氣相色譜法測定通絡(luò)祛痛膏中樟腦、薄荷腦和冰片含量

姜家書，謝其亮，李敦明，張春霞

(河南羚銳制藥股份有限公司，河南 新縣 465550)

通絡(luò)祛痛膏由10多味藥材及樟腦、薄荷腦、冰片輔以橡膠等基質(zhì)制成的橡膠膏劑，具有活血通絡(luò)、散寒除濕、消腫止痛的功效，主要用于腰部、膝部骨性關(guān)節(jié)病瘀血停滯、寒濕阻絡(luò)證，癥見關(guān)節(jié)刺痛或鈍痛、關(guān)節(jié)僵硬、曲伸不利、畏寒肢冷等。通絡(luò)祛痛膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中已有阿魏酸的含量測定，鑒于樟腦、薄荷腦及冰片是揮發(fā)性藥物，易于用氣相色譜(GC)法測定其含量，參照相關(guān)資料[1－3]，經(jīng)氣相色譜預(yù)試，分離較好，因此可用GC法的內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行含量測定。本試驗中采用GC法測定了通絡(luò)祛痛膏中樟腦、薄荷腦和龍腦的含量，為通絡(luò)祛痛膏的質(zhì)量控制提供了快速、準(zhǔn)確的方法。

1 儀器與試藥

日本島津 GC－2014型氣相色譜儀，包括 FID檢測器、AOC－20i型自動進(jìn)樣器、GC－Solution色譜工作站;AE200型分析天平、AG135型分析天平(梅特勒－托利多＜常州＞稱重設(shè)備系統(tǒng)有限公司)。樟腦對照品(批號為110747－201008)、薄荷腦對照品(批號為 110728－200506)、龍腦對照品(批號為110881－200706)均由中國食品藥品檢定研究院提供;萘(上海遠(yuǎn)航化工廠，批號為040101);乙酸乙酯(天津光復(fù)科技有限公司，批號為20110426);無水硫酸鈉(洛陽化學(xué)試劑廠，批號為100914);通絡(luò)祛痛膏(河南羚銳制藥股份有限公司，批號為090628，090629，090630，100703，100704，100705，110602，110603，110604，110614)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:Agilent DB－WAX彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30 m×0．32 mm，0．5 μm);檢測器:FID;載氣:高純氮?dú)?進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣;分流比:20∶1;進(jìn)樣量:1 μL;柱溫:140℃;進(jìn)樣口溫度:220℃;檢測器溫度:250℃。

2．2 溶液制備

稱取樟腦 113．19mg、薄荷腦 51．46mg、龍腦 30．18mg，置 10mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密稱取萘265．00 mg，置25 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。取本品3片，剪成窄條狀，除去蓋襯，置250 mL燒瓶中，加水100 mL，照2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩD[4]中揮發(fā)油測定法甲法測定，自測定器上端加水至充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時為止，再加乙酸乙酯2 mL，加熱回流提取3 h，放冷，分取乙酸乙酯液，置鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液置預(yù)先精密加入5 mL內(nèi)標(biāo)溶液的50 mL容量瓶中，以適量的乙酸乙酯分次洗滌冷凝管、揮發(fā)油測定器及濾器，洗滌液并入同一容量瓶中，并加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液過0．2 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2．3 樣正因子測定

精密量取對照品貯備液1 mL，置5 mL容量瓶中;另取內(nèi)標(biāo)溶液適量稀釋1倍，精密加入稀釋后的內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣，計算校正因子。

2．4 方法學(xué)考察

專屬性試驗:按通絡(luò)祛痛膏生產(chǎn)方法制備不含樟腦、薄荷腦和冰片的空白樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液;另取樣品制備用溶劑(乙酸乙酯)、對照品溶液和通絡(luò)祛痛膏供試品溶液各1 μL注入氣相色譜儀，在與樟腦、薄荷腦和冰片相應(yīng)色譜圖處，無色譜峰出現(xiàn)，見圖1。

圖1 氣相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取樟腦、薄荷腦和龍腦混合對照品貯備溶液 0．10，0．25，0．50，1．0，2．0，3．0 mL，分別置已加入 2 mL內(nèi)標(biāo)液的10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度。按擬訂色譜條件測定，每一質(zhì)量濃度級平行進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量1 μL。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)、對照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，樟腦 Y=0．776 3 X+0．018，薄荷腦Y=0．805X+0．008 7，龍腦 Y=0．804 7X+0．004 9，r=0．999 9。結(jié)果表明，樟腦、薄荷腦、龍腦進(jìn)樣量分別在 0．244～6．725，0．103 ～3．088，0．060 ～1．811 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別以樟腦峰面積、薄荷腦峰面積、龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值計算 RSD。結(jié)果的 RSD 分別為 1．85%，3．17%，2．38%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液1 μL，分別于0，2，4，6，8，12，24 h時依法測定，分別以樟腦峰面積、薄荷腦峰面積、龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值計算 RSD。結(jié)果的 RSD分別為0．19%，0．53%，0．72%，表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一樣品6份，按供試品制備方法制備，進(jìn)樣測定。結(jié)果每貼中樟腦、薄荷腦和龍腦含量的平均值分別為47．33，21．28，13．14 mg。結(jié)果的 RSD 分別為 1．04% ，1．40% ，1．03%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:取已知含量樣品6份，每份加入對照品適量，依法制備供試品溶液，每份供試品平行進(jìn)樣2次，并測定，計算回收率及 RSD，結(jié)果見表1。

表1 樟腦、薄荷腦和龍腦加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2．5 樣品含量測定

取10批通絡(luò)祛痛膏樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂方法進(jìn)樣測定，根據(jù)色譜圖的峰面積，以內(nèi)標(biāo)校正因子計算各批樣品含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(mg/貼)

3 討論

文獻(xiàn)報道的關(guān)于測定樟腦、薄荷腦和龍腦等含量的GC法，有使用PEG－20M填充柱等溫測定，也有使用毛細(xì)管柱以程序升溫的方法測定，本研究中采用Agilent DB－WAX毛細(xì)管色譜柱以等溫的方式進(jìn)行測定，結(jié)果各目標(biāo)成分均達(dá)到了很好的分離，且分析時間快，有利于快速進(jìn)行產(chǎn)品的質(zhì)量控制，節(jié)省產(chǎn)品檢測周期。

近3年的通絡(luò)祛痛膏產(chǎn)品中樟腦、薄荷腦和龍腦的含量測定結(jié)果顯示，不同批次之間樟腦的含量存在一定的差異，可能與樟腦的性質(zhì)有關(guān)，而另2種成分含量相差較小，表明通絡(luò)祛痛膏產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性好。本研究中以通絡(luò)祛痛膏中活性成分樟腦、薄荷腦和龍腦為定量指標(biāo)，建立了靈敏度高、重現(xiàn)性好的氣相色譜含量測定方法，為通絡(luò)祛痛膏揮發(fā)性成分的質(zhì)量控制提供了可靠方法。

[1]楊晶晶，郭堅固，劉獻(xiàn)陽，等．GC法測定麝香祛風(fēng)濕膏中薄荷腦、丁香酚等組分的含量[J]．食品與藥品，2008，10(9):51－53．

[2]張華林，李宗悟，楊學(xué)斌，等．氣相色譜法測定通立康膏中樟腦、異龍腦、龍腦、桂皮醛、丁香酚的含量[J]．中藥新藥與臨床藥理，2005，16(1):61－63．

[3]劉 杰，董文玲．4種中藥橡膠劑中樟腦薄荷腦冰片和水楊酸甲酯含量的氣相色譜法測定[J]．中成藥，2004，26(10):795－798．

[4]中國藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄8．