渝東北山區野葛中葛粉與總黃酮含量動態變化研究

譚小燕 李達斌 林中翔 黃 靜 賈 晗 王立青

1.重慶三峽醫藥高等專科學校，重慶 404020；2.重慶市巫溪縣人民醫院，重慶 405800；3.四川大學華西藥學院，四川成都 610041

野葛 Pueraria lobata （Willd.）Ohwi為豆科葛屬植物，莖葉可作飼料，根和花可入藥。野葛的干燥塊根為常見中藥，具有解肌退熱、生津止渴、透疹、升陽止瀉、通經活絡、解酒毒的功能[1]。野葛根中富含的黃酮類成分具有多種藥理作用[2-5]，而葛粉又是很好的保健食品，暢銷國內外[6-9]。野葛從根、藤到花、葉在工業、農業、醫藥方面都有很高的研究利用價值。渝東北山區野葛資源豐富[10-11]，但從未被開發利用，因此本研究以渝東北山區的開縣城口巫溪交界地帶產野葛為樣本，采用組織搗碎水沉淀法和UV法測定一年中每月采收野葛根中葛粉和總黃酮含量，對含量動態變化進行分析，以期確定最佳采收時期，為該區野葛根的開發利用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

METTLER TOLEDO PL1501-S電子秤 （梅特勒-托利多中國地區）、電熱恒溫鼓風干燥箱DHG-9140A型（上海一恒科技有限公司）、高速中藥粉碎機HX-500A型（浙江省永康市溪岸五金藥具廠）、低速自動離心機 LD25-2、U-2800 分光光度計（UV2300）、特殊減壓抽濾裝置（四川大學華西藥學院天然藥物系自主設計）、水、95%乙醇（分析純）、葛根素對照品（批號：110753-200912，中國藥品生物制品檢定所）。

試驗樣本采自重慶開縣譚家鄉。從2011年6月～2012年 5月，每月 9日（或前后 2日）選取生長年限一致，粗細相近的野葛根采挖，然后洗凈泥沙，切成2～3 mm薄片，自然干燥。

1.2 方法

文獻報道一般利用組織搗碎水沉淀法[12]或酶解-蒽酮比色法[13]測定葛根中葛粉含量，而且酶解-蒽酮比色法是最常用的淀粉含量測定方法。但因本實驗目的在于通過測定野葛中葛粉含量，從而確定野葛的最佳采集時間，再用于提取葛粉的工藝中，為與提取工藝相結合，故選取組織搗碎水沉淀法來測定葛粉含量。野葛中總黃酮的含量測定采用UV分光光度法[14-20]。

2 結果

2.1 野葛葛粉含量測定

將12份試驗樣本各稱取1 kg，粉碎后過40目篩，將藥材用 1∶8倍量冷水（W/V）浸泡 1 h，然后物理攪拌，讓葛粉充分混入水液中，用紗布過濾，將濾渣加入7倍量水，攪拌均勻后再過濾，濾渣再重復清洗1遍，合并3次的濾液膠漿，再用細紗布過濾1遍，去除微粒雜質。將葛粉漿液離心或放置沉降，待沉降完全（溶液變澄清）倒掉上清液，再加5倍量清水攪勻葛粉，再沉降，重復3次后得葛粉，將其恒溫40℃減壓干燥葛粉。葛粉干燥后，用電子天平稱重。

根據試驗結果表明，1年12個月野葛葛粉含量從 11月～第 2年 2月最高，3、8～10月其次，4～7月最低，具體測定結果見表1。

表1 每月野葛葛粉含量表

2.2 野葛總黃酮含量測定

2.2.1 標準曲線制備 準確稱取葛根素對照品0.0155 g，用70%乙醇溶解，于100 mL容量瓶中定容，得0.155 mg/mL濃度的葛根素對照品溶液。分別精密吸取該對照品溶液 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，加70%乙醇定容，得系列對照品溶液。用1.0 mL 70%乙醇溶液作空白對照，在250 nm波長處測定吸收度。所得結果見表2和圖1。

表2 標準曲線制備

圖1 對照品溶液標準曲線

根據標準曲線求回歸方程為A=74.288C+0.0091，r=0.9999。

2.2.2 供試樣品總黃酮含量測定 將每個月野葛樣本粉碎成粉末，分別精密稱取2 g置250 mL圓底燒瓶中，各加 70%乙醇 100 mL，稱量，恒溫 80℃回流 1.5 h，放冷，再稱量，并加70%乙醇補足減少重量，搖勻，濾過，用移液管精確量取濾液1 mL于25 mL容量瓶，加70%乙醇稀釋定容得待測液，用1.0 mL 70%乙醇溶液作空白對照，在250 nm波長處連續3次測定吸收度，結果取3次之平均值，通過標準回歸方程即可計算出待測液濃度，再乘以稀釋倍數，然后換算成總黃酮質量，最后用質量除以稱取的粉末重量可得該月野葛樣本的總黃酮含量。具體含量見表3，根據數據顯示11月～第 2年 3月總黃酮含量高于 9%，8～10月稍高，約6%，4～7月含量較低，在 2%左右。

2.3 全年野葛葛粉和總黃酮含量變化趨勢

根據“2.1”、“2.2”項下測定的一年中每月在渝東北山區采集野葛中葛粉和總黃酮含量結果 （即表1、表3中數據）制定葛粉和總黃酮含量隨時間變化的趨勢曲線圖，見圖2。

由圖2可見渝東北山區野葛的葛粉和總黃酮含量隨季節變化趨勢基本一致，從10月起開始呈含量上升趨勢，11月份達第一峰值，12月份略有下降，次年1月份達第二峰值，之后含量開始呈下降趨勢，到次年4月份含量降到最低，4～10月一直處于含量低水平時期。總體顯示在11月～次年3月期間葛粉和總黃酮含量都相對較高。

表3 野葛各月份總黃酮含量表

圖2 渝東北山區野葛葛時間粉與總黃酮含量隨時間變化曲線

3 討論

葛粉和總黃酮含量測定方法皆參考文獻報道并結合實際提取葛粉和總黃酮的工藝而確定，故未再做方法的穩定性、重復性等考察。

根據圖2的渝東北山區野葛葛粉和總黃酮含量隨季節變化趨勢曲線顯示在11月～次年3月期間葛粉和總黃酮含量都相對較高。因此認為最佳采集時間為11月～次年3月，采集時間段較長，將有利于野葛的加工生產。

根據研究測定結果發現渝東北山區一帶所產野葛葛粉含量變化在8.9%～25.3%，總黃酮含量在2%～12%，總的來看，葛粉含量比粉葛類低，若利用其提取葛粉產率不及粉葛[21]，但總黃酮含量較高，異黃酮類成分豐富，藥用價值更高。如果能對該區野葛的葛粉和總黃酮進行連續提取綜合利用，定能提高其利用價值和經濟效益。此部分研究不但確定了該區野葛采收時間段，更為后續關于綜合連續提取野葛葛粉和總黃酮的工藝研究奠定了理論基礎。

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