馬齒莧提取物對濕疹大鼠皮膚炎癥腫脹度影響的研究

葛一漫 胡一梅 吳心語 謝國麗 張靈玲

成都中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院/附屬醫(yī)院，四川 成都 610075

濕疹是一種由各種內(nèi)外因素引起的過敏性炎癥性皮膚病，臨床上皮膚損害以丘疹水皰、滲出、糜爛為主，呈多形性改變，易反復(fù)發(fā)病。其組織學(xué)特征為表皮細(xì)胞間水腫，伴有不同程度的棘層肥厚及淺表血管周圍淋巴組織細(xì)胞浸潤[1]?；颊叨嘧杂X皮膚瘙癢，睡眠紊亂，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。濕疹這類變態(tài)反應(yīng)性疾病目前治療的主要藥物為糖皮質(zhì)激素及抗組胺藥，需長期用藥，不良反應(yīng)較大。近年來，大量研究表明中醫(yī)外治法對濕疹具有相當(dāng)重要的作用，其療效確切，不良反應(yīng)少，受到皮膚科醫(yī)生的重視。

馬齒莧含有大量維生素、多糖、脂肪酸、去甲腎上腺素、多巴胺、生物堿等多種活性成分[2-4]，具有降血脂、降血糖、抗衰老、消炎抑菌、增強(qiáng)免疫等多種保健功能和疾病治療作用[5]，主要用于治療濕疹、瘙癢癥等風(fēng)熱、濕熱之皮膚病等病癥，具有較好的臨床療效。被國家衛(wèi)生部認(rèn)定為藥食同源的保健功能食品之一，具有廣闊的開發(fā)前景。本實驗主要探討馬齒莧提取物對濕疹大鼠皮膚炎癥的影響，并觀察皮膚的腫脹度改變。

1 材料與方法

1.1 實驗動物SD大鼠，SPF級，♂，體重180～220g，由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，實驗動物合格證號:SCXK(111)2008-24。

1.2 受試藥物

1.2.1 馬齒莧提取液 將500g新鮮馬齒莧放于榨汁機(jī)內(nèi)榨取300～350ml新鮮馬齒莧粗汁，用無菌紗布5層過濾，獲得淺紅色馬齒莧提取液，再根據(jù)實驗要求配置提取不同濃度溶液，盛放在消毒處理的玻璃瓶內(nèi)，置于低溫0～5℃保存。

1.2.2 陽性藥 復(fù)方黃柏液，山東漢方制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號:Z10950097。

1.3 試劑 2，4-二硝基氯苯 (DNCB)，成都科龍化工試劑廠生產(chǎn)，批號:20090813。

1.4 儀器電子天平，BS-600L，上海友聲衡器有限公司生產(chǎn);6mm金屬打孔器，廣州正宏醫(yī)療器械設(shè)備有限公司生產(chǎn)。

1.5 統(tǒng)計方法 用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。檢測數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±s)表示。多組之間的比較采用方差分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

1.6 方法

1.6.1 實驗分組及造模 SD大鼠50只，按體重隨機(jī)分為5個組，每組10只，分別為模型對照組，陽性對照組，馬齒莧提取物高、中、低劑量組。用電推剪及電剃須刀去除大鼠腹部毛發(fā)，面積約2 cm×3 cm，并涂5%的2，4-二硝基氯苯 (DNCB)30μl于皮膚首次致敏;第5d，在右背部2cm×2cm剃毛區(qū)涂0.2%DNCB50μl進(jìn)行二次抗原攻擊，左背部對稱的剃毛區(qū)不用藥物作為對照部位。以后每隔3d激發(fā)1次，連續(xù)3次。于第9d觀察大鼠右背部較左背部明顯出現(xiàn)紅斑，水腫，丘疹，糜爛或滲出，表明造模成功。

1.6.2 實驗給藥 于實驗第10d開始，模型對照組大鼠致敏皮膚涂布無菌蒸餾水;馬齒莧提取物低、中、高劑量組分別按照0.008mg/kg、0.016mg/kg、0.032mg/kg給藥。同時，陽性對照組給予復(fù)方黃柏液2ml。按組別、劑量給藥，每隔1小時給藥1次，6次/d，連續(xù)10d。

1.6.3 實驗取材 造模后第21d，斷頸處死動物，使用無菌手術(shù)剪將大鼠后背部右側(cè)皮炎區(qū)皮膚及對稱的左側(cè)健康皮膚分別剪下，用直徑6 mm圓形打孔器分別打下相同面積的皮膚，用分析天平稱重。

1.6.4 觀察指標(biāo) 觀察并按下式計算皮膚腫脹度及抑制率:

皮膚腫脹度=炎癥皮膚重量-健康皮膚重量，

抑制率%=(模型對照組腫脹度-藥物組腫脹度)/模型對照組腫脹度×100%。

2 結(jié)果

與模型對照組相比，馬齒莧高、中劑量組小鼠皮膚腫脹度明顯減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)，與陽性對照組比較，馬齒莧高劑量組小鼠皮膚腫脹度明顯減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。結(jié)果見表1。

表1 馬齒莧提取液對2，4-二硝基氯苯致小鼠皮膚腫脹度的影響 (±s)

表1 馬齒莧提取液對2，4-二硝基氯苯致小鼠皮膚腫脹度的影響 (±s)

注:各組與模型對照組比較，*P＜0.05;＊＊P＜0.01。與陽性對照組比較，△P ＜0.05

組別 動物數(shù) (N) 腫脹度 (mg) 平均抑制率 (%)12.79 -陽性對照組 10 21.1 士1.58* 36.64馬齒莧高劑量組 10 15.60士5.47＊＊△ 53.15馬齒莧中劑量組 10 19.80 土 6.74* 40.54馬齒莧低劑量組 10 28.50士模型對照組 10 33.30 士700 14.41

3 討論

濕疹的發(fā)病與IV型超敏反應(yīng)有關(guān)。IV型超敏反應(yīng)又稱遲發(fā)型超敏反應(yīng) (DTH)，是效應(yīng)T細(xì)胞與特異性抗原結(jié)合后，引起的炎癥反應(yīng)。腫脹的形成是通過肥大細(xì)胞釋放組胺，導(dǎo)致細(xì)胞間形成裂隙，使皮膚、粘膜毛細(xì)血管擴(kuò)張及毛細(xì)血管壁通透性增高，從而在患處產(chǎn)生紅斑、水腫和風(fēng)團(tuán)等腫脹現(xiàn)象[6]。同時，患者感到劇烈瘙癢，局部進(jìn)行搔抓后，還會導(dǎo)致局部毛細(xì)血管破裂以及細(xì)菌感染，加重皮損局部腫脹。

本實驗中，與模型對照組相比，馬齒莧高、中劑量組小鼠皮膚腫脹度明顯減輕 (P＜0.05)。與陽性對照組比較，高劑量組大鼠皮膚腫脹度亦明顯減輕 (P＜0.05)。結(jié)果提示，經(jīng)馬齒莧提取液治療后，大鼠的腫脹度顯著改善，大鼠的丘疹、水腫、風(fēng)團(tuán)等皮膚損壞也明顯減輕，其療效優(yōu)于復(fù)方黃柏液。因此，認(rèn)為馬齒莧提取液對實驗性濕疹模型有明顯的改善作用，值得迸一步深入研究。

據(jù)研究文獻(xiàn)表明，馬齒莧水提取物對二甲苯及巴豆油所致小鼠耳廓腫脹有顯著的緩解作用，主要是由于其全草對金黃色葡萄球菌、鏈球菌、白色念珠菌及真菌具有明顯的抑制作用。陸霄鶴等[7]發(fā)現(xiàn)，20g/kg馬齒莧水提取物可抑制巴豆油所致小鼠耳廓腫脹，提示馬齒莧水提取物可有效抑制二甲苯及巴豆油所致小鼠耳廓腫脹。Teixeira等[8]的研究結(jié)果表明，馬齒莧中的黃酮對于角叉菜膠誘發(fā)的大鼠足爪水腫有明顯抑制作用。綜上所述，進(jìn)一步說明馬齒莧可以改善機(jī)體的炎癥反應(yīng)，具抗炎作用，進(jìn)而對濕疹具有一定的治療作用。

[1]謝富軍，何棟，蔡飛，等.濕疹的研究現(xiàn)狀[J].按摩與康復(fù)醫(yī)學(xué)，2011，2(11)

[2]譚麗霞，周求良，尹建國，等.馬齒莧的營養(yǎng)成分分析及其開發(fā)利用[J].中國野生植物資源，2000，19(2):49-50.

[3]孫健.馬齒莧的化學(xué)成分研究[D].長春:吉林大學(xué)，2003.

[4]牛廣財，朱丹.馬齒莧化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33(6):1090—1092.

[5]翟瑋瑋，顧立眾.馬齒莧功能因子及保健食品的開發(fā)[J].食品科技，2003，2:20.

[6]徐拯，周江睿，孫學(xué)軍.氫生理鹽水對小鼠足腫脹的抗炎效應(yīng).現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，10(23):4421-4423.

[7]陸霄鶴，李曦.馬齒莧及魚腥草水提取液體外抑菌實驗[J].抗感染藥學(xué)，2010，7(1):33-34.

[8]Teixeira MC，Carvalho IS，Brodelius M.Omega-3 fatty acid desaturase genes isolated from purslane(Portulaca oleracea L.):expression in different tissues and response to cold and wound stress.J Agric Food Chem，2010，58(3):1870-1877.