HPLC測(cè)定清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

宋玉國(guó)，張新茹，李秀芬，彭振宇

(1.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2.吉林大學(xué) 第二醫(yī)院,吉林 長(zhǎng)春 130041)

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宋玉國(guó)，主管藥師，研究方向：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；E-mail:songyuguo.813@163.com

HPLC測(cè)定清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

宋玉國(guó)1*，張新茹2，李秀芬1，彭振宇1

(1.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2.吉林大學(xué) 第二醫(yī)院,吉林 長(zhǎng)春 130041)

目的建立測(cè)定清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法，Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)分析柱，流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸(5∶95)；流速為0.8 mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。結(jié)果鹽酸麻黃堿線性范圍0.051 8～0.518 μg，r=0.999 8，平均回收率為94.5%；RSD=0.64%(n=6)；鹽酸偽麻黃堿線性范圍0.019 58～0.19 58 μg,r=0.999 4,平均回收率為90.6%；RSD=0.95%(n=6)。結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、分離度與穩(wěn)定性好、專屬性強(qiáng)，可作為控制該藥品的質(zhì)量方法。

清咳平喘顆粒；高效液相色譜法；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿；含量測(cè)定；質(zhì)量控制

清咳平喘顆粒為長(zhǎng)春遠(yuǎn)大國(guó)奧制藥有限公司(原長(zhǎng)春海王生物制藥有限公司)與山西神泉保健品有限公司太原分公司合作開發(fā)的中藥三類新藥，藥品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為YBZ02472004-2009。其方是由石膏、金蕎麥、魚腥草、蜜麻黃、炒苦杏仁、川貝母、矮地茶、枇杷葉、炒紫蘇子、炙甘草等10味中藥組成；具有清熱宣肺，止咳平喘功能。用于急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作屬痰熱郁肺證，癥見：咳嗽氣急，甚或喘息，咯痰色黃或不爽，發(fā)熱，咽痛，便干，苔黃或黃膩等。方中蜜麻黃潤(rùn)肺止咳，多用于表證已解，氣喘咳嗽，其主要成分為鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿。原標(biāo)準(zhǔn)只對(duì)鹽酸麻黃堿進(jìn)行含量測(cè)定，為嚴(yán)格控制其含量，以控制該制劑內(nèi)在質(zhì)量,保證其安全、可靠。采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì)方中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量進(jìn)行測(cè)定，并以二者為指標(biāo)來(lái)控制本品的質(zhì)量。

1 儀器、試藥與試劑

AgiLent1200高效液相色譜儀；天平：Sartorius BS 124S；Sartorius BT-125D；KQ-500E超聲儀(500 W,40 Hz)；Cary50紫外光分光光度計(jì)；MILLIPORE超純水器。

鹽酸麻黃堿對(duì)照品(批號(hào)：171241-200506，含量測(cè)定用)、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品(批號(hào)：171237-200807，純度99.9%，含量測(cè)定用)，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。清咳平喘顆粒(長(zhǎng)春遠(yuǎn)大國(guó)奧制藥有限公司，批號(hào)：110501，110503，110601，111201，111202，111203)。缺蜜麻黃的陰性樣品(自制)。乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為ApoLLo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈-0.2%磷酸(5∶95)為流動(dòng)相；流速0.8 mL·min-1,；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。柱溫為35 ℃。進(jìn)樣量為10 μL；分離度大于1.5；理論塔板數(shù)定為以鹽酸麻黃堿計(jì)不得低于5 000。色譜圖見圖1～3。

圖1 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品HPLC圖

圖2 清咳平喘顆粒供試品HPLC圖

圖3 缺蜜麻黃的陰性對(duì)照品HPLC圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，加鹽酸-甲醇(1∶100)制成每1 mL含鹽酸麻黃堿50 μg和鹽酸偽麻黃堿20 μg的溶液,搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約5.0 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入1 moL·L-1的鹽酸溶液50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)40 min，放冷，用上述鹽酸溶液補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液10 mL，置分液漏斗中，加入6 moL·L-1氫氧化鈉溶液2 mL，加入氯化鈉2 g，用乙醚提取5次(20，10，10，10，10 mL)，合并提取液，加入酸性乙醇(鹽酸1→20)1 mL，低溫蒸干，殘?jiān)欲}酸-甲醇(1∶100)使溶解，移至10 mL量瓶中，加鹽酸-甲醇(1∶100)至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性對(duì)照品溶液的制備

取不含蜜麻黃的陰性對(duì)照樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，加鹽酸-甲醇(1∶100)制成每1 mL含0.051 8，0.019 6 mg的溶液，分別精密吸取1，3，5，7，9 μL測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的回歸方程分別為：Y= 266 2.7X+6.037 2(r=0.999 8)；Y= 266 4.9X+2.298(r=0.999 4)。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿進(jìn)樣量分別在0.051 8～0.518 μg和0.019 58～0.195 8 μg呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)：110503)5 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測(cè)定其色譜峰面積，計(jì)算鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.26%，0.40%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱定同一批樣品(批號(hào)：110503)適量，按2.3制備供試品溶液后，按含量測(cè)定方法，分別在0，8，16，24，36，48 h測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.98%，結(jié)果表明供試品溶液在48 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品(批號(hào)：110503)樣品5.0 g，共6份，分別置具塞錐形瓶中；按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定，二者總含量平均值為0.869 9 mg·g-1，RSD=0.98%(n=6)，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

2.9.1 加樣回收用的對(duì)照品貯備液制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品15.09 mg和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品6.26 mg，置500 mL量瓶，加1 moL·L-1的鹽酸適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。

2.9.2 回收率測(cè)定 精密稱取同一樣品(批號(hào)：110503)樣品2.5g(含鹽酸麻黃堿0.596 2 mg·g-1；鹽酸偽麻黃堿0.276 9 mg·g-1)，共6份，分別置具塞錐形瓶中；精密加入上述加樣回收用的對(duì)照品貯備液50 mL，按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定，結(jié)果見表1、2。

表1 清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿回收率試驗(yàn)

注：鹽酸麻黃堿對(duì)照品加入量均為1.509 mg

表2 清咳平喘顆粒中鹽酸偽麻黃堿回收率試驗(yàn)

注：鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品加入量均為0.626 mg

2.10 樣品測(cè)定結(jié)果

取6批樣品，按擬定含量測(cè)定方法操作，測(cè)定，結(jié)果見表3。

表3 清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量測(cè)定 /mg·g-1

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

實(shí)驗(yàn)中比較了Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Capcell PAK-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Dimasil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)4種色譜柱，按擬定含量測(cè)定方法操作，在使用不同色譜柱的情況下，結(jié)果均能較好地將鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿堿兩種成分分離，且主峰前后無(wú)雜峰，結(jié)果選用ApoLLo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱。參照《中國(guó)藥典》2010年版麻黃項(xiàng)下【含量測(cè)定】的規(guī)定[1]，理論塔板數(shù)定為以鹽酸麻黃堿計(jì)不得低于5 000。

3.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品5.36 mg和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品5.42 mg，分別置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，在紫外區(qū)190～400 nm掃描，結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在205 nm處有最大吸收，與《中國(guó)藥典》2010版一部麻黃項(xiàng)下所采用的檢測(cè)波長(zhǎng)(210 nm)基本一致。故選定210 nm作為本品的測(cè)定波長(zhǎng)。

3.3 流動(dòng)相的選擇

考察了5種流動(dòng)相系統(tǒng)：①乙腈-含0.2%三乙胺的0.02 moL·L-1磷酸二氫鉀溶液(3∶97)，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.7[1]，②甲醇-磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH為2.5)(6∶94)[2]，③乙腈-0.2%磷酸(5∶95)[3]，④乙腈-含0.3%三乙胺的0.02 moL·L-1磷酸二氫鉀溶液(5∶95)，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0[4]，⑤ 乙腈-0.1%磷酸(3∶97)[5]；結(jié)果①④鹽酸偽麻黃堿和鹽酸麻黃堿分離度不好；②⑤色譜條件下保留時(shí)間長(zhǎng)，故未采用；③色譜條件出峰時(shí)間快，分離度好；故選擇其作為流動(dòng)相。

3.4 提取方法的考察[1-2]

分別考察了提取方法溶劑種類(加氨水2 mL,再加入三氯甲烷40 mL超聲；加水50 mL,再加入濃氨試液1 mL，超聲后用乙醚提?。患? moL·L-1的鹽酸溶液50 mL，超聲后加入6 moL·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)pH值，乙醚提取)及提取時(shí)間(30，40，50 min)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果表明，采用加入1 moL·L-1的鹽酸溶液50 mL，超聲處理40 min，加入6 moL·L-1氫氧化鈉溶液2 mL調(diào)pH值，用乙醚提取，提取率相對(duì)較高。故作為含量提取方法。

實(shí)驗(yàn)建立的清咳平喘顆粒中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、分離度與穩(wěn)定性好、專屬性強(qiáng)，可用于該藥品的質(zhì)量控制。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：300,1055-1056.

[2] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分[S].內(nèi)科肺系一分冊(cè).2002：504-506.

[3] 太成梅,那微,趙曉霞，等.HPLC法測(cè)定小兒肺熱咳喘口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2010,11(5)：380-383.

[4] 李娜，周愛軍，黃鶴歸，等.HPLC法測(cè)定大青龍湯顆粒劑中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中國(guó)藥師,2012,15(12)：230-232.

[5] 付莉，張淼.HPLC法測(cè)定麻黃浸膏中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中國(guó)藥事,2012,26(6)：611-616.

DeterminationofEphedrineHydrochLorideandPseudophedrineHydrochLorideinQingkePingchuanGrainsbyHPLC

SONGYuguo1*,ZHANGXinru2,LIXiufen1,PENGZhenyu1

(1.JilinInstituteforFoodandDrugControl,Changchun130033,China;2.TheSecondHospitalofJilinUniversity,Changchun130041,China)

Objective：To establish quality control methed of Ephedrine hydrochloride and Pseudophedrine hydrochloride in Qingke Pingchuan Grains.MethedsThe column was Apollo C18(Φ250 mm ×4.6 mm,5μm)and a mixture of acetonitrile and 0.2% phosphoric acid as the mobile phase was adopted.The flow rate was 0.8 mL·min-1and The UV detection wavelength was 210 nm.ResultsThe linear range of Ephedrine hydrochloride was 0.0518～0.518 μg(r=0.999 8),the average recovery was 94.5%,RSD=0.64%(n=6).The linear range of Pseudophedrine hydrochloride was 0.019 58～0.195 8 μg(r=0.999 4),the average recovery was 90.6%；RSD=0.95%(n=6);ConclusionThe method was simple,accurate,applicable and can be used for the quality control of Qingke Pingchuan Grains.

Qingke Pingchuan Grains;HPLC;Ephedrine hydrochloride;Pseudophedrine hydrochloride;Determination;Quality control

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.04.015

2013-06-13)