超高效液相色譜質(zhì)譜結(jié)合主成分分析方法研究制川烏配伍前后的腸內(nèi)菌代謝差異

李雪?┢ぷ臃? 邢俊鵬 林娜 劉志強(qiáng) 宋鳳瑞

1引言

制川烏（Radix Aconiti Preparata， RAP）為川烏的炮制品，是一種廣泛用于治療風(fēng)濕性疾病的常用中藥，其主要化學(xué)成分為二萜類生物堿，該類化合物既是活性成分同時又具有一定的毒性＼[1＼]。中醫(yī)理論常通過配伍的方式達(dá)到減毒增效的目的。川烏與白芍、川烏與防己配伍是中醫(yī)治療風(fēng)濕痹癥的常用藥對，前者出自于漢代張仲景的烏頭湯，后者最早見于唐代孫思邈的防己湯＼[2＼]。近年來，對于烏頭與白芍或防己藥對配伍減毒增效的機(jī)理研究主要集中在鎮(zhèn)痛、抗炎和免疫調(diào)節(jié)等藥效學(xué)方面＼[3，4＼]，而對于其藥理活性成分在發(fā)揮藥效前生物轉(zhuǎn)化情況卻鮮有報道。

經(jīng)口服給藥的中藥在到達(dá)靶器官之前，其中的化學(xué)成分可能受到腸內(nèi)菌群的作用而發(fā)生生物轉(zhuǎn)化＼[5＼]。因此，藥物經(jīng)腸內(nèi)菌的代謝研究對闡明其生理作用機(jī)制具有重要意義。但是由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性及代謝產(chǎn)物的多樣性，多組樣品代謝后差異的分析面臨著巨大的挑戰(zhàn)。本研究采用UPLCMS技術(shù)對制川烏單煎液、制川烏白芍共煎液、及制川烏防己共煎液在大鼠腸內(nèi)菌中代謝前后的烏頭類生物堿及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行了高效的分離鑒定，進(jìn)而采用主成分分析方法對液質(zhì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。首次從整體原型及代謝產(chǎn)物的角度分析了白芍、防己對制川烏腸內(nèi)菌生物轉(zhuǎn)化的影響，為闡明制川烏與白芍、防己配伍后減毒增效機(jī)理提供了新的依據(jù)。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

Accela UPLC高效液相色譜系統(tǒng)串聯(lián)FinniganLTQ XL離子阱質(zhì)譜儀（美國Thermo公司產(chǎn)品），配備ESI電噴霧離子源； 手套式厭氧培養(yǎng)箱（美國Thermo公司產(chǎn)品）。

制川烏（四川江油）； 白芍、防己（長春市吉林大藥房）； 利血平（美國Sigma公司）； GAM培養(yǎng)基（日本日水公司）； 甲醇、乙腈（色譜純，英國Fisher Scientific公司）； 乙酸乙酯（分析純，北京試劑廠）； 去離子水由Millipore純水儀制備。

1引言

制川烏（Radix Aconiti Preparata， RAP）為川烏的炮制品，是一種廣泛用于治療風(fēng)濕性疾病的常用中藥，其主要化學(xué)成分為二萜類生物堿，該類化合物既是活性成分同時又具有一定的毒性＼[1＼]。中醫(yī)理論常通過配伍的方式達(dá)到減毒增效的目的。川烏與白芍、川烏與防己配伍是中醫(yī)治療風(fēng)濕痹癥的常用藥對，前者出自于漢代張仲景的烏頭湯，后者最早見于唐代孫思邈的防己湯＼[2＼]。近年來，對于烏頭與白芍或防己藥對配伍減毒增效的機(jī)理研究主要集中在鎮(zhèn)痛、抗炎和免疫調(diào)節(jié)等藥效學(xué)方面＼[3，4＼]，而對于其藥理活性成分在發(fā)揮藥效前生物轉(zhuǎn)化情況卻鮮有報道。

經(jīng)口服給藥的中藥在到達(dá)靶器官之前，其中的化學(xué)成分可能受到腸內(nèi)菌群的作用而發(fā)生生物轉(zhuǎn)化＼[5＼]。因此，藥物經(jīng)腸內(nèi)菌的代謝研究對闡明其生理作用機(jī)制具有重要意義。但是由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性及代謝產(chǎn)物的多樣性，多組樣品代謝后差異的分析面臨著巨大的挑戰(zhàn)。本研究采用UPLCMS技術(shù)對制川烏單煎液、制川烏白芍共煎液、及制川烏防己共煎液在大鼠腸內(nèi)菌中代謝前后的烏頭類生物堿及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行了高效的分離鑒定，進(jìn)而采用主成分分析方法對液質(zhì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。首次從整體原型及代謝產(chǎn)物的角度分析了白芍、防己對制川烏腸內(nèi)菌生物轉(zhuǎn)化的影響，為闡明制川烏與白芍、防己配伍后減毒增效機(jī)理提供了新的依據(jù)。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

Accela UPLC高效液相色譜系統(tǒng)串聯(lián)FinniganLTQ XL離子阱質(zhì)譜儀（美國Thermo公司產(chǎn)品），配備ESI電噴霧離子源； 手套式厭氧培養(yǎng)箱（美國Thermo公司產(chǎn)品）。

制川烏（四川江油）； 白芍、防己（長春市吉林大藥房）； 利血平（美國Sigma公司）； GAM培養(yǎng)基（日本日水公司）； 甲醇、乙腈（色譜純，英國Fisher Scientific公司）； 乙酸乙酯（分析純，北京試劑廠）； 去離子水由Millipore純水儀制備。

1引言

制川烏（Radix Aconiti Preparata， RAP）為川烏的炮制品，是一種廣泛用于治療風(fēng)濕性疾病的常用中藥，其主要化學(xué)成分為二萜類生物堿，該類化合物既是活性成分同時又具有一定的毒性＼[1＼]。中醫(yī)理論常通過配伍的方式達(dá)到減毒增效的目的。川烏與白芍、川烏與防己配伍是中醫(yī)治療風(fēng)濕痹癥的常用藥對，前者出自于漢代張仲景的烏頭湯，后者最早見于唐代孫思邈的防己湯＼[2＼]。近年來，對于烏頭與白芍或防己藥對配伍減毒增效的機(jī)理研究主要集中在鎮(zhèn)痛、抗炎和免疫調(diào)節(jié)等藥效學(xué)方面＼[3，4＼]，而對于其藥理活性成分在發(fā)揮藥效前生物轉(zhuǎn)化情況卻鮮有報道。

經(jīng)口服給藥的中藥在到達(dá)靶器官之前，其中的化學(xué)成分可能受到腸內(nèi)菌群的作用而發(fā)生生物轉(zhuǎn)化＼[5＼]。因此，藥物經(jīng)腸內(nèi)菌的代謝研究對闡明其生理作用機(jī)制具有重要意義。但是由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性及代謝產(chǎn)物的多樣性，多組樣品代謝后差異的分析面臨著巨大的挑戰(zhàn)。本研究采用UPLCMS技術(shù)對制川烏單煎液、制川烏白芍共煎液、及制川烏防己共煎液在大鼠腸內(nèi)菌中代謝前后的烏頭類生物堿及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行了高效的分離鑒定，進(jìn)而采用主成分分析方法對液質(zhì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。首次從整體原型及代謝產(chǎn)物的角度分析了白芍、防己對制川烏腸內(nèi)菌生物轉(zhuǎn)化的影響，為闡明制川烏與白芍、防己配伍后減毒增效機(jī)理提供了新的依據(jù)。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

Accela UPLC高效液相色譜系統(tǒng)串聯(lián)FinniganLTQ XL離子阱質(zhì)譜儀（美國Thermo公司產(chǎn)品），配備ESI電噴霧離子源； 手套式厭氧培養(yǎng)箱（美國Thermo公司產(chǎn)品）。

制川烏（四川江油）； 白芍、防己（長春市吉林大藥房）； 利血平（美國Sigma公司）； GAM培養(yǎng)基（日本日水公司）； 甲醇、乙腈（色譜純，英國Fisher Scientific公司）； 乙酸乙酯（分析純，北京試劑廠）； 去離子水由Millipore純水儀制備。