應(yīng)用離子色譜法測定甲硝唑片中亞硝酸鹽的含量

曹大春，余敏靈，周 筠

(1.四川省新津縣中醫(yī)醫(yī)院，四川 新津611430;2.四川省樂山食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，四川 樂山 614000;3.四川省樂山市第二人民醫(yī)院，四川 樂山 614000)

甲硝唑片為抗厭氧菌、抗滴蟲口服制劑，收載于《中國藥典》2010年版二部［1］。在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)甲硝唑片中含有微量亞硝酸鹽。由于亞硝酸鹽對人機(jī)體有一定的危害［2］，定量分析制劑中的亞硝酸鹽對控制甲硝唑片質(zhì)量有較為重要的意義。迄今還沒有采用離子色譜法測定甲硝唑中亞硝酸根的相關(guān)報(bào)道。參閱相關(guān)文獻(xiàn)［3，4］，我們采用離子色譜法對甲硝唑片中亞硝酸鹽進(jìn)行了定量分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 ICS-90A離子色譜儀(美國DIONEX);ASRS_4MM淋洗液發(fā)生器(美國DIONEX);ASRS300(4-mm)陰離子抑制器;(美國DIONEX);DS5電導(dǎo)檢測器(美國DIONEX);Chromeleon色譜工作站;IonpacAS11-HC型分離柱(4×250 mm)(美國DIONEX);IonpacAG11-HC型保護(hù)柱(4 mm×50 mm)(美國DIONEX);XS205電子天平(德國mettler toledo公司)。標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸根溶液(1 mg/mL)批號:12D409，廠家:國家有色金屬及電子材料分析測試中心);甲硝唑片［遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號:121261、121245、130125，規(guī)格 0.2 g/片］。

1.2 方法 ①標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸根儲(chǔ)備液和樣品溶液的制備:精密量取標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸根溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸根儲(chǔ)備液。取甲硝唑片［遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號:121261］10片，置100 ml量瓶中，加水適量，超聲處理15 min，加水至刻度，搖勻，精密量取10 ml置25 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用0.2 μm微孔濾膜濾過，作為樣品溶液。②色譜條件:IonpacAS11-HC型分離柱(4×250 mm)(載體為大孔乙基乙烯苯和2-乙烯苯的聚合物，直徑9.0 μm，孔徑2000埃，功能基團(tuán)為烷醇季胺，膠聯(lián)度55，柱容量高為290 μm/柱);柱溫:30℃;淋洗液:氫氧化鉀溶液(20 mmol/L);流速1.10 ml/min電導(dǎo)檢測法檢測(電導(dǎo)池有效容積:1 μl，信號范圍:0 ～ 500 μS，溫度:室溫);進(jìn)樣體積:100 μl。③系統(tǒng)實(shí)用性:精密量取標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸根儲(chǔ)備液2 ml置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為亞硝酸根對照溶液;取亞硝酸根對照溶液和樣品溶液按②項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，結(jié)果繪制圖譜。④線性關(guān)系:精密量取標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸根溶液0.1、1、2、3、4 及5 ml分別置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取溶液按②項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，以亞硝酸根峰面積(A)與亞硝酸根進(jìn)樣量(C)作回歸曲線。⑤精密度試驗(yàn):精密量取標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸根儲(chǔ)備液2 ml置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取溶液按②項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，以亞硝酸根色譜峰面積計(jì)算。⑥重復(fù)性試驗(yàn):取甲硝唑片［遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號:121261］50片，分置5個(gè)100 ml量瓶(每個(gè)量瓶中10片)中，分別照①項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制成樣品溶液;取樣品溶液按②項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，以亞硝酸根色譜峰面積計(jì)算。⑦最低檢出限和最低定量限:精密量取標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸根儲(chǔ)備液0.2 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為亞硝酸根對照溶液，用水做為空白溶液。取上述兩種溶液按②項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以基線噪音計(jì)算最低檢出限和最低定量限。⑧穩(wěn)定性試驗(yàn):將樣品測定項(xiàng)下溶液放置0、2、4、8、12 h 后按②項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，按亞硝酸根色譜峰面積計(jì)算RSD。⑨加樣回收試驗(yàn):取甲硝唑片［遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號121261，每1片含亞硝酸根2.015 μg］5片，分別置9個(gè)100 ml量瓶中，分別加標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸根儲(chǔ)備液0.5、0.5、0.5、1、1 、1、1.5、1.5 和 1.5 ml，分別照①項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制成樣品溶液;取樣品溶液按②項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，按線性回歸方程計(jì)算測得量。⑩樣品含量:分別取3個(gè)批次甲硝唑片［遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國)有限公司，批號 121261、121245、130125］，分別置100 ml量瓶(每瓶10片)中，分別照①項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制成樣品溶液，取樣品溶液按②項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，按線性回歸方程計(jì)算含量。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)實(shí)用性 樣品溶液色譜圖中在亞硝酸根對照溶液色譜圖相同保留時(shí)間位置有相應(yīng)的色譜峰，亞硝酸根色譜峰與其他相鄰色譜峰有較好的分離度，分離度大于2.5，理論塔板數(shù)按亞硝酸根色譜峰計(jì)算大于3000，見圖1。

圖1 離子色譜圖 a.對照品 b.樣品 1.亞硝酸根色譜峰

2.2 線性關(guān)系 線性關(guān)系回歸曲線:A=4.4623C-0.00003，r=0.9999，n=6。結(jié)果表明，亞硝酸根進(jìn)樣量在0.001～0.05 μg呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度 精密度試驗(yàn)結(jié)果亞硝酸根平均峰面積為0.08923，RSD為0.5%。

2.4 重復(fù)性 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果亞硝酸根平均峰面積為0.036，RSD為0.8%。

2.5 最低檢出限和最低定量限 結(jié)果空白溶液色譜圖中未見色譜峰，基線噪音0.001 μS;亞硝酸根色譜峰峰高為0.0425 μS。按3倍噪音比計(jì)算，最低檢出限每1 ml被測定溶液中含亞硝酸根0.0014 μg。按10倍噪音比計(jì)算，最低定量線為每1 ml被測定溶液中含亞硝酸根0.0046 μg。

2.6 穩(wěn)定性 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果亞硝酸根色譜峰面積變化不大，RSD為0.7%。

2.7 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果 平均99.0%，RSD0.3%，見表1。

表1 亞硝酸根加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品含量 測定結(jié)果見表2。

表2 3批樣品含量測定結(jié)果

3 討論

①該實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果準(zhǔn)確、方便、快速、測定溶液穩(wěn)定，適用于甲硝唑片中亞硝酸根的定量分析。②檢測亞硝酸根可選擇安倍檢測器、紫外檢測器、電導(dǎo)檢測器。安倍檢測器雖然專屬性較強(qiáng)，但峰面積重現(xiàn)性較差;紫外檢測器在檢測亞硝酸根需要衍生顯色后測定，方法繁瑣，影響因素較多，且該方法檢測靈敏度低;電導(dǎo)檢測器對常見陰離子均有響應(yīng)，靈敏度高，可測定樣品中痕量的亞硝酸根。③使用電導(dǎo)檢測器時(shí)，淋洗液有很高的檢測信號，抑制器可降低淋洗液的背景電導(dǎo)，增加被測定離子的電導(dǎo)值。④由于甲硝唑片中其他成分影響，為了達(dá)到符合測定要求的色譜條件，實(shí)驗(yàn)中采用了稀釋樣品到較低濃度的方法。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:153-154.

［2］何金奎，王丹丹.亞硝酸鹽中毒臨床分析［J］.中國社區(qū)醫(yī)師:2013，15(1):176.

［3］李良，王晴，江勇，等.離子色譜法同時(shí)測定奶粉中亞硝酸根、硝酸根、氯離子和磷酸跟［J］.理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊，2007，43(10):836-837.

［4］張磊，劉肖，趙云峰，等.離子色譜法測定食品中硝酸鹽和亞硝酸鹽［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，2008，20(4):294-295.