硫氰酸紅霉素溶劑殘留分析方法的探索

李 萍，張黎明

（天津科技大學生物工程學院，天津 300457）

近年來，紅霉素衍生物的開發和應用研究較為活躍[1,2]，其中衍生物之一硫氰酸紅霉素，已被我國歸類到了獸用藥品中。硫氰酸紅霉素為紅霉素硫氰酸鹽，為最新一代動物專用大環內酯類抗生素，主要用于革蘭氏陽性菌和支原體感染，更多用于合成紅霉素、羅紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素等大環內酯類抗生素[3]。《中國獸藥典》（2010 年版）對有機溶劑殘留做了限度規定[4]。但是關于對硫氰酸紅霉素溶劑殘留分析方法的研究，國內未見報道。本次研究旨在探討一種適用于硫氰酸紅霉素溶劑殘留中丙酮的測定方法，對進一步提高產品質量控制具有重要的理論和實踐指導作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫7820A 型氣相色譜儀，丙酮、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純，硫氰酸紅霉素樣品（樣品1、2、3）。

1.2 分析方法的色譜條件

色譜柱：PEG-20M Agilent 毛細管柱（1.0 μm，0.53 mm×30 m），載氣：氮氣，檢測器：氫火焰離子檢測器；汽化室溫度：200 ℃，色譜柱溫度：80 ℃，檢測器溫度：250 ℃，柱流量：1.0 mL/min，頂空進樣。

1.3 試驗溶液的制備

1.3.1 對照品溶液 取丙酮約5 000 μg ，置100 mL容量瓶中，加DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻，轉入頂空瓶中作為對照品溶液。

1.3.2 空白溶液 DMF。

1.3.3 供試品溶液 精密稱取硫氰酸紅霉素樣品1 批約0.05 g，置100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋定容至刻度，混勻，轉入頂空瓶中作為供試品溶液。

1.3.4 準確度實驗溶液的制備 精密稱取硫氰酸紅霉素樣品1 批約0.05 g，共計9 份。分別置于100 mL 容量瓶中，分別加入含丙酮50 μg、100 μg、150 μg 的水溶液，加入DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻，制備成溶液濃度為50 %、100 %、150 %的溶液各3 份。

1.3.5 線性實驗溶液的制備 取丙酮約6 000 μg，置100 mL 容量瓶中，加DMF 溶解并定容稀釋至刻度。分別吸取4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、7.0 mL、8.0 mL、9.0 mL、10.0 mL 于10 mL 容量瓶中，加DMF 溶解并定容稀釋至刻度。轉入頂空瓶中作為線性溶液，配制濃度分別是24.0 μg/mL、30.0 μg/mL、36.0 μg/mL、42.0 μg/mL、48.0 μg/mL、54.0 μg/mL、60.0 μg/mL，相當于檢測樣品含量的48 %、60 %、72 %、84 %、96 %、108 %、120 %。1.3.6 檢測限、定量限溶液的制備 吸取1.3.1 項下溶液1 mL 至10 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋定容至刻度，混勻，作為溶液1#，即稀釋為10-1，依次稀釋至10-n，（依次編號為2#、3#、4#…n）轉入頂空瓶中備用。

1.4 評價標準

系統適用性參數結果及其它實驗結果數據的評價參考《中國獸藥典》[4]的要求。

2 方法與結果

2.1 系統適用性試驗

取對照品溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時間的3 倍。重復進樣5次。所得圖譜中丙酮峰面積RSD 為1.0 %，理論塔板數（N）為86 416，拖尾因子（T）為1.0，分離度（R）為1.6。

2.2 專屬性實驗

取對照品溶液、空白溶液、供試品溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時間的3 倍。空白溶液對對照品溶液和供試品溶液無干擾，主成分與相鄰物質能完全分離，分離度為1.6。

2.3 精密度實驗

取供試品溶液6 份，并依次編號。取上述6 份溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時間的3 倍，重復進樣6 次，其丙酮含量的RSD 為2.3 %。

2.4 準確度實驗

取準確度實驗溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時間的3 倍，測定丙酮的色譜峰面積。丙酮的平均回收率為99.7 %，RSD為1.2 %。

2.5 線性關系實驗

取線性實驗溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時間的3 倍。以峰面積Y 對濃度X（μg/mL）進行線性回歸，得到線性方程Y=0.1065X+1.7536，R2=0.999 0（見圖1）。

圖1 線性實驗回歸曲線

2.6 檢測限、定量限實驗

將空白溶液和檢測限、定量限檢測溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時間的3 倍。計算對照品溶液中主峰信號響應值與空白響應值的比值。信噪比為3：1 時的對照品溶液濃度即為檢測限，信噪比為10：1時的對照品溶液濃度即為定量限。結果最低檢測限為4.0 μg/L，最低定量限為8.0 μg/L。

2.7 樣品檢測

稱取硫氰酸紅霉素樣品0.05 g，加入DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液頂空平衡30 min后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時間的3 倍，測定丙酮的色譜峰面積。另取丙酮對照品0.25 g，加入DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻。稀釋后加DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻，同法測定。按外標法以峰面積計算（見表1）。

表1 樣品丙酮殘留測定結果

3 討論

藥物中的溶劑殘留[4]系指在原料藥或輔料的生產中，以及在制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機溶劑。殘留溶劑不但沒有療效，而且具有毒性和致癌作用，已逐漸引起國際醫藥界和管理部門的重視。本研究建立的氣相色譜法首次全面、準確的對其中最主要的丙酮殘留溶劑分析方法進行了報道。

該法操作簡便、快速，最低檢測限和定量限較低，分別為4.0 μg/mL 和8.0 μg/mL，可以滿足獸藥溶劑殘留檢測的要求；測定結果的重復性好，樣品測定RSD＜10.0 %的要求；同時樣品加標回收率在90.0 %～110.0 %范圍之內，具有較高的準確度；專屬性強，分離度符合＞1.5 的要求；線性結果表明丙酮濃度在24～60 μg/mL的線性范圍內，其線性關系良好；對其不同批號樣品的殘留進行測定，結果均小于0.50 %的限度，從而證明了該分析方法適合于對硫氰酸紅霉素的殘留檢測。

［1］ 陳悅.反相HPLC 分析硫氰酸紅霉素的相關物質及主組分含量［J］.中國藥學雜志，2007，42（23）：1822-1826.

［2］ 魏琦，李欣.反相高效液相色譜法測定硫氰酸紅霉素組分［J］.基層醫學論壇，2009，（28）：920-921.

［3］ 徐錚奎.硫氰酸紅霉素如日中天［N］.醫藥經濟報，2008.

［4］ Ch.P（2010）Vol Ⅱ（中國獸藥典2010 年版，二部）［S］.2010：81-86.