圣膚霜中地塞米松穩(wěn)定性的影響因素及處方工藝優(yōu)化

趙維娟，張 梅，王金萍（北京軍區(qū)總醫(yī)院藥理科，北京 100700）

圣膚霜是在傳統(tǒng)驗(yàn)方基礎(chǔ)上研制的醫(yī)院制劑，由連翹、白鮮皮、大黃等多味中藥的含水乙醇提取物和一個(gè)化學(xué)藥品以適量輔料配伍而成的水包油型乳膏劑，外用治療急性和慢性濕疹。院內(nèi)制劑由于保存期限較短，成品質(zhì)量控制大多不進(jìn)行長期考察，隨著現(xiàn)代制劑科學(xué)規(guī)范化的管理，除對(duì)本品中藥的主要活性成分進(jìn)行考察外，地塞米松作為本方的主要成分，也應(yīng)對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定及穩(wěn)定性的考察。本研究發(fā)現(xiàn)，不同批次制備的乳膏含量差異較大；穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)隨時(shí)間延長地塞米松含量有所下降。為了剔除影響因素，采用拆方實(shí)驗(yàn)組合，對(duì)多種因素進(jìn)行快速篩選，該方法簡捷、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

HP-1050型高效液相色譜儀（包括79852型-四元泵、79853型-VWD檢測(cè)器、79855A型自動(dòng)進(jìn)樣器），HP-3395B型化學(xué)工作站（美國惠普公司）；DT-100型分析天平（北京光學(xué)儀器廠）；DHG-9240A型恒溫干燥箱(上海益恒實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；KQ-100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

圣膚霜（由北京軍區(qū)總醫(yī)院制劑室提供，10 g/支，批號(hào)090106、090107、090108）；地塞米松對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)100122-200804）；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純；新鮮重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 分散均勻性考察

多批次制備的乳劑中地塞米松含量差異較大，因此，采用多點(diǎn)取樣方法考察地塞米松在基質(zhì)中的含量均勻性及制備工藝中藥物的溶解狀態(tài)[1]。結(jié)果表明，以適量促滲劑氮酮為溶媒溶解地塞米松可以達(dá)到溶解完全和均勻分散的目的。地塞米松在氮酮中的溶解率大于30%，因此，采用氮酮-地塞米松以10∶1的比例溶解，攪拌下與油相同時(shí)緩緩加入到含有中藥成分的混合溶液中進(jìn)行乳化，經(jīng)放大工藝考察，方法重復(fù)性良好。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 HP-1050色譜儀，ZORBAX SBC18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流速為1.0 mL·min-1；流動(dòng)相為乙腈-水（52∶48），檢測(cè)波長為240 nm；理論塔板數(shù)不低于3000。

2.2.2 溶液制備 （1）對(duì)照品溶液：精密稱取地塞米松對(duì)照品10 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，制成含量為100 μg·mL-1的對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。取該液一定量用甲醇制成16 μg·mL-1溶液，作為對(duì)照品溶液。（2）供試品溶液：精密稱取本品1 g（相當(dāng)于地塞米松0.4 mg），置于具塞燒瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，振搖混合，超聲提取20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，吸取上清液，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。（3）陰性對(duì)照溶液：另取依工藝制備而成的不含地塞米松的空白乳膏1 g，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.3 專屬性實(shí)驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10 μL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，陰性對(duì)照樣品色譜峰中，在地塞米松相應(yīng)保留時(shí)間位置上沒有干擾峰，各樣品中主要成分與其他組分可以達(dá)到基線分離[2]，檢測(cè)方法專屬性好（見圖1）。

圖1 圣膚霜中地塞米松色譜圖A – 對(duì)照品，B – 供試品，C – 陰性對(duì)照；1 – 地塞米松Fig 1 HPLC chromatograms of dexamethasone in Shengfu frostA – reference substance, B – sample, C – negative reference substance;1 – dexamethasone

2.2.4 方法學(xué)考察 地塞米松在5 ～ 80 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y = 1.480 0X+ 17.949，r = 0.999 8。精密度實(shí)驗(yàn)測(cè)得地塞米松峰面積RSD為0.13%；樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，峰面積RSD為1.17%；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)測(cè)得含量為104.21%，RSD為 0.70%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.2.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的圣膚霜乳膏約1.0 g（每克含地塞米松0.409 3 mg），共9份，精密稱定重量，分別加入編號(hào)1 ～ 9的具塞錐形瓶中，分別精密加入地塞米松對(duì)照品0.300 0、0.400 0、0.500 0 mg，按照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制得樣品溶液，進(jìn)樣10 μL，分別測(cè)定含量，平均回收率為100.70%，RSD為1.57%，詳見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果. n = 6Tab 1 Results of recovery experiment. n = 6

2.3 影響因素考察

以正交表L9（34）設(shè)計(jì)拆方組合，60 ℃高溫破壞10 d，考察各組方中地塞米松的穩(wěn)定性，結(jié)果見表2、3。

表2 拆方組合實(shí)驗(yàn)的影響因素Tab 2 Influence factors of the formulation separation and reorganization experiment

結(jié)果顯示，影響乳劑pH值的因素C ＞ D ＞ B ＞ A，堿性強(qiáng)度C1 ＞ C2 ＞ C3；影響地塞米松含量的因素C ＞A ＞ D ＞ B，含量穩(wěn)定性C3 ＞ C2 ＞ C1。即乳劑pH環(huán)境是影響地塞米松穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素，隨著堿性強(qiáng)度的增加地塞米松穩(wěn)定性下降。剔除影響因素C（三乙醇胺），調(diào)整處方制備工藝，改善地塞米松溶解狀態(tài)并對(duì)制劑進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)考察。

表3 拆方組合實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab 3 Results of the formulation separation and reorganization experiment

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取3批制劑（優(yōu)化處方B，批號(hào)090106-B1、090107-B2、090108-B3）在40 ℃條件下加速實(shí)驗(yàn)6個(gè)月，對(duì)比優(yōu)化前后處方中地塞米松的穩(wěn)定性，考察結(jié)果見表4。A方優(yōu)化前pH ＞ 8.7（含三乙醇胺）；B方優(yōu)化后pH = 6.1 ± 0.13，乳化劑為十二烷基硫酸鈉。

表4 加速實(shí)驗(yàn)及處方pH值對(duì)地塞米松含量的影響. n = 3Tab 4 Accelerated stability test and effect of the pH level on content of dexamethasone in the formulation. n = 3

3 討論

3.1 溶媒對(duì)藥物分散均勻性的影響

圣膚霜是由多味中藥的含水乙醇提取物和地塞米松配伍而成的水包油型乳膏劑。研究發(fā)現(xiàn)，地塞米松具有較強(qiáng)親脂性，由于中藥提取液在提取、濃縮過程中對(duì)乙醇含量的影響較大，以此作為主要溶媒是導(dǎo)致批次之間地塞米松分散不均勻的關(guān)鍵因素[3-4]。結(jié)果表明，以適量促滲劑氮酮溶解地塞米松，再依工藝制備成乳膏可達(dá)到均勻分散的效果。

3.2 pH值對(duì)藥物穩(wěn)定性的影響

加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，處方pH ＞ 7.3時(shí)，地塞米松含量顯著下降（P ＜ 0.001）。原處方中三乙醇胺為有機(jī)堿化劑，能與游離脂肪酸形成具有類似清潔劑、乳化劑的優(yōu)良特性，基質(zhì)pH 8.0（為弱堿性基質(zhì)），對(duì)皮膚無刺激，故廣泛用于藥劑、日用化工品的制造。由于地塞米松的穩(wěn)定性受乳膏pH的影響，因此改變?nèi)榛瘲l件，剔除影響因素三乙醇胺，將乳劑pH值調(diào)整在5.5 ～ 6.5之間，可使地塞米松的含量保持穩(wěn)定。

3.3 拆方實(shí)驗(yàn)快速篩查優(yōu)化處方

6個(gè)月的加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本品中地塞米松的含量有下降趨勢(shì)，為了快速剔除影響制劑穩(wěn)定性的因素，對(duì)復(fù)雜成分進(jìn)行拆方組合，采用60 ℃高溫破壞實(shí)驗(yàn)考察10 d，從中藥組份、基質(zhì)組份、穩(wěn)定劑組份等方面進(jìn)行篩查，并結(jié)合乳劑pH對(duì)含量測(cè)定數(shù)據(jù)的影響綜合分析，可以快速優(yōu)化處方。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，考察周期短，與文獻(xiàn)[5-7]方法比較，簡單實(shí)用，適用于處方工藝的快速篩查和優(yōu)化。