埋線療法對衰老模型大鼠皮膚的抗氧化作用

周雙琳 張 聰 林 殷

(北京中醫藥大學，北京，100029)

皮膚老化是機體衰老外在表現。自由基學說己被認為人類衰老機制現代理論中具有代表性的學說之一，如何有效保護皮膚組織免受自由基攻擊，是延緩皮膚衰老的途徑之一。埋線療法是將可吸收性外科縫線(主要是指羊腸線)置入穴位內，利用線對穴位產生的持續刺激作用以防治疾病[1]，近年來該療法在經絡美容、面部除皺、抗皮膚老化等方面療效滿意[2－4]。有研究表明[5]針刺療法具有清除自由基，提高抗氧化酶的活性起到抗氧化的作用。作為一種長效針灸的埋線療法是否同樣對皮膚組織具有抗氧化作用?相關的實驗研究文獻少見報道，因此本課題以D－半乳糖致亞急性雌性衰老大鼠皮膚為研究對象，在背部皮下進行埋線，檢測皮膚組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽過氧化物酶(GHS－Px)活力，觀察其對衰老大鼠皮膚的抗氧化作用效應，現將實驗結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 隨機選取3月齡雌性Wistar大鼠30只，體重(220.6±18)g，由維通利華實驗動物技術有限公司提供(批號:SCXK京2011－0010)，飼養于中國中醫科學院基礎理論研究所實驗動物室。

1.1.2 儀器設備 羊腸線(上海浦東金環醫療用品有限公司出品的00號鉻制醫用羊腸線);一次性使用埋線針(揚州市邗江國祥醫療器械廠出品的9號埋線針);試劑:D－半乳糖(上海試劑二廠);SOD試劑盒、MDA試劑盒、GHS－Px試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2 方法

1.2.1 衰老動物模型的制備 采用D－半乳糖致亞急性衰老法，將D－半乳糖50 g溶于500 mL生理鹽水中，按注射劑量125 mg/(kg·d)(即每克體重0.01 mL)予大鼠腹腔內注射，造模時間為100 d，每周稱重1次，依據末次稱重的大鼠體重克數調整給藥劑量，從而建立亞急性衰老大鼠模型。

1.2.2 埋線操作 使用眼科鑷夾持羊腸線從埋線針尖端推入，至針尖外無線體外露;左手拇食指繃緊或提捏起進針皮膚，右手拇中指夾持埋線針針柄，食指輕壓針芯帽，針尖斜面朝上，迅速將針刺入穴位皮下，左手拇、食指緩緩推動針芯，右手拇食中三指緩緩后退針管，待羊腸線完全植入后，立即出針，用干棉球壓迫針孔片刻。

1.2.3 分組及治療 空白對照組:大鼠10只，進行捆綁操作，不注射，不埋線;衰老模型組:大鼠10只，按照衰老動物模型的制備方法進行操作;埋線治療組:大鼠10只，先在大鼠背部進行皮下埋線一次，大鼠背部皮膚選取9點(分3行，行距為1 cm;每行3點，點距為1 cm)，分別埋入0.5 cm羊腸線。然后每天按照衰老動物模型的制備方法進行操作。100 d后在各組大鼠背部皮膚取材，檢測皮膚組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽過氧化物酶(GHS－Px)活力。

1.2.4 指標檢測 第100 d脫椎處死大鼠，立即脫毛后取背部皮膚組織約2 cm×3 cm，生理鹽水漂洗后去除多余脂肪組織，制成10%的皮膚組織勻漿，做SOD活性、MDA含量、GHS－Px活力的測定。嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 統計學方法 采用SPSS 10.0統計分析軟件進行統計。數據均以(±s)表示，定量資料組間比較采用t檢驗。

表1 各組大鼠皮膚SOD、MDA和GHS－Px活力的含量(±s)

表1 各組大鼠皮膚SOD、MDA和GHS－Px活力的含量(±s)

注:與空白對照組比較，＊＊P＜0.01，與衰老模型組比較，*P＜0.05。

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2 結果

1)與空白對照組相比，模型組SOD活性、GHSPx活力明顯低于空白組，差異具有統計學意義(P＜0.01)，模型組MDA含量明顯高于空白組，差異具有統計學意義(P＜0.01)，可認為D－半乳糖致亞急性衰老動物模型造模成功;埋線治療組皮膚組織中的SOD活性、GHS－Px活力及MDA含量無明顯改變(P＞0.05)。(見表1)

2)與模型組相比，埋線治療組SOD活性、GHSPx活力明顯升高，MDA含量明顯降低，差異有統計學意義(P＜0.05)。(見表1)

3 討論

傳統中醫學認為，女性皮膚衰老過程中，三陽經氣虛衰是根本原因。《素問·上古天真論》:女子“五七，陽明脈衰，面始焦……;六七，三陽脈衰于上，面皆焦”。陽明胃經為多氣多血之經，陽明脈衰是氣血虛衰之兆。氣血不旺，不能上達于面，使皮膚失去濡養滋潤，導致干枯、出現皺紋，呈現衰老的面貌。另一方面，機體氣血虛衰不能推動血液運行，導致血瘀痰濁內停，血瘀痰濁停聚日久又成為新的致衰因素[6－7]。血瘀在皮膚衰老中會出現不同程度的老年斑、肌膚甲錯。痰濁內停在皮膚衰老方面主要表現為面色晦暗或面色光亮如油，皮膚油垢明顯，肌肉松軟如綿等痰凝肌腠、痰留皮膚的病變[8]。因而衰老是一個慢性、漸進性過程，《靈樞·終始》:“久病者，邪氣深，刺此病者，深內而久留之。”埋線療法通過將線體留置于經穴內，長久疏通經絡，起到平衡陰陽、激發氣血化生之功，因而該療法已被廣泛應用于現代養生抗衰老領域。

現代醫學關于衰老自由基學說是目前國內外普遍公認的衰老理論。該學說認為機體受內、外源性刺激作用可產生大量自由基如活性氧(ROS)等[9]。自由基具有極強的氧化能力，可使生物膜中不飽和脂類發生過氧化，形成過氧化脂質，經分解后產過氧化物丙二醛(MDA)。丙二醛(MDA)與蛋白質、肽類或脂類聚合交聯可形成老年色素或脂褐質的積累。當自由基過度堆積，攻擊皮膚組織細胞，導致細胞凋亡，從而引起皮膚老化[10]。由于機體存在自由基的防御系統，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)是機體酶促防御系統的主要抗氧化酶，它們組成體內的第一道抗氧化防線，早期生成的自由基都會被它們所還原，從而保證機體不會受到損害，防止衰老。當機體的自由基超過了它們的清除能力時，它們的活性就會降低。因此抗氧化酶和過氧化產物的含量成為皮膚衰老與抗衰老研究的重要指標。本研究通過檢測埋線后大鼠皮膚組織中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)，以及過氧化物丙二醛(MDA)含量情況來觀察其對衰老大鼠皮膚的抗氧化作用效應.本研究采用D－半乳糖致衰的大鼠模型，通過連續注射D－半乳糖，影響細胞的滲透壓，使細胞腫脹，進而使細胞功能障礙、代謝紊亂，最終導致機體衰老[9]。姜國良等[11]證實注射D－半乳糖可構建的建立穩定可靠的衰老大鼠模型，能在皮膚組織及其他多層面上反映出機體的衰老情況。本研究表1中顯示，模型組SOD活性、GHS－Px活力明顯低于空白組，MDA含量明顯高于空白組，說明D－半乳糖可使機體產生嚴重氧化應激，導致急性衰老，可認為D－半乳糖致衰老動物模型造模成功。埋線治療組大鼠雖經注射D－半乳糖，但組皮膚組織中的 SOD活性、GHS－Px活力及MDA含量與空白組相比無明顯改變;與模型組相比，埋線治療組SOD活性、GHS－Px活力明顯升高，MDA含量降低，說明皮膚局部埋線有明顯的抗氧化作用，通過提高抗氧化酶的活性提高清除自由基能力，降低皮膚組織內自由基的堆積從而保護皮膚。這可能是埋線療法能有效抗皮膚老化的作用機制之一。

4 結論

本研究結果證明，埋線療法對雌性衰老大鼠皮膚有明顯的抗氧化效應，其抗皮膚老化作用機制可能與皮膚組織中SOD、MDA和GHS－Px活力的改變相關。

目前國內外關于埋線療法抗皮膚老化的臨床及基礎研究較少，本研究僅從局部探討了埋線后皮膚抗氧化方面的效應機制，對于埋線療法整體的抗皮膚老化機制仍不明確，這將是我們下一步研究要關注的重點。

[1]《針灸技術操作規范第10部分:穴位埋線》項目組.中華人民共和國國家標準(GB/T 21709.10－2008)[S].中國針灸，2009，29(5):405－406.

[2]蘇文武，鄭照順.埋線療法治療上面部動力性皺紋[J].中國保健營養，2013，1(下):71－72.

[3]齊鳳君.局部埋線搭橋修復皺紋38例[J].中醫雜志，2006，47(5):366.

[4]周雙琳，張聰，林殷.足陽明經穴埋線對面部皺紋皮膚作用效應的臨床觀察[J].世界中醫藥，2013，10(8):1190－1193.

[5]張小卿，陶冶，田國偉，等.針刺對光老化大鼠皮膚組織中 SOD、MDA、GSH－Px活性的影響[J].中國美容醫學，2012，21(7):1168－1170.

[6]王靜淑.延緩衰老從瘀論治[J].中國中醫基礎醫學雜志，1998，4(8):46.

[7]朱敏英.《內經》中痰、精、髓與衰老關系淺析[J].湖北中醫雜志，2005，27(8):21－22.

[8]潘桂娟.論痰濁與衰老[J].中國中醫基礎醫學雜志，1997，3(5):62.

[9]Harman D.Aging:a theory based on free radical and radiation chemistry[J].J Gerontol，1956，11:298－300.

[10]Valencia A，Kochevar IE.Nox1－ based NADPH oxidase is the major source of UVA－induced reactive oxygen species in human keratinocytes[J].J Invest Dermatol，2008，128(1):214－222.

[11]姜國良，于曉，徐愷，等.腹腔和皮下注射D－半乳糖衰老大鼠模型分析[J].中國老年學雜志，2013，5(33):1101－1103.