FEZ1基因在宮頸鱗癌組織中的表達及其意義

周紅艷 郭艷風

宮頸癌是女性生殖系統第二大常見惡性腫瘤[1]，嚴重威脅著婦女的健康與生命。宮頸癌的發生與發展是一個多階段、多基因變異的結果，癌基因的激活與抑癌基因的失活在這一過程中起了重要作用。FEZ1基因是從8p22上分離而得出的一個抑癌基因，在一些惡性腫瘤中表現為抑制腫瘤發生發展的作用[2]。研究已證實，FEZ1在多種惡性腫瘤組織如乳腺癌、卵巢癌、肺癌等中，FEZ1均存在不同程度的缺失或表達減少，但其在宮頸鱗癌中的作用尚不明確[3-5]。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集2005年6月-2012年6月在本院住院患者的宮頸組織蠟塊共208例，其中宮頸鱗癌102例，CIN66例，正常宮頸組織40例。術前患者均未接受放療及化療。102例宮頸鱗癌患者中，年齡34～65歲，中位年齡43歲，其中浸潤淺層42例，深層60例；按WHO標準分級，高分化32例，中分化44例、低分化26例；按國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）臨床分期（2003）標準進行分期，Ⅰ期56例，Ⅱ期21例，Ⅲ期17例，Ⅳ期8例；伴淋巴結轉移的33例，無淋巴結轉移的69例。CIN66例，其中CINⅠ級12例，CINⅡ級24例，CINⅢ級30例；正常宮頸組織40例（同期住院因子宮良性疾病行子宮全切術，術后病理證實宮頸正常者）。

1.2 主要試劑及試劑盒 FEZ1鼠抗人多克隆抗體購自美國SANTA CRUZ生物公司，工作濃度為1：50；SP免疫組化試劑盒（PV9000）購自于北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 IHC染色 采用免疫組化SP法，步驟如下：石蠟切片經二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水后，PBS清洗，抗原修復，3% H2O2阻斷內源性過氧化物酶，PBS清洗，山羊血清封閉，滴加一抗工作液（1∶50），室溫孵育10 min后置于濕盒內，4 ℃冰箱過夜（12 h），PBS清洗，滴加生物素標記的二抗工作液，PBS沖洗，滴加辣根過氧化物酶標記鏈霉卵白素工作液，PBS沖洗，DAB工作液顯色，蘇木素復染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作陰性對照，結果陰性。

1.4 IHC結果判定 FEZ1蛋白陽性信號為棕黃色顆粒樣物質，主要位于細胞質，少部分位于細胞核；參照有關文獻[6]，在高倍視野下（400×）隨機選取5個視野（每個視野觀察不少于200個細胞），按陽性細胞所占的百分比及著色強度進行結果判定：（1）按著色強度評分：0分為無著色；1分為淺黃色；2分為黃色；3分為棕黃色。（2）按陽性細胞數占同類細胞數的百分比評分：0分為陰性，1分為陽性細胞數≤10%，2分為陽性細胞數11%～50%，3分為陽性細胞數51%～75%，4分為陽性細胞數>75%。取（1）、（2）兩項評分的乘積作為總積分，0～3分為陰性（-），3分以上為陽性（+）。

1.5 統計學處理 采用SPSS 16.0軟件處理所有數據，兩樣本率的比較采用四格表資料的 字2檢驗；多樣本率的比較采用行列表資料的 字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 FEZ1蛋白在宮頸鱗癌、CIN及正常宮頸組織中的表達 FEZ1蛋白陽性表達呈棕黃色顆粒，主要位于細胞質，在宮頸正常黏膜上皮中組織中，FEZ1陽性細胞存在于上皮全層，CIN中則以彌散分布為主，在宮頸鱗癌中常表現為淡染或無著色，見圖1～3。FEZ1蛋白在正常宮頸組織、CIN及宮頸鱗癌組織中的陽性表達率分別為92.5%、68.2%和52.0%（P<0.05），結果見表1。

圖1 FEZ1蛋白在正常宮頸組織中的表達（SP×400）

2.2 宮頸鱗癌組織中FEZ1蛋白的表達與其臨床病理特征的關系 在宮頸鱗癌組織中，FEZ1蛋白的表達隨著癌組織分化程度的降低而顯著降低（P<0.05），而與年齡、浸潤深度、臨床分期、淋巴結轉移無關（P>0.05），結果見表2。

圖2 FEZ1蛋白在CIN中的表達（SP×400）

圖3 FEZ1蛋白在宮頸鱗癌中的表達（SP×400）

表1 FEZ1蛋白在正常宮頸、CIN及宮頸鱗癌組織中的表達

3 討論

抑癌基因功能的缺失在腫瘤的發生與演進過程中起著重要作用。FEZ1基因是從8p22上分離而得出的一個抑癌基因。研究顯示，FEZ1在多種正常組織中普遍表達，而在許多惡性腫瘤組織如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、口腔鱗狀細胞癌等中均存在不同程度的缺失或表達減少[3-5，7]。FEZ1基因可能通過促進凋亡，影響細胞周期，使細胞產生G2/M期阻滯；抑制細胞生長和調節有絲分裂而發揮抑癌作用的[8]。

Vecchione等[9]研究表明，FEZ1蛋白表達缺失或顯著減少的病例在原發性胃癌中占44%（39/88），且與不同的組織類型有顯著相關性，而在研究的8例胃癌細胞系中幾乎均檢測不到FEZ1蛋白的表達；在原發性膀胱移行細胞癌中占62%（37/60）并與腫瘤的病理分級顯著相關。在對肺癌的研究中，FEZ1蛋白表達缺失或顯著減少的病例占68%（70/103）并與腫瘤分級呈正相關[2，10]。王洪興等[11]報道FEZ1蛋白在胃癌組織中的陽性表達率（55.6%）明顯低于正常胃組織（86.1 %），并且其在胃癌組織中的陽性表達率與分化程度密切相關（P<0.05）。以上研究均表明，FEZ1蛋白表達缺失或下降在多種人類腫瘤的發生中起著重要作用。研究還顯示，將FEZ1基因轉染入FEZ1陰性表達的乳腺癌細胞系（MCF7）中，發現轉染入FEZ1基因的實驗組細胞與對照組相比增殖能力明顯下降。動物實驗同樣發現轉染入FEZ1基因的MCF7細胞的腫瘤形成能力也較對照組明顯下降[12]，提示FEZ1的表達在體外可抑制細胞增殖，在體內可抑制腫瘤的形成。本實驗結果顯示，FEZ1蛋白在宮頸正常組織中的陽性表達率顯著高于其在宮頸鱗癌及CIN組織中的陽性表達率（P<0.05），與上述研究結果相似，進一步說明FEZ1是一重要的抑癌基因，其表達缺失或減少與宮頸鱗癌的發生密切相關。

表2 宮頸鱗癌組織中FEZ1蛋白的陽性表達與其臨床病理特征的關系

此外，筆者還研究了FEZ1蛋白的表達與宮頸鱗癌主要臨床病理特征間的關系，結果顯示，在宮頸鱗癌組織中，FEZ1蛋白的表達隨著癌組織分化程度的降低而顯著降低（P<0.05），而與患者年齡、癌組織的浸潤深度、淋巴結轉移及臨床分期無關（P>0.05），這一結果說明FEZ1表達缺失或下降可能與宮頸鱗癌的發生、發展密切相關。Vecchione等[10]研究FEZ1在膀胱癌中的表達時發現，與正常移行上皮比較，60%的原發膀胱癌的FEZ1蛋白表達減少或缺失，并且與腫瘤的分期之間存在顯著相關性。Nigg[13]在對11例腎集合管癌的研究中發現有7例（64%）存在FEZ1蛋白的表達減少或缺失，并且與淋巴結轉移密切相關。原志慶等[14]研究FEZ1基因在甲狀腺乳頭狀癌中的表達也發現類似的結果，FEZ1蛋白在甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺腺瘤中的陽性表達率明顯低于正常甲狀腺組織，并且其在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性表達率與臨床分期和淋巴結轉移相關（P<0.05）。

綜上所述，在宮頸鱗癌中，FEZ1基因表達缺失或下調，且其陽性表達與宮頸鱗癌的組織學分級有關，提示FEZ1基因不僅與宮頸癌的發生與演進有關，而且可能成為宮頸癌一個新的治療靶點，但FEZ1基因的表達缺失或下調的原因及機制還需要進一步去研究和探討，這對于完善宮頸癌的發生機制并作為腫瘤診斷和指導個性化治療的分子靶點具有重要意義。

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