高效液相色譜-蒸發光散射檢測器法測定氟比洛芬酯注射液中大豆油含量

張 勉，李 超

(重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121)

氟比洛芬酯注射液是以脂微球為藥物載體的非甾體類鎮痛劑。藥物進入體內靶向分布到創傷及腫瘤部位后，氟比洛芬酯從脂微球中釋放出來，在羧基酯酶作用下迅速水解生成氟比洛芬，通過氟比洛芬抑制前列腺素的合成而發揮鎮痛作用。大豆油是制備乳劑的重要原輔料，其含量直接影響乳劑的成型質量，在氟比洛芬酯注射液中大豆油作為氟比洛芬酯的載體，有利于氟比洛芬酯達到靶向部位，更好地吸收。但由于大豆油為長鏈甘油三酸酯，紫外特征不強，常規的紫外檢測器無法完成對其的測定。國內僅有一個廠家生產該品種，現行質量標準[1]中未對大豆油進行含量控制。筆者采用高效液相色譜法分離，利用蒸發光散射檢測器測定氟比洛芬酯注射液中大豆油的含量，有效地解決了大豆油在該注射劑中的檢測問題，方法準確，操作簡便。

1 儀器與試藥

Waters e2695型高效液相色譜儀。大豆油對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100277－201103);大豆油原料(重慶藥友制藥有限責任公司，批號為R1105067);氟比洛芬酯注射液(北京泰德制藥股份有限公司，批號分別為5091N，5012B，5022B);正己烷與異丙醇均為色譜純，冰醋酸為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

檢測器:Waters 2424型蒸發光檢測器(霧化氣:空氣，霧化壓力:35．0 psi，漂移管溫度:70℃);色譜柱:菲羅門 Luna Silica色譜柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:正己烷 － 異丙醇 － 冰醋酸(99．4 ∶0．5 ∶0．1);流速:1．0 mL/min;柱溫:室溫。進樣量:10 μL。配制大豆油與油酸的混合溶液，按擬訂方法測定，兩者能較好地分離，見圖1。

2．2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

取大豆油對照品0．062 11 g，置25 mL容量瓶中，用正己烷－異丙醇(1∶1)的混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 1．0，3．0，5．0 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取樣品1 mL，置25 mL容量瓶中，用混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密取3 mL，置25mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2．3 大豆油原料的標定

取大豆油原料0．543 2 g，置100 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5．0 mL，置50 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，依法測定，測得大豆油含量為 100．0% 。

2．4 方法學考察

線性關系考察:取大豆油原料0．853 6 g，置100 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1，2，4，5，6，8，10 mL，分別置50 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，依法測定，得回歸方程 Y=0．001 7 X+115．7(r=0．998)。結果表明，大豆油質量濃度在 1．707～17．072 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:取同一質量濃度對照品溶液，連續進樣6次。結果的 RSD為0．57%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取樣品(批號為5091N)各1．0 mL，共6份，分別置25 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，依法測定。結果樣品平均含量為10．5 g/mL，RSD為2．4%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:取大豆油原料0．543 2 g，置100 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。取樣品(批號為5091N)各 1．0 mL，共9份，分別置25 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取3．0 mL，置 50 mL 容量瓶中，分別加入對照品貯備液 2．0，2．5，3．0 mL，各3份，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，依法測定。結果見表1。

表1 大豆油加樣回收試驗結果(n=9)

檢測限及定量限:以 S/N為3計算，大豆油的檢測限為0．050 7 μg。以 S/N 為 10 計算，大豆油的定量限為 0．169 μg。

專屬性試驗:取樣品1 mL，置錐形瓶中，加0．1 mol/L鹽酸溶液2 mL，加熱至沸，放冷，加0．1 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL，加混合溶液稀釋至25 mL，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為酸破壞溶液。取樣品1 mL，置錐形瓶中，加0．1 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL，加熱至沸，放冷，加0．1 mol/L鹽酸溶液2 mL，加混合溶液稀釋至25 mL，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為堿破壞溶液。取樣品1 mL，置錐形瓶中，加30%過氧化氫溶液2 mL，加熱至沸，放冷，加混合溶液稀釋至25 mL，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為氧化破壞溶液。取樣品1 mL，置錐形瓶中，加水2 mL，加熱至沸，放冷，加混合溶液稀釋至25 mL，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為高溫破壞溶液。取樣品置日光下放置48 h后，取1 mL置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為光破壞溶液。取上述破壞后的供試品溶液，按擬訂色譜條件分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖3。可見，本品經破壞后產生的降解產物均能與大豆油有效分離(分離度大于1．5)，表明上述色譜條件可用于大豆油含量的測定。

圖3 高效液相色譜圖

2．5 樣品含量測定

按擬訂方法測定3批氟比洛芬酯注射液中大豆油的含量。結果批號為5091N，5012B，5022B的大3批氟比洛芬注射液中豆油含量分別為 10．8，10．7，10．5 g/mL。

3 討論

參照脂肪乳注射液(C14－24)質量標準[2]中大豆油含量測定項下方法，流動相為正己烷 －異丙醇 －冰醋酸(98．9∶1∶0．1)，大豆油和油酸的分離較差，達不到要求。因此將流動相調整為正己烷－異丙醇 － 冰醋酸(99．4 ∶0．5 ∶0．1)，大豆油和油酸的分離度大于 2。

參照脂肪乳注射液(C14－24)質量標準[2]中大豆油含量測定項下方法，在供試品溶液配制時先用正己烷－異丙醇(1∶1)的混合溶液溶解，再用流動相稀釋，供試品溶液即發生乳渾。經考察，在第二步仍用上述混合溶液稀釋，溶液澄清。因此試驗中所用溶劑均為正己烷－異丙醇(1∶1)混合溶液。

在結果計算時，峰面積和質量濃度計算的線性良好，所以未使用峰面積和質量濃度的對數進行計算。

[1]YBH15412004，國家食品藥品監督管理局標準(試行)[S]．

[2]YBH13472008，國家食品藥品監督管理局標準[S]．