超高效液相色譜質譜結合主成分分析方法研究制川烏配伍前后的腸內菌代謝差異

李雪?┢ぷ臃? 邢俊鵬 林娜 劉志強 宋鳳瑞

1引言

制川烏（Radix Aconiti Preparata， RAP）為川烏的炮制品，是一種廣泛用于治療風濕性疾病的常用中藥，其主要化學成分為二萜類生物堿，該類化合物既是活性成分同時又具有一定的毒性＼[1＼]。中醫理論常通過配伍的方式達到減毒增效的目的。川烏與白芍、川烏與防己配伍是中醫治療風濕痹癥的常用藥對，前者出自于漢代張仲景的烏頭湯，后者最早見于唐代孫思邈的防己湯＼[2＼]。近年來，對于烏頭與白芍或防己藥對配伍減毒增效的機理研究主要集中在鎮痛、抗炎和免疫調節等藥效學方面＼[3，4＼]，而對于其藥理活性成分在發揮藥效前生物轉化情況卻鮮有報道。

經口服給藥的中藥在到達靶器官之前，其中的化學成分可能受到腸內菌群的作用而發生生物轉化＼[5＼]。因此，藥物經腸內菌的代謝研究對闡明其生理作用機制具有重要意義。但是由于中藥化學成分的復雜性及代謝產物的多樣性，多組樣品代謝后差異的分析面臨著巨大的挑戰。本研究采用UPLCMS技術對制川烏單煎液、制川烏白芍共煎液、及制川烏防己共煎液在大鼠腸內菌中代謝前后的烏頭類生物堿及其代謝產物進行了高效的分離鑒定，進而采用主成分分析方法對液質數據進行分析。首次從整體原型及代謝產物的角度分析了白芍、防己對制川烏腸內菌生物轉化的影響，為闡明制川烏與白芍、防己配伍后減毒增效機理提供了新的依據。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

Accela UPLC高效液相色譜系統串聯FinniganLTQ XL離子阱質譜儀（美國Thermo公司產品），配備ESI電噴霧離子源； 手套式厭氧培養箱（美國Thermo公司產品）。

制川烏（四川江油）； 白芍、防己（長春市吉林大藥房）； 利血平（美國Sigma公司）； GAM培養基（日本日水公司）； 甲醇、乙腈（色譜純，英國Fisher Scientific公司）； 乙酸乙酯（分析純，北京試劑廠）； 去離子水由Millipore純水儀制備。

1引言

制川烏（Radix Aconiti Preparata， RAP）為川烏的炮制品，是一種廣泛用于治療風濕性疾病的常用中藥，其主要化學成分為二萜類生物堿，該類化合物既是活性成分同時又具有一定的毒性＼[1＼]。中醫理論常通過配伍的方式達到減毒增效的目的。川烏與白芍、川烏與防己配伍是中醫治療風濕痹癥的常用藥對，前者出自于漢代張仲景的烏頭湯，后者最早見于唐代孫思邈的防己湯＼[2＼]。近年來，對于烏頭與白芍或防己藥對配伍減毒增效的機理研究主要集中在鎮痛、抗炎和免疫調節等藥效學方面＼[3，4＼]，而對于其藥理活性成分在發揮藥效前生物轉化情況卻鮮有報道。

經口服給藥的中藥在到達靶器官之前，其中的化學成分可能受到腸內菌群的作用而發生生物轉化＼[5＼]。因此，藥物經腸內菌的代謝研究對闡明其生理作用機制具有重要意義。但是由于中藥化學成分的復雜性及代謝產物的多樣性，多組樣品代謝后差異的分析面臨著巨大的挑戰。本研究采用UPLCMS技術對制川烏單煎液、制川烏白芍共煎液、及制川烏防己共煎液在大鼠腸內菌中代謝前后的烏頭類生物堿及其代謝產物進行了高效的分離鑒定，進而采用主成分分析方法對液質數據進行分析。首次從整體原型及代謝產物的角度分析了白芍、防己對制川烏腸內菌生物轉化的影響，為闡明制川烏與白芍、防己配伍后減毒增效機理提供了新的依據。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

Accela UPLC高效液相色譜系統串聯FinniganLTQ XL離子阱質譜儀（美國Thermo公司產品），配備ESI電噴霧離子源； 手套式厭氧培養箱（美國Thermo公司產品）。

制川烏（四川江油）； 白芍、防己（長春市吉林大藥房）； 利血平（美國Sigma公司）； GAM培養基（日本日水公司）； 甲醇、乙腈（色譜純，英國Fisher Scientific公司）； 乙酸乙酯（分析純，北京試劑廠）； 去離子水由Millipore純水儀制備。

1引言

制川烏（Radix Aconiti Preparata， RAP）為川烏的炮制品，是一種廣泛用于治療風濕性疾病的常用中藥，其主要化學成分為二萜類生物堿，該類化合物既是活性成分同時又具有一定的毒性＼[1＼]。中醫理論常通過配伍的方式達到減毒增效的目的。川烏與白芍、川烏與防己配伍是中醫治療風濕痹癥的常用藥對，前者出自于漢代張仲景的烏頭湯，后者最早見于唐代孫思邈的防己湯＼[2＼]。近年來，對于烏頭與白芍或防己藥對配伍減毒增效的機理研究主要集中在鎮痛、抗炎和免疫調節等藥效學方面＼[3，4＼]，而對于其藥理活性成分在發揮藥效前生物轉化情況卻鮮有報道。

經口服給藥的中藥在到達靶器官之前，其中的化學成分可能受到腸內菌群的作用而發生生物轉化＼[5＼]。因此，藥物經腸內菌的代謝研究對闡明其生理作用機制具有重要意義。但是由于中藥化學成分的復雜性及代謝產物的多樣性，多組樣品代謝后差異的分析面臨著巨大的挑戰。本研究采用UPLCMS技術對制川烏單煎液、制川烏白芍共煎液、及制川烏防己共煎液在大鼠腸內菌中代謝前后的烏頭類生物堿及其代謝產物進行了高效的分離鑒定，進而采用主成分分析方法對液質數據進行分析。首次從整體原型及代謝產物的角度分析了白芍、防己對制川烏腸內菌生物轉化的影響，為闡明制川烏與白芍、防己配伍后減毒增效機理提供了新的依據。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

Accela UPLC高效液相色譜系統串聯FinniganLTQ XL離子阱質譜儀（美國Thermo公司產品），配備ESI電噴霧離子源； 手套式厭氧培養箱（美國Thermo公司產品）。

制川烏（四川江油）； 白芍、防己（長春市吉林大藥房）； 利血平（美國Sigma公司）； GAM培養基（日本日水公司）； 甲醇、乙腈（色譜純，英國Fisher Scientific公司）； 乙酸乙酯（分析純，北京試劑廠）； 去離子水由Millipore純水儀制備。