異丙酚及依托咪酯對兔外周血中PLA2活性影響的研究

楊遠東，蔡 惠，張靈敏，袁 慧，袁 偉，劉 琳(西安交通大學醫學院第一附屬醫院麻醉科，西安 710061;通訊作者，E-mail:yyd519@163.com)

磷脂酶A2(PLA2)是一種脂質代謝酶，參與多種前炎癥因子的合成代謝，其主要由激活的炎性細胞分泌釋放，在炎癥反應中活性明顯增高，并參與到多種疾病的發生、發展，如惡性腫瘤等。目前的研究顯示，多種麻醉藥物能影響到機體的免疫、炎癥反應，調節不同炎癥因子的活化或釋放，其中，異丙酚及依托咪酯由于是臨床最常用的靜脈麻醉藥物，往往受到更多的關注。這兩種麻藥均具有起效快、作用時間短、恢復迅速而平穩，對呼吸循環影響輕微的特點［1］。但研究發現，這兩種靜脈麻醉藥物在用于臨床麻醉誘導及維持時表現出不同的免疫、炎癥調節作用［2］。當機體發生損傷或炎癥時，異丙酚能通過抑制中性粒等細胞的功能顯著降低IL-1、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α 等炎癥因子的釋放，而大多研究認為依托咪酯抑制炎癥反應的能力較異丙酚低，但該結論仍存在一定的爭議［3］。而對于其能否影響PLA2的活性尚無相關研究，同時，關于這兩種麻醉藥物對正常機體中炎癥因子的作用也無類似報道。

為此，本研究擬通過檢測異丙酚及依托咪酯作用于實驗兔后血清中的PLA2活性及其他炎癥因子濃度的變化，研究各炎癥因子之間的相關性，以期發現這兩種麻醉藥物對正常動物體內PLA2等炎癥因子的不同影響，為研究其影響機制提供前期基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

新西蘭大白兔24只，雌雄不拘，體重大于2 kg，由西安交通大學實驗動物中心提供，常規混合飼料喂養。隨機分為3組，每組8只:對照組(C組)、異丙酚組(P組)和依托咪酯組(E組)。

1.2 實驗方法

固定動物后，由耳緣靜脈分別注入誘導劑量的異丙酚(2 mg/kg，P 組)或依托咪酯(0.3 mg/kg，E組)后，異丙酚4 mg/(kg·h)或依托咪酯 0.6 mg/(kg·h)維持泵入2 h。對照組動物由等量生理鹽水替代藥物。所有實驗動物分別于藥物干預前(T0)、麻藥誘導后10 min(T1)、維持劑量后60 min(T2)、120 min(T3)及停止用藥后60 min(T4)、120 min(T5)時采集靜脈血，2 000 r/min離心10 min后，取上清液，液氮保存。

1.3 指標檢測

血清磷脂酶A2活性定量測定參照Cai等［4］描述的熒光底物激發方法，血清白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)及C反應蛋白(CRP)濃度采用ELISA法測定(ELISA試劑盒均購于美國R＆D公司)。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 一般資料的比較

選用的24只新西蘭大白兔，雄性為14只，雌性10只，平均年齡(10 ±1.4)月，體重為(4.2 ±0.7)kg，三組動物性別、年齡、體重比較差異無統計學意義(P ＞0.05)。

2.2 血清PLA2活性的比較

麻醉藥物干預前(T0)，實驗兔血清PLA2平均活性值分別為 C組(476±99.2)intensity/(min·μl)、P 組(408 ± 95.4)intensity/(min·μl)、E 組(435±92.5)intensity/(min·μl)，三組 PLA2活性差異無統計學意義(P=0.425)，基線水平一致。當給予實驗干預后，三組動物血清PLA2活性在T1時均表現出不同程度的輕微升高，但與T0時刻相比，該活性變化無統計學意義(P＞0.05)，且組間相比也無統計學差異(P=0.320)。隨著給藥的持續，PLA2活性在三組動物中呈現出不同的變化趨勢(圖1):在C組中，T2、T3的血清PLA2活性未發生顯著性變化，停藥后兩個時間點測得的活性值也與基線值相似(P＞0.05);在P組中，隨著藥物的持續泵入，PLA2的活性呈下降趨勢，且T3時的活性明顯低于基線值(299 ±67.0 vs 408 ±95.4，P=0.025);與之相反的是，E組中PLA2活性在給藥后表現為持續的升高，并在 T2、T3時分別達到(596 ±63.7)intensity/(min·μl)及(699 ±77.5)intensity/(min·μl)，與T0相比具有統計學差異(P值分別為 0.047、0.022)。此外，停藥60 min(T4)及120 min(T5)后，這兩組實驗動物血清PLA2的活性迅速向基線值靠近，與T0值相比均無統計學差異(P＞0.05)。

圖1 三組兔血清PLA2活性變化趨勢比較Figure 1 Changes of activation of serum PLA2 in rabbits at different time after different treatments

2.3 血清其他炎癥因子濃度變化的比較

三組實驗兔血清中炎癥因子 IL-6、TNF-α及CRP的濃度變化見表1。不同組別中，這三種炎癥因子的濃度在T0時均表現出很高的一致性。當給予異丙酚后，血清中IL-6及TNF-α的濃度未出現明顯變化，而CRP的濃度呈下降趨勢。在依托咪酯組，三種炎癥因子的濃度在給藥后(T2、T3)均出現明顯升高(P＜0.05)，且在停藥后又恢復至基線濃度。

表1 三組兔血清炎癥因子濃度對比分析 (pg/ml)Table 1 Com parison of expression of inflammatory cytokines at different time between three groups (pg/ml)

2.4 血清PLA2與其他炎癥因子的相關性分析

對所有實驗動物四種炎癥因子進行相關性分析顯示，PLA2的活性變化與CRP的濃度呈明顯正相關(r=0.686，P=0.014)，而與 IL-6 及 TNF-α 的表達無關;同時，血清IL-6濃度與TNF-α濃度的變化具有較強的相關性(r=0.876，P ＜0.001)。

表2 血清炎癥因子表達變化的相關性分析Table 2 Correlation analysis of expression of seruminflammatory cytokines

3 討論

異丙酚是臨床上最常使用的靜脈全麻藥物之一，近年來大量的研究報道了其對患者免疫炎癥功能的影響。證據顯示，在機體發生炎癥反應或器官損傷時，異丙酚能抑制中性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞的功能，抑制 COX2和 PGE2合成，從而減少IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 等炎癥因子的釋放，具有一定的炎癥抑制及器官功能保護作用［5-7］。如趙文暉等［8］對大鼠心肌缺血再灌注損傷的研究中發現，異丙酚能抑制 TNF-α的表達，保護心肌受損。此外，對于細菌感染、肺損傷及其他器官缺血再灌注損傷等引起的炎癥反應，異丙酚也具有一定的抑制保護作用［9-13］。但在正常情況下，異丙酚對機體炎癥相關因子的影響尚無相關報道。因此，在本研究中我們利用家兔作為研究模型，檢測異丙酚對正常動物血清中炎癥因子的影響，結果顯示，異丙酚未能引起正常動物血清中IL-6及TNF-α濃度的變化，但卻能降低血清中PLA2的活性及C-反應蛋白(C-reaction protein，CRP)的濃度，這表明異丙酚對各種炎癥因子的作用存在不同的調控機制，該機制有待進一步的研究。

PLA2是一種脂質代謝酶，參與花生四烯酸、前列腺素、血小板活化因子及溶血磷脂酸的合成代謝。研究顯示，其主要由激活的單核細胞、巨噬細胞及中性粒細胞分泌釋放，在炎癥反應中活性明顯增高，是一種重要的炎癥標志物［14，15］。考慮到異丙酚能抑制中性粒細胞的活性，因此，異丙酚也能降低PLA2的活性。事實上，吳新軍等［16］的研究發現，在大鼠小腸缺血再灌注引起肺損傷時，臨床劑量異丙酚可明顯降低肺組織內PLA2活性增高，產生肺保護作用。在本研究中，我們同樣觀察到異丙酚能顯著降低正常動物血清中PLA2的活性，其機制可能與異丙酚能降低細胞內鈣離子濃度［16］，抑制活性氧代謝產物［16］，從而抑制PLA2激活有關。此外，我們還發現PLA2的活性變化與CRP的濃度變化存在相關性，這與于路等在冠心病患者中的發現一致［17］，提示PLA2的活化與CRP的分泌可能存在相同的上游信號通路。

與異丙酚相比，依托咪酯抑制炎癥反應的能力較低，但該結論仍存在爭議。如Ke等［18］認為異丙酚和依托咪酯在誘導劑量范圍內對重型創傷患者免疫功能的影響無明顯差異。在本實驗中，依托咪酯促進正常機體中炎癥因子的釋放，表明其可能具有炎癥細胞激活作用，該現象未見于其他研究報道，其原因可能與依托咪酯引起的暫時性腎上腺皮質功能低下有關［19］，但具體機制有待進一步研究。

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