氣相色譜法測(cè)定苦參蒼術(shù)口服液中三氯甲烷殘留量

范 強(qiáng)，劉自揚(yáng)，萬(wàn)仁玲，段文龍

（中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081）

苦參蒼術(shù)口服液由苦參和蒼術(shù)兩味中藥組成，具有清熱、燥濕、止痢之功效，主治雞大腸桿菌病，其在制劑制備過程中使用三氯甲烷提取苦參總生物堿。三氯甲烷是一種強(qiáng)揮發(fā)性物質(zhì)，高劑量的三氯甲烷能抑制中樞神經(jīng)，并可造成肝腎損害及腫瘤［1］。《中華人民共和國(guó)獸藥典》二○一○年版規(guī)定，三氯甲烷屬第二類殘留溶劑，應(yīng)限制使用，限度為0.006%［2］，控制其殘留量對(duì)保證獸藥質(zhì)量和用藥安全具有重要意義。因此，本研究按照《中國(guó)獸藥典》殘留溶劑測(cè)定法的要求，在參考相關(guān)文獻(xiàn)基礎(chǔ)上［3-5］，建立了苦參蒼術(shù)口服液中三氯甲烷殘留量的檢測(cè)方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

Aglient 7890A氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器；梅特勒XS205分析天平。三氯甲烷（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供，分析純，批號(hào)：20090116），N-N二甲基甲酰胺（DMF）（迪馬公司提供，色譜純，批號(hào)：62106）。苦參蒼術(shù)口服液由洛陽(yáng)惠中獸藥有限公司提供，批號(hào)：20101001，20101002，20101003。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性［3-5］采用DB-FFAP毛細(xì)管柱（30 m ×0.53 mm×1 μm）；進(jìn)樣口溫度：220℃；程序升溫，初始溫度40℃保持10 min，以10℃／min的速率升溫至70℃，保持3 min后，再以20℃／min的速率升溫至200℃；FID檢測(cè)器溫度250℃；載氣為氮?dú)猓魉?.0 mL／min；分流比1∶1；進(jìn)樣方式為直接進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL。三氯甲烷色譜峰與其他色譜峰的分離度大于1.5，色譜圖見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取三氯甲烷對(duì)照品適量，精密稱定，用DMF稀釋制成24 μg／mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取蒼術(shù)苦參口服液樣品作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取三氯甲烷對(duì)照品151.16 mg，置已有一定量DMF的50 mL量瓶中，加DMF稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用DMF稀釋配制成含三氯甲烷6.0464、12.0928、24.1856、30.232、60.464、120.928 μg／mL的系列對(duì)照品溶液，精密吸取上述對(duì)照品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，連續(xù)測(cè)定2次，以平均峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為 A ＝ 0.9722C－0.1428（r＝0.99995），線性范圍為 6.0464～120.928 μg／mL。

2.5 檢測(cè)限和定量限 取濃度為6.046 μg／mL的對(duì)照品溶液，逐步稀釋，依照測(cè)定法測(cè)定三氯甲烷峰的信噪比，得三氯甲烷的檢測(cè)限（S／N＝3）為0.91 μg／mL，定量限 （S／N ＝ 10） 為 2.42 μg／mL。

2.6 儀器精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為60.464 μg／mL的三氯甲烷對(duì)照品溶液1 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積，計(jì)算RSD為1.1%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液1 μL，分別在0，2，6，8，10，12 h 進(jìn)樣，測(cè)定三氯甲烷的峰面積，計(jì)算RSD為2.3%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為20101001的苦參蒼術(shù)口服液，按上述方法平行測(cè)定6次，得平均含量為22.036 μg／mL，RSD 為2.7%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的供試品（批號(hào)：20101001）5 mL，置10 mL量瓶中，精密加入濃度為22.003 μg／mL的三氯甲烷對(duì)照品溶液5 mL，混勻，共制備6份，按上述方法測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.10 供試品的測(cè)定 按“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定，記錄三氯甲烷峰的峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算其含量，結(jié)果3批供試品中均檢出三氯甲烷，其殘留量均低于《中華人民共和國(guó)獸藥典》的限度規(guī)定，數(shù)據(jù)見表2。

表2 樣品的含量測(cè)定結(jié)果 （n＝4）

3 討論與小結(jié)

3.1 色譜柱的選擇 研究中分別采用HB-5、DB-624、DB-WAX、DB-FFAP等色譜柱進(jìn)行了色譜條件摸索，結(jié)果表明采用DB-FFAP色譜柱分離效果最好，三氯甲烷峰與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，符合氣相色譜法的規(guī)定。

3.2 檢測(cè)器的選擇 三氯甲烷含有3個(gè)電負(fù)性的氯原子，在FID檢測(cè)器上響應(yīng)較低，最適宜采用電子俘獲檢測(cè)器（ECD）對(duì)其進(jìn)行測(cè)定。ECD檢測(cè)器僅對(duì)那些能俘獲電子的化合物，如鹵代烴、含N、O和S等雜原子的化合物有響應(yīng)，但其對(duì)檢測(cè)樣品要求較高。研究中發(fā)現(xiàn)，供試品成分較為復(fù)雜且含有一定量的乙醇，極易對(duì)ECD檢測(cè)器造成污染而影響測(cè)定，故最終選用了FID檢測(cè)器。

3.3 進(jìn)樣方式的選擇 研究中分別對(duì)直接進(jìn)樣方式和頂空進(jìn)樣方式進(jìn)行了比較，結(jié)果由于供試品中含有大量的揮發(fā)油和乙醇，采用頂空進(jìn)樣的方式無法達(dá)到減小干擾的目的，反而增加了干擾，故最終采用直接進(jìn)樣的方式。

3.4 測(cè)定方法的選擇 氣相色譜法測(cè)定含量時(shí)，內(nèi)標(biāo)法可減少由儀器系統(tǒng)或操作過程引入的誤差，比外標(biāo)法具有更高的準(zhǔn)確度。但由于供試品中含有的揮發(fā)性成分較多，對(duì)測(cè)定的干擾較大，研究中未能從異丙醇、正丁醇、丙酮、正己烷等有機(jī)試劑中選出合適的內(nèi)標(biāo)物，故最終采用外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定。

3.5 柱溫的選擇 試驗(yàn)中分別對(duì)恒溫方式和程序升溫方式進(jìn)行了考察，結(jié)果采用恒溫方式時(shí)，三氯甲烷峰不能與其他色譜峰完全分離；采用程序升溫的方式時(shí)，三氯甲烷峰達(dá)到基線分離，峰形較好，分析時(shí)間較短；故試驗(yàn)中采用程序升溫的方式進(jìn)行樣品測(cè)定。

本研究首次利用氣象色譜法對(duì)中藥口服液中三氯甲烷的殘留量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為苦參蒼術(shù)口服液中三氯甲烷殘留量的檢測(cè)方法。此外，根據(jù)產(chǎn)品的制劑工藝，本方法亦可用于蒼術(shù)揮發(fā)油和苦參總生物堿中三氯甲烷殘留量的測(cè)定。

［1］鄒 梅，趙生友，王 瑋.氯仿的免疫毒性作用［J］.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2002，18（3）：178-183.

［2］中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典二○一○年版一部［S］.

［3］宋更申，郭 毅，付 焱，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定鹽酸美金剛原料藥中三氯甲烷的殘留量［J］.中國(guó)藥房，2010，21（37）：3536-3537.

［4］李志剛，李 晶，高 強(qiáng)，等.氣相色譜法測(cè)定甲型肝炎滅活疫苗中三氯甲烷殘留量［J］.中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2010，23（7）：778-780.

［5］李雪春，張衛(wèi)國(guó).中草藥制劑中三氯甲烷殘留量的頂空氣相色譜測(cè)定法［J］.職業(yè)與健康，2011，27（1）：37-38.