中國(guó)北方阿爾茨海默病患者載脂蛋白E基因分布特征

王景濤 李 凌 袁 晶

1）鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 鄭州 450052 2）北京協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)科 北京 100730

目前發(fā)現(xiàn)的AD候選基因很多，已經(jīng)公認(rèn)ApoE基因是唯一與AD關(guān)系較肯定的基因，其余尚存在較大爭(zhēng)議。國(guó)內(nèi)研究結(jié)果顯示［1］，ApoEε4在AD患者中出現(xiàn)的頻率為20%～29%，在正常對(duì)照中為2%～9.5%，但在中國(guó)人ApoEε4等位基因頻率明顯低于白種人中的頻率［2］。

目前國(guó)內(nèi)的研究納入的樣本量普遍較小，需要較大樣本量的研究明確我國(guó)AD患者ApoE基因分布特征。本研究通過(guò)對(duì)495例中國(guó)北方漢族阿爾茨海默病患者群進(jìn)行研究，以了解我國(guó)AD患者ApoE基因分布特征。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 樣本來(lái)源 病例組樣本來(lái)自1999—2010-04北京協(xié)和醫(yī)院認(rèn)知障礙門診連續(xù)就診的AD患者，知情同意抽血行ApoE基因型測(cè)定。AD患者符合NINCDS-ADRDA制定的很可能及確診的AD診斷標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)［3］和（或）2007年修訂的NINCDS-ADRDA診斷及排除標(biāo)準(zhǔn)［4］。所有研究對(duì)象在認(rèn)知障礙門診須完成詳細(xì)的臨床資料評(píng)估和認(rèn)知功能測(cè)評(píng)，完成頭顱CT或頭顱海馬像檢查，對(duì)于診斷困難的患者，進(jìn)一步行腰穿和頭顱FDG-PET-CT檢查，完成腦脊液β淀粉樣蛋白和Tau蛋白的檢查。認(rèn)知功能測(cè)試量表包括簡(jiǎn)易精神狀態(tài)評(píng)分（MMSE）、物體記憶測(cè)驗(yàn)（FOM）、語(yǔ)言流暢性測(cè)驗(yàn)（RVR）、WISC積木測(cè)驗(yàn)、WAIS數(shù)字廣度測(cè)驗(yàn)、Hachinski缺血量表（Hachinski ischemic score，HIS）評(píng)分、漢密爾頓抑郁量表評(píng)分、日常生活能力量表（ADL）等。

1.2 DNA提取 抽取研究對(duì)象晨空腹血4～5mL，加入EDTA抗凝管內(nèi)，應(yīng)用飽和鹽沉淀-氯仿抽提法提取DNA。并應(yīng)用分光光度計(jì)測(cè)定DNA濃度。

1.3 ApoE基因型測(cè)定 應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析法［5］測(cè)定ApoE基因型。本課題所用試劑和儀器的廠家、測(cè)定詳細(xì)步驟和ApoE的電泳圖見(jiàn)課題組相關(guān)論文［6］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 等位基因頻率和基因型頻率采用基因計(jì)數(shù)法，應(yīng)用擬合優(yōu)度χ2檢驗(yàn)探討ApoE基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡。

2 結(jié)果

2.1 研究對(duì)象的一般情況 本研究共入組AD患者495例，其中男219例（44.19%），平均年齡（73.30±7.54）歲；EOAD平均發(fā)病年齡（57.8±5.3）歲，LOAD平均發(fā)病年齡（74.2±6.2）歲；受教育程度：＜7a168例（34.02%），7～12 a135例（27.18%），≥13a192例（38.80%）；有癡呆家族史110例（22.22%）。

2.2 不同癡呆組和對(duì)照組ApoE基因型Hardy-Weinberg平衡 擬合優(yōu)度χ2檢驗(yàn)結(jié)果顯示，AD組ApoE基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。

2.3 AD患者ApoE等位基因和基因型分布 EOAD與LOAD比較：無(wú)論是3個(gè)等位基因，還是5個(gè)基因型，2組均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。有癡呆家族史患者和無(wú)癡呆家族史患者比較，有癡呆家族史患者僅含1個(gè)ε2等位基因，ε2等位基因頻率和ε2／4基因型頻率顯著低于無(wú)癡呆家族史患者（P＜0.0001）；而ε3和ε4等位基因頻率和ε3／3、ε3／4、ε4／4基因型頻率均無(wú)顯著差異（均為P＞0.05）。男性患者和女性患者比較：男女患者3種等位基因頻率無(wú)顯著差異（均P＞0.05），男性ε3／3頻率顯著高于女性（χ2＝7.233，P＝0.007）；女性ε3／4頻率顯著高于男性（χ2＝7.950，P＝0.005）；其余基因型均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 不同AD患者ApoE等位基因和基因型分布 ［n（%）］

3 討論

在AD易感基因的研究方面，科學(xué)家們關(guān)注的最多是ApoE。ε4被認(rèn)為是AD的危險(xiǎn)因素，可影響家族性AD發(fā)病的時(shí)間，也是散發(fā)型AD最主要的致病因素［7］。在Meta分析中，ε4的純合子與ε3的純合子優(yōu)勢(shì)比（OR）值在各個(gè)人種均＞10。Corder等發(fā)現(xiàn)1個(gè)APOEε4拷貝就可以把阿爾茨海默病的發(fā)病時(shí)間提前7～9a。與ε4的作用相反，ε2可減少阿爾茨海默病的發(fā)生［8］。

本研究結(jié)果顯示，我國(guó)北方漢族AD患者ε2、ε3、ε4等位基因頻率分別為4.85%、70.51%、24.64%；基因型頻率分別為ε2／3（5.86%）、ε2／4（3.84%）、ε3／3（50.50%）、ε3／4（34.14%）、ε4／4（5.66%）。為了明確我國(guó)漢族人群AD患者ApoE基因的分布與國(guó)外人群的差異，將本研究與各洲不同國(guó)家的研究結(jié)果進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，挪威、英國(guó)、智利等國(guó)AD患者ε3頻率（分別為53.1%，57.5%和52.0%）較本研究低［9-11］，而ε4頻率較本研究高（分別為39.6%、39.1%和40.0%）；而日本和伊朗AD患者的ε3頻率（分別為67.0%、78.1%）和ε4頻率（分別為31.0%、21.0%）與本研究比較無(wú)顯著差異［12-13］。以上結(jié)果提示我國(guó)AD患者ApoE基因分布與亞洲國(guó)家相似，與歐美國(guó)家有較大差別。

對(duì)AD患者的進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，EOAD和LOAD無(wú)論是3個(gè)等位基因的分布還是5種基因型的分布均無(wú)顯著性差異；在110例具有癡呆家族史AD患者中僅1例攜帶ε2等位基因，ε2等位基因頻率和ε2／4基因型頻率顯著降低；而ε3和ε4等位基因頻率和ε3／3、ε3／4、ε4／4基因型頻率均無(wú)顯著差異。研究［14］顯示，具有癡呆家族史的人群中ε4攜帶者的比例較無(wú)癡呆家族史者高，而ε2攜帶者的比例則較無(wú)癡呆家族史者低。在具有癡呆家族史人群中，只有ε4攜帶者的AD風(fēng)險(xiǎn)才明顯增高。這提示癡呆家族史和ε4等位基因在AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)中的協(xié)同作用。本研究?jī)H觀察到該人群ε2頻率和ε2（＋）基因型頻率的降低，并未觀察到ε4頻率和ε4（＋）基因型頻率的增高，可能與種族不同有關(guān)。

根據(jù)性別分層后發(fā)現(xiàn)，男女患者3種等位基因頻率無(wú)顯著差異；男性ε3／3頻率顯著高于女性（57.21%vs 45.05%），而女性ε3／4頻率則顯著高于男性（39.56%vs 27.48%，）；其余基因型均無(wú)顯著性差異。已經(jīng)有研究發(fā)，現(xiàn)AD患者不同性別之間ApoE分布的不同。在美國(guó)高加索AD患者中，女性ε3／4頻率為64%，而男性則為44%，存在較大差異，ε4＋／-型女性患AD的風(fēng)險(xiǎn)（OR＝3.71，95%CI 1.74～7.9）顯著高于男性（OR＝1.36，95%CI 0.54～3.46）［15］。另一項(xiàng)針對(duì)高加索人群AD患者的研究和對(duì)日本AD患者的研究均發(fā)現(xiàn)了類似結(jié)果［16］。

由此可見(jiàn)，我國(guó)AD患者ApoE基因分布與亞洲國(guó)家類似，而與歐美國(guó)家有較大差別，這可能與人種不同有關(guān)。我國(guó)ApoE基因頻率在不同性別和不同癡呆家族史患者之間存在差異，可能導(dǎo)致不同性別和有無(wú)癡呆家族史之間AD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的差別。

［1］吳亞寧，張俊武，張振馨.中國(guó)人群中載脂蛋白E等位基因型與阿爾茨海默病的相關(guān)性分析［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，23（5）：450-454.

［2］Saunders AM，Hulette O，Welsh-Bohmer KA，et al.Specificity，sensitivity，and predictive value of apolipoprotein-E genotyping for sporadic Alzheimer＇s disease［J］.Lancet，1996.348（9020）：90-93.

［3］McKhann G，Drachman D，F(xiàn)olstein M，et al.Clinical diagnosis of Alzheimer＇s disease：report of the NINCDS-ADRDA Work Group under the auspices of Department of Health and Human Services Task Force on Alzheimer＇s Disease［J］.Neurol，1984，34（7）：939-944

［4］Dubois B，F(xiàn)eldman HH，Jacova C，et al.Research criteria for the diagnosis of Alzheimer＇s disease：revising the NINCDSADRDA criteria［J］.Lancet Neurol，2007，6（8）：734-746.

［5］Hixson JE，Vernier DT.Restriction isotyping of human apolipoprotein E by gene amplification and cleavage with HhaI［J］.J Lipid Res，1990，31（3）：545-548.

［6］郭峰，張振馨，許群，等.載脂蛋白Eε2和ε4等位基因與胎兒宮內(nèi)發(fā)育的關(guān)系［J］.中華神經(jīng)科雜志，2008，41（12）：835-839.

［7］Munoz DG，F(xiàn)eldman H.Causes of Alzheimer＇s disease［J］.CMAJ，2000，162（1）：65-72.

［8］Corder EH，Saunders AM，Strittmatter WJ，et al.Gene dose of apolipoprotein E type 4allele and the risk of Alzheimer＇s disease in late onset families［J］.Science，1993，261（5123）：921-923.

［9］Davidson Y，Gibbons L，Pritchard A，et al.Apolipoprotein E epsilon4allele frequency and age at onset of Alzheimer＇s disease［J］.Dement Geriatr Cogn Disord，2007，23（1）：60-66.

［10］Quiroga P，Calvo C，Albala C，et al.Apolipoprotein E polymorphism in elderly Chilean people with Alzheimer＇s disease［J］.Neuroepidemiology，1999，18（1）：48-52.

［11］Henderson AS，Easteal S，Jorm AF，et al.Apolipoprotein E allele epsilon 4，dementia，and cognitive decline in a population sample［J］.Lancet，1995，346（8987）：1 387-1390.

［12］Nunomura A，Chiba S，Eto M，et al.Apolipoprotein E polymorphism and susceptibility to early-and late-onset sporadic Alzheimer＇s disease in Hokkaido，the northern part of Japan［J］.Neurosci Lett，1996，206（1）：17-20.

［13］Raygani AV，Zahrai M，Raygani AV，et al.Association between apolipoprotein E polymorphism and Alzheimer disease in Tehran，Iran［J］.Neurosci Lett，2005，375（1）：1-6.

［14］Huang W，Qiu C，von Strauss E，et al.APOE genotype，family history of dementia，and Alzheimer disease risk：a 6-year follow-up study［J］.Arch Neurol，2004，61（12）：1 930-1 934.

［15］Payami H，Zareparsi S，Montee KR，et al.Gender difference in apolipoprotein E-associated risk for familial Alzheimer disease：apossible clue to the higher incidence of Alzheimer disease in women［J］.Am J Hum Genet，1996，58（4）：803-811.

［16］Poirier J，Davignon J，Bouthillier D，et al.Apolipoprotein E polymorphism and Alzheimer＇s disease［J］.Lancet，1993，342（8873）：697-699.