高效液相色譜法測定小兒咽扁顆粒中綠原酸含量

2014-11-08 08:35:36劉應華宋愿智

中國藥業 2014年3期

段楊，劉應華，宋愿智

(1．陜西省新藥審評中心，陜西西安 710065;2．陜西醫藥控股集團生物制品有限公司，陜西漢中 723000;3．陜西省食品藥品檢驗所，陜西西安 710061)

小兒咽扁顆粒由金銀花、桔梗、玄參等8種中藥材組方，具有清熱利咽、解毒止痛的功效，適用于肺實熱引起的咽喉腫痛、口舌糜爛、咳嗽痰盛、咽炎喉炎、扁桃體炎等病癥[1]。原質量標準無含量測定項，為有效控制本品的質量，根據《藥品注冊管理辦法》及相關技術指導原則[2－3]，筆者對其質量標準的含量測定項進行了研究，建立了測定其君藥金銀花有效成分綠原酸含量的高效液相色譜(HPLC)法[4－5]，現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－10AATVP型高效液相色譜儀(日本島津公司);SPD－10AVP型紫外檢測器;梅特勒AB204型電子天平。綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110753－200413);小兒咽扁顆粒(市場購得，批號分別為 20101021，20101022，20101023);乙腈、磷酸、甲醇為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱:ODS 色譜柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0．4% 磷酸溶液(13 ∶87);流速:1．0 mL/min;檢測波長:327 nm;進樣量:10 μL。理論板數按綠原酸峰計算應不低于1 000。

2．2 溶液制備

精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋成每1 mL含40 μg的綠原酸溶液，作為對照品貯備液。取本品3袋，研碎，混勻，精密稱取細粉2 g，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇25 mL，稱定質量，超聲(功率160 W，頻率59 kHz)處理30 min，放冷，稱定質量，補足50%甲醇減失的質量，搖勻，過濾，精密量取續濾液5 mL，置25 mL棕色容量瓶中，精密加入50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按處方比例稱取不含金銀花的其他藥材，按小兒咽扁顆粒制劑工藝制備不含綠原酸的陰性樣品，按供試品溶液制備方法處理，即得陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

系統適用性試驗:分別精密吸取2．2項下3種溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，見圖1。結果，在此色譜條件下，在綠原酸吸收峰處陰性對照無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密吸取綠原酸對照品溶液(0．2 g/L)，分別制成質量濃度為 0．2，0．16，0．12，0．08，0．04，0．02 g/L 的溶液，分別精密吸取10 μL，按擬訂色譜條件進樣測定，以綠原酸峰面積積分值(Y)對進樣量(X)進行線性回歸，得回歸方程 Y=1．61×107X+2 206．268 8(r=0．999 9，n=6)。結果表明，綠原酸進樣量在0．2～2．0 μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件重復進樣5次，記錄峰面積。結果峰面積的 RSD為0．78%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，3，5，8 h 時進樣，記錄峰面積。結果的 RSD為0．87%(n=6)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

重復性試驗:取同一批(批號為20101021)樣品5份，依法制備供試品溶液，照擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果的RSD為1．45%(n=5)，表明方法重復性良好。

回收率試驗:精密量取已知含量的供試品溶液，再精密加入定量綠原酸對照品溶液，搖勻，按擬訂色譜條件進樣測定，計算加樣回收率。結果見表1。