磷酸替米考星可溶性粉對人工感染雞毒支原體的療效試驗

范建華，何友義，韋玉勇，徐 步*，卜仕金

(1.中國農業科學院家禽所，江蘇揚州225125;2.江蘇威泰龍生物科技有限公司，江蘇泰州225000;3.揚州大學，江蘇揚州225009)

替米考星是一種半合成大環內酯類畜禽專用抗生素，常用于預防和治療雞毒支原體感染引起的支氣管炎、氣囊炎等［1］，是治療雞毒支原體感染等雞慢性呼吸道疾病的最有效藥物之一，至今尚未見有耐藥菌株的報道［2］。磷酸替米考星是替米考星磷酸鹽，易溶于水。為進一步驗證磷酸替米考星對雞毒支原體感染的防治效果，特進行如下試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 受試藥:磷酸替米考星可溶性粉:規格10%(以替米考星計)，由湖北某獸藥廠提供。對照藥:替米考星可溶性粉，含量10%，由天津某獸藥廠生產。適應癥為雞支原體等慢性呼吸道疾病治療，推薦用法與用量為:混飲，每1 L飲水加本品0.75 g(以替米考星計)，連用3 d。

1.1.2 雞毒支原體菌種和抗原 雞毒支原體(MGS6)及MG培養基均由江蘇省農業科學院獸醫研究所饋贈;雞毒支原體血清平板凝集抗原由中國農業科學院家禽所生物安全研究室提供。

1.1.3 主要試劑及培養基 水解蛋白為美國Difco公司產品;酵母浸出物為英國OXOID公司產品;氨水25%(AR級)，上海生工生物制劑有限公司生產。

1.1.4 試驗動物 200只1日齡蘇禽黃羽肉雞和小雞粉料均購自揚州翔龍禽業發展有限公司，其中飼料為不加任何抗菌藥的小雞全價料。該雞群試驗前血清學檢測雞毒支原體結果為陰性。受試雞采用網上飼養，自由采食和飲水，每天清理雞糞，雞舍自然通風。

1.2 方法

1.2.1 雞毒支原體S6株菌液的制備 將冷凍保存的MGS6菌液解凍后取1mL接種于5 mL FM-4液體培養基中，37℃培養3～4 d至顏色變黃，隨后置于-20℃冷凍保存。攻毒前先行在實驗室通過非免疫雞接種復壯。菌種復壯經傳代后測定菌液的顏色變化單位(ccu/mL)。

1.2.2 分組與給藥 蘇禽黃羽肉雛雞飼喂至14日齡后，從中挑選180只體重均勻、健康雞作為試驗對象，隨機分成6組，每組30只，單羽稱量初始重，具體分組情況見表1。

表1 試驗雞分組處理

1.2.3 人工疾病模型的復制 雞毒支原體人工發病模型參照邵國青等［3］報道的方法。試驗雞于14日齡時各治療組及感染對照組每只雞經左右氣囊注射接種雞毒支原體液體培養物(108～109ccu/mL)，劑量為0.2 mL/100 g體重。健康對照組注射無菌生理鹽水。接種后的試驗雞于80 mg/L氨環境進行應激。

1.2.4 藥物治療 各治療組雞在接種支原體第5 d后(即個別雞出現呼吸癥狀時)，受試藥各劑量組和藥物對照組分別按表1處理方法通過飲水給予相應的藥物治療，連用3 d。健康及感染對照組不給藥，自由飲水。各組試驗期間均自由采食。

1.3 療效評價指標［4-5］

1.3.1 臨床觀察 用藥期間每天觀察各組雞的臨床癥狀，記錄死亡情況。對病死雞進行剖檢并作病原學分離、確診。停藥后繼續觀察14 d。

實驗結束時對各實驗組雞單羽稱末重、記錄每組飼料消耗量，并據此分別計算各組雞平均增重。分別根據下面公式計算相對增重率和飼料利用率。

相對增重率＝(試驗組相對增重/健康對照組相對增重)×100%

飼料利用率(料肉比)＝平均飼料消耗總量(g)/平均增重(g)

1.3.2 死亡率 凡在試驗期間，雞出現典型支原體感染癥狀并死亡的，并通過剖檢氣囊、肺等臟器發現有典型病變，且雞毒支原體分離陽性者，判定為雞毒支原體感染死亡。根據死亡雞數計算死亡率。

1.3.3 氣囊病變損傷計分 試驗結束后各組隨機抽10只雞進行剖檢，觀察氣囊、肺、肝、心等主要臟器器官變化，并對氣囊損傷程度進行分級評分［1，3］。0級:氣囊膜清潔、薄而透明，記0分;1級:氣囊膜輕度渾濁，記2分;2級:氣囊部分區域有灰白色滲出物，氣囊膜中度增厚，記4分;3級:大部分氣囊布滿黃白色干酪樣滲出物，記6分;4級:嚴重的氣囊炎，整個氣囊布滿黃白色干酪樣滲出物，氣囊增厚，記8分。并根據氣囊損傷記分結果計算氣囊損傷減少百分率。

1.4 試驗數據統計分析 用生物統計學方法進行數據的顯著性檢驗，其中死亡率、氣囊損傷減少率用卡方檢驗，增重采用t檢驗。

2 結果與分析

2.1 人工疾病模型 人工接種毒后第5天時，除健康對照組外，各組別均有少數雞出現精神不振，食欲減退;給藥后第2天，各用藥組癥狀均不同程度有所緩解，但在感染對照組中雞的呼吸道癥狀在加劇，少數雞出現持續性啰音，呼吸困難。感染對照組至種毒后第7天時2只雞死亡，剖檢發現呼吸道有較多粘液分泌、氣囊膜增厚、渾濁，內有大量黃白色干酪樣滲出物;肺部有出血點，且伴有較嚴重的心包炎、心包腔積液等病理變化。在對病死雞氣囊分泌物病原學檢測時，可分離出支原體，其生物學特性與MGS6菌株吻合［4］，另外肝臟、肺組織中還分離出了大腸桿菌。這表明雞死亡原因可能因支原體感染加重后導致抵抗力下降進而并發大腸桿菌感染所致。以上結果充分說明此次人工造病成功。

2.2 藥物治療效果 本次試驗選擇死亡率、氣囊病變計分，以及相對增重率等作為主要試驗監測指標。從表2結果來看，所有藥物試驗組和藥品對照組在試驗期內，均未出現死亡，但各試驗組前期卻表現出不同程度的呼吸道癥狀，而感染對照組在試驗第7天，死亡2只，經實驗室進一步病原分離鑒定得出，屬支原體感染后期繼發感染大腸桿菌引起的死亡。表2結果同時顯示，試驗期內盡管受試藥各劑量組和藥品對照組的雞均增重及料肉比情況均好于感染組，但相對增重率統計結果差異不顯著(P＞0.05)。氣囊病變、損傷是支原體感染的典型表觀。本次試驗經抽選各組10只雞剖檢，感染對照組多數雞除氣囊明顯出現渾濁和干酪樣滲出外，還伴有嚴重的“包心”和“包肝”，與受試各藥物組比較，氣囊損傷減少率差異顯著(P＜0.05)，具體試驗結果見表3。

表2 藥物治療后對雞體增重影響

表3 藥物治療后對氣囊損傷的影響

3 討論與小結

單純感染MG的雞，一般僅出現輕微的呼吸道癥狀或隱性感染［2，7］。本次試驗經經氣囊種毒，成功建立了人工感染雞毒支原體的造病模型，為進一步開展受試藥物的療效試驗奠定了良好基礎。受試藥高(1 g/L)、中(0.75 g/L)劑量組和藥品對照組均能有效控制雞毒支原體引起的雞呼吸道感染，減輕氣囊損傷，同時可減輕因感染雞毒支原體引起的增重下降，這與國內宗昕如［8］、高迎春［6］等的報道基本一致。因此，推薦磷酸替米考星可溶性粉用于治療支原體感染引起的雞慢性呼吸道疾病的最佳治療方法為:劑量0.75 g/L，連續飲水給藥3 d。

［1］Frey M L，Hanson R P＆Anderson D P.A medium for the isolation of avian mycoplasmas［J］.Am Vet Res，1968，29:2163-2171.

［2］Lam K M.Resistance of chickens immunized against M.gallisepticum is mediated by bursal dependent lymphoid cells［J］.Vet Microbiology，1984，9:509-514.

［3］邵國青，許偉成，薛家賓，等.雞毒支原體人工發病封閉模型的建立［J］.江蘇農業學報，1998，14(4):228-231.

［4］中華人民共和國農業部公告第1247號.抗菌藥物Ⅱ、Ⅲ期臨床藥效評價試驗指導原則［Z］.

［5］徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理學實驗方法學［M］.第三版.人民衛生出版社:1647-1651.

［6］高迎春，張傳津，陸慶泉，等.替米考星溶液對肉仔雞人工感染雞敗血霉形體所致慢性呼吸道病的療效試驗［J］.家禽科學，2004，20(5):10-13.

［7］劉軼秋，趙 暉，徐 磊，等.替米考星及其他抗菌藥對雞毒支原體的體外聯合抑菌試驗［J］.中國家禽，2012，24(20):30-32

［8］宗昕如，張曉輝，辛凌翔，等.磷酸替米考星可溶性粉對人工感染雞支原體的治療試驗［J］.畜牧與獸醫，2013，12(8):23-24.