgM抗體的陽性率，結果表明，135例手足口病患兒，ICA、ELISA檢測EV71IgM抗體陽性率分別為21.48%和20.74%，而44例非手足口病患兒，ICA、ELISA均未檢出EV71IgM抗體陽性患兒，且兩種方法在手足口病患兒中的EV71IgM抗體檢測陽性率明顯高于非手足口病患兒（P＜0.05）。另一方面，ICA、ELISA檢測手足口病患兒EV71IgM抗體陽性率雖然較低，但對于非手足口病患兒，兩種方法均未出現EV71IgM抗體陽性患兒，說明兩種方法檢測假陽性率較低，具有相對較高的特異度。

綜上所述，ICA或ELISA檢測EV71IgM抗體為陽性者，均可確診為手足口病，但對于檢測結果為陰性者，不能排除手足口病的可能性，應結合臨床表現進行診斷。

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