漢族及15種少數民族7歲以下兒童異常血紅蛋白病調查研究

徐詠梅，張 毅，余江梅，鄒團標，姚莉琴△（.德宏州婦幼保健院，云南德宏 678400；.云南省婦幼保健院，云南昆明 65005）

血紅蛋白病是由于珠蛋白基因突變或缺如而引起的單基因遺傳病，包括珠蛋白生成障礙性貧血（又稱地中海貧血，簡稱地貧）和異常血紅蛋白病兩大類［1］。云南省為血紅蛋白病高發區，在少數民族地區尤為多見［2］。為進一步了解不同民族兒童血紅蛋白病發病特征，筆者于2009年6月至2011年9月對保山市漢族和分布于其他22個市（縣）的15種云南省獨有少數民族7歲以下兒童進行了調查，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以保山市漢族和分布于其他22個市（縣）的15種云南省獨有少數民族7歲以下兒童為調查對象，包括常住人口和居住半年以上的非常住人口。當父親或母親無法確認民族時，以任意一方的民族確定調查對象的民族。

1.2 方法

1.2.1 抽樣方法 采用分層整群抽樣和典型調查相結合的抽樣方法。白族、哈尼族、傣族3個民族總人口均超過100萬［3］，按無限總體抽樣：n＝Ua2×π（1－π）／δ2，每個市（縣）隨機抽取1～2個鄉，再根據民族聚集情況隨機抽取數個自然村，每個民族樣本量均超過900例；佤族、拉祜族、納西族、傈僳族、景頗族5個民族總人口均為10～100萬［3］，按有限總體抽樣：Nc＝n／（1＋n／N），在每個市（縣）中隨機抽取上述少數民族人口數量在當地居民中超過70%的鄉1～2個，每個民族樣本量不少于500例（若n／N大于0.05，按上式對n進行校正，求證Nc）；布朗族、基諾族、德昂族、阿昌族、普米族、怒族、獨龍族7個民族總人口均不足10萬［3］，樣本量根據各民族聚集地實際情況而定，每個民族樣本量在350例左右（布朗族、基諾族、獨龍族均只有1個聚集鄉，居住于該地的7歲以下兒童全部納入本次調查）。分別隨機抽取保山市邊境縣和非邊境縣各1個，從當地居民中隨機抽取7歲以下漢族兒童，樣本量不低于900例。各民族7歲以下兒童抽樣范圍及樣本量見表1。

1.2.2 實驗室檢測 （1）血細胞分析：采集調查對象乙二胺四乙酸二鉀（EDTA－K2）抗凝靜脈血2～4mL，于采血當日采用KX－21N（日本SYSMEX）、XT－1800i（日本SYSMEX）、BC－2800（深圳邁瑞）、BC－2000（深圳邁瑞）等血細胞分析儀和配套試劑進行血紅蛋白（Hb）、紅細胞（RBC）、紅細胞平均容積（MCV）、紅細胞平均血紅蛋白含量（MCH）、紅細胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細胞分布寬度變異系數（RDW－CV）等指標檢測。（2）Hb電泳分析：血液學表型陽性的疑似地貧者（MCV＜80 fL和／或MCH＜27pg），采用pH8.6緩沖醋酸纖維薄膜及配套電泳掃描儀進行Hb電泳分析（美國Helena）。根據電泳速度及成像結果顯示的條帶和位置對異常Hb分組，電泳速度快于HbA者判為快速異常Hb（包括HbH及HbJ），慢于HbA者判為慢速異常 Hb（包括 HbG、HbS及 HbE）［3］。

表1 各民族7歲以下兒童抽樣范圍及樣本量

1.2.3 質量控制 （1）調查的質量控制：統一課題設計、多中心協作；由省級調查隊成員對各地區工作人員進行培訓，省級調查隊成員全程參與調查和質量控制；除血細胞分析儀配套試劑外的所有試劑均由省級調查隊統一購買后分發至各地調查組；所有資料均由云南省婦幼保健院錄入及分析。（2）血細胞分析質量控制：各地確定所用分析儀后，提前比對校準，校準合格后用于檢測（以廠家校準合格的分析儀作為標準，取新鮮血標本對各地分析儀進行比對校準）。使用儀器配套試劑及質控品，每日標本檢測前、后進行質控檢測，結果在控時認為標本檢測結果有效；不在控時，及時進行校準后再行檢測。嚴格按照試劑及儀器說明書操作。確保所有標本均為合格標本。（3）Hb電泳質量控制：各地采集標本后及時送至云南省婦幼保健院，由專人進行Hb電泳檢測。嚴格按試劑及儀器說明書操作。每次標本檢測前均進行配套質控品檢測，質控品檢測結果在控時進行標本檢測。

1.3 統計學處理 采用Epidata和SPSS15.0軟件建立數據庫和分析數據。采用人工及統計軟件兩種方式進行數據審核、邏輯檢查和核對，采用箱式圖進行離群值或異常值分析和處理。計數資料以百分率表示，采用趨勢χ2和四格表χ2檢驗進行分析；多因素分析采用雙變量Logistic回歸分析及多重線性逐步回歸分析。P＜0.05為比較差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 一般情況 共納入調查兒童14 088例，因2例兒童資料不完整，未納入后續統計分析。最終確定納入統計分析的兒童14 086例，男7 208例，女6 878例。其中血液學表型陽性8 559例，基因分析確診561例（西雙版納州傣族β－地貧209例、α－地貧202例；新平縣花腰傣族β－地貧102例、α－地貧48例）。5例先征者家系分析顯示，父母為近親結婚162例，有遺傳家族史128例，雙胞胎57對。

表2 70例Hb電泳結果異常兒童分布

2.2 Hb電泳檢測結果 8 559例血液學表型陽性兒童中，共檢出異常血紅白蛋白病患兒70例，檢出率由高到低依次為德宏州（2.0%）、怒江州（1.8%）、玉溪市（1.0%）、西雙版納州（0.7%）、麗江市（0.6%）、臨滄市（0.4%）和普洱市（0.3%），上述地區檢出患兒例數在所有患兒中的所占比依次為45.0%、21.3%、6.3%、18.8%、2.5%、3.8%和2.5%。80例患兒中，包括HbH 2例、HbJ 4例、HbCS 19例、HbD 1例，HbG 44例。80例Hb電泳結果異常兒童分布見表2。以HbA2＞10%為HbE，共有580例為HbE陽性，占6.8%。16個民族兒童均檢出HbE陽性者。HbE陽性檢出率超過10%的民族依次為景頗族（29.6%）、阿昌族和德昂族（27.1%）、基諾族（24.7%）、傣族（德宏州17.2%、西雙版納州5.3%、新平縣1.4%）、傈僳族（16.0%），檢出率最低為佤族（0.4%），其他民族檢出率為1%～10%。

3 討 論

本研究中，10個州（市）的兒童中有7個州（市）的兒童檢出異常Hb，共計70例，檢出率由高到低依次為德宏州（2.0%）、怒江州 （1.8%）、新平縣 （1.0%）、西雙版納州（0.7%）、滄源縣（0.4%）、麗江市（0.6%）、普洱市（0.3%），地區檢出患兒例數在所有患兒中的所占比依次為45.0%、21.3%、6.3%、18.8%、2.5%、3.8%和2.5%。80例患兒中，共檢出HbH 2例、HbJ 2例、HbCS 19例、HbD 1例、HbG 44例。各州（市）患兒均以HbG陽性較為多見。

Hb異?？蓻]有任何臨床癥狀，故疾病診斷依賴于實驗室檢查。Hb電泳是分離和鑒定Hb最有效方法，也是診斷Hb異常的主要手段［4－5］。Hb電泳根據支持物的不同分為濾紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳、毛細管電泳、高效液相色譜法等，其中醋酸纖維素薄膜電泳為常規方法［6］，也曾被推薦用于異常Hb的初篩檢測［7］。HbF與HbA等電點接近，在醋酸纖維素膜電泳中難以分離，因此醋酸纖維素膜電泳對HbF的分辨率相對較低［8］。在進行Hb分析時，需同時采用堿變性試驗檢測HbF水平，從而為β地貧血的診斷提供依據。此外，在堿性條件下，HbE與HbA2也因有相同的遷移率而難以分開［9－10］。毛細管電泳則具有敏感性高、分辨率高、高效快速、所需樣品少等優點［11］。筆者曾對醋酸纖維膜電泳和毛細管電泳檢測結果進行了比較，發現二者對HbH、HbJ、HbCS、HbD、HbG的檢測結果一致，但醋酸纖維膜電泳無法區分HbE。醋酸纖維膜電泳顯示HbA2＞10%時，可判為HbE陽性［12］。本次調查共檢出580例 HbE陽性患兒，占6.8%。16個民族的兒童均檢出HbE陽性患兒，基諾族未發現HbG，但HbE陽性率達24.7%，高于同地區的傣族和布朗族。HbE陽性率超過10%的民族包括景頗族（29.6%）、阿昌族和德昂族（27.1%）、基諾族（24.7%）、傣族（德宏州17.2%、西雙版納州5.3%、新平縣1.4%）和傈僳族（16.0%），陽性率最低的為佤族（0.4%）。

HbE是國內最常見的異常Hb類型，包括純合子HbE（E＋E）、雜合子（E＋A）和 HbE－β地貧（E＋F），也可與α地貧、β地貧以及其他異常Hb合并存在。有研究顯示，東南亞地區為HbE高發區［12］，而在云南地區 HbE檢出率可高達4.19%，其中傣族人群為11.67%［13］。本研究顯示，云南地區10個州（市）的22個縣均可檢出HbE陽性兒童，以傣族、阿昌族、德昂族、布朗族、怒族為主（16%～29%），佤族最低（0.4%）。有研究顯示 HbG、HbD多見于長江以北地區［14］。本研究檢出HbG陽性兒童44例，提示云南地區異常Hb具有明顯的遺傳多態性。同一地區不同民族兒童可見出不同的異常Hb，例如：西雙版納州、德宏州、怒江州不同民族兒童間具有不同的異常Hb檢出率；不同地區同一民族兒童間也有一定的差異，例如：西雙版納州、德宏州和玉溪市的傣族兒童具有不同的異常Hb檢出率，也提示云南地區異常Hb有明顯的遺傳多態性。80年代的調查結果顯示，云南傣族和傈僳族人群中，具有臨床癥狀的 HbE－β地貧發病率為0.61%及0.87%［15］，均低于本次調查的結果，說明其發病率有可能呈上升趨勢。

云南省地處祖國邊陲，邊境地區居民與多個東南亞國家的居民往來較為密切，各民族之間的通婚也較為普遍，有可能是導致云南省部分異常Hb檢出率較高的原因之一，需引起足夠的重視。雖然異常Hb不會導致較為嚴重的臨床癥狀和危害，但對人體發育過程中正常Hb的合成仍會造成一定的影響。因此，需加強對高危人群的篩查工作，提高人口出生素質。

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