復方車前子滴丸制備工藝及其含量測定

張雪峰，歐 燕，薛桂蓬

(1．新疆生產建設兵團總醫院，新疆 烏魯木齊 830002;2．新疆藥物研究所，新疆 烏魯木齊 830004)

復方車前子滴丸由車前子、甘草、熟地3味藥組方，具有清熱化瘀、補腎通淋，主治慢性前列腺炎。方中君藥車前子[1]為車前科植物車前草 Plantago asiatica L．或平車前草 Plantago depressa Willd．的干燥成熟種子，具有清熱利尿、滲濕通淋、明目祛痰的功效。車前子中含大量黏液質(多糖類化合物)及車前子酸、膽堿、腺嘌呤、琥珀酸、蛋白質、微量元素、桃葉珊瑚苷等黃酮類成分。現代醫學研究表明，黃酮類化合物具有明顯的抗潰瘍、解痙、抗炎、抗菌、抗氧化、抗衰老、增強機體免疫力、軟化血管、降血糖、調血脂等生理活性。滴丸劑具有生產周期短、溶出快、生物利用度高等特點。本試驗采用單因素及正交試驗設計對其成型工藝進行研究[2]，并對滴丸中毛蕊花糖苷的含量進行測定。

1 儀器與試藥

DWJ－2000S型自動滴丸機(煙臺百藥泰中藥科技發展有限公司);ZB－1C型智能崩解儀(天津大學精密儀器廠);LibrorAEG－200型電子天平電子恒溫水浴鍋(北京永光明醫療器械廠);LC－20A型高效液相色譜儀(日本島津);SPD－20A型紫外檢測器;Shimadzu LC－Solution數據工作站;Water Purifier超純水機(四川沃特爾水處理設備有限公司);KQ－100DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀有限公司)。復方車前子滴丸提取物(新疆生產建設兵團總醫院，批號為20100609);毛蕊花糖苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為111530－200303);聚乙二醇4000(PEG 4000)、聚乙二醇6000(PEG 6000)(北京海淀會友精細化工有限公司，批號分別為090416，090222);液體石蠟(北京海淀會友精細化工有限公司，批號為091124);二甲基硅油100(天津大茂化學試劑廠)。

2 方法與結果

2．1 滴丸制備

稱取藥粉與基質(PEG 4000或PEG 6000)適量，混勻，置燒杯中水浴加熱，并不斷攪拌使熔融，然后將藥液加入滴灌，保溫10min。待冷凝溫度、藥液溫度等達到要求時，進行滴制。用濾紙吸去丸表面的冷卻液，即得復方車前子滴丸。

2．2 制備工藝優選

基質種類及藥物與基質配比的考察[3]:采用不同的基質與藥粉配比(2．5∶1)，制備滴丸，以滴制情況、硬度、圓整度、溶散時限為評價指標，考察基質種類，結果見表1。可見，采用PEG 4000物料的流動性要比用PEG 6000的流動性要好，但由于中藥藥粉特殊性質結合試驗結果最終選擇PEG 6000為基質。在此基礎上進一步對藥物與基質的配比進行篩選。結果見表2，可見，當藥液與基質配比為1∶25和1∶3．0時，均較易滴制，從減少服用量和節約成本的角度考慮，選用藥物與基質配比為1∶2．5。

表1 不同基質與藥物配比對滴丸成型的影響

表2 藥物與基質不同配比對滴丸成型的影響

正交試驗優選料液溫度、滴速和滴距[4－5]:通過上述試驗確定了藥粉∶PEG 6000為1∶2．5，在此基礎上，對影響滴丸成型的料液溫度(因素A)、滴速(因素B)和滴距(因素C)3個因素安排正交試驗，每個因素選取3個水平，以丸重變異系數[參照2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅠK滴丸劑項下質量差異檢查法檢查]和外觀質量(大小均勻、色澤一致、圓整，丸與丸之間不粘連，常溫下不軟化，滿分為10分)為評價指標。優選最佳制備條件。按照表3所列的因素水平進行正交試驗安排，選擇 L9(34)正交試驗表，結果見表4。方差分析結果見表5和表6。由直觀分析可見，影響丸重變異系數效果的因素順序為A＞B＞C，以藥液溫度影響最大，由于丸重變異系數越小越好，故結果為A2B2C1。經方差分析可見，藥液溫度對丸重變異系數有顯著性影響，滴速和滴距無顯著性差異，故選擇A2B3C1;影響丸外觀質量的因素順序為A＞C＞B，以藥液溫度影響最大，結果為A2B2C3。經方差分析可見，藥液溫度對外觀質量有顯著性影響，滴速和滴距無顯著性差異，故選擇A2B3C1。確定最優滴丸成型工藝為藥粉與PEG 6000配比為1∶2．5，藥液溫度為90℃，滴速為每分鐘55滴，滴距為6 cm。

表3 因素水平表

表4 正交試驗方案與結果 L9(34)

表5 丸重變異系數方差分析結果

表6 外觀質量方差分析結果

2．3 最佳工藝驗證試驗

按照優選出的工藝條件，進行驗證試驗，所得滴丸圓整度好，溶散時限和丸重差異符合2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅠK滴丸劑項下規定，驗證試驗結果見表7。

表7 驗證試驗結果

2．4滴丸含量測定[6-7]

2．4．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Agilent C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0．2%醋酸溶液(25∶75)圓1位;檢測波長:334nm;柱溫:35℃;流速:1．0 μg/mL;進樣量:10 μL。取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液按擬訂色譜條件進樣，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．4．2 溶液制備

取毛蕊花糖苷對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成每1 mL含348 μg的溶液，即得對照品貯備液。再精密量取4 mL貯備液，置10 mL容量瓶中，加60%甲醇至刻度，搖勻，制成每1 mL含139．2 μg的溶液，即得對照品溶液。取本品20丸，精密稱定，研細，取0．3 g置25 mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，超聲處理30 min，濾過，濾液作為供試品溶液。取缺車前子的滴丸樣品20丸，精密稱定，研細，取0．3 g置25 mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，超聲處理30 min，濾過，濾液作為陰性對照品溶液。

2．4．3 方法學考察

標準曲線制備[8]:精密吸取上述毛蕊花糖苷對照品液(348 μg/mL)0．5，1．0，1．5，2．0，4．0 mL 置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成含毛蕊花糖苷為 17．4，34．8，52．2，69．6，139．2 μg/mL 的對照品溶液。分別精密吸取 10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以質量濃度(C，μg/mL)為橫坐標、峰面積(A)為縱坐標進行線性回歸，得標準曲線方程 A=11 355C+10 120，r=0．999 5(n=5)。結果表明，毛蕊花糖苷質量濃度在17．4～139．2 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

穩定性試驗:依法制備供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，10 h時進樣，測定峰面積，計算毛蕊花糖苷的含量。結果的 RSD為1．89%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內穩定。

精密度試驗:取上述毛蕊花糖苷對照品溶液(348 μg/mL)1．0 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，重復進樣6次。結果的 RSD為0．46%，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測定峰面積，計算毛蕊花糖苷的含量。結果的 RSD為1．36%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知毛蕊花糖苷含量的樣品粉末10份，第1份為空白，其余分3組，各3份，精密加入一定量毛蕊花糖苷對照品，制成高、中、低3個質量濃度，依法制備供試品溶液，測定峰面積，計算回收率。結果毛蕊花糖苷的平均加樣回收率為 98．78% ，RSD 為 1．25%(n=9)。

3 討論

PEG4000，PEG6000是制備固體分散體的常用基質，由于其相對分子質量的不同而使其與藥物混合溶融后狀態不同，黏度不同，以致滴制過程中難易程度不同。本研究采用可量化指標的丸重變異系數，以及對包括滴制圓整度、硬度、拖尾在內的外觀質量來評定工藝的優劣，使用PEG 6000可使滴丸硬度增加，并使黏性適中，容易滴制。冷卻液也是影響滴丸制備的重要因素之一，不同冷卻液黏度不同，使丸下降速度不同，黏度小的丸下降快就可能產生粘連，黏度太大，丸下降太慢則滴制周期長，效率低;并且冷卻液的溫度是影響滴丸丸型是否圓整的重要因素，溫度太低丸未來得及收縮即凝固定型使丸呈扁型，溫度太高丸未凝固完全會產生丸與丸粘連。

車前子在2010年版《中國藥典(一部)》中含量測定項下，采用HPLC法(梯度洗脫)測定毛蕊花糖苷和京尼平苷的含量[9]，由于未買到京尼平苷對照品，因此本試驗只對車前子中毛蕊花糖苷的含量進行測定。預試驗中，曾先后比較了甲醇－0．5%醋酸溶液(40 ∶60)、甲醇 －0．3% 醋酸溶液(35 ∶65)、甲醇 －0．2%醋酸溶液(35∶65，25∶75)、甲醇－0．1%醋酸溶液(15∶85)等。結果在甲醇 －0．2%醋酸溶液(25∶75)條件下測定毛蕊花糖苷，取得了較好效果。

本試驗篩選出的復方車前子滴丸工藝簡便、可行，評價指標可靠、合理，符合2010年版《中國藥典(一部)》對滴丸制劑的要求。

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