應(yīng)用木腐菌處理松材線蟲(chóng)病疫木伐樁的研究

鄧習(xí)金 劉 暉 羅惠文 黃燕洪

（1.贛州市森林防火指揮部辦公室，江西 贛州341000；2.贛州市峰山森林公園管理處，江西 贛州341000；

3.贛州市林業(yè)有害生物防治檢疫局，江西 贛州341000）

松材線蟲(chóng)病病死樹(shù)的疫木伐樁中含有松材線蟲(chóng)（Bursaphelenchus xylophilus(Steinerffamp;Buhrer)Nickle）（pine wilt nematode,PWN)和松褐天牛幼蟲(chóng)，也是松材線蟲(chóng)病重要侵染源之一[1]。然而，目前生產(chǎn)上大多關(guān)注的是病木的處理，即在發(fā)病當(dāng)年的秋冬季清理病木,集中進(jìn)行藥劑熏蒸等處理，以消滅病木中的松褐天牛幼蟲(chóng)和減少疫木中所含松材線蟲(chóng)數(shù)量，而往往忽視了對(duì)伐樁的除害處理[2]。要保證松材線蟲(chóng)病除治質(zhì)量就必須對(duì)伐樁進(jìn)行有效的除害[3-4]。但伐樁是松材線蟲(chóng)病除治中的難點(diǎn)，目前松材線蟲(chóng)病疫木伐樁的除害處理技術(shù)措施主要有：利用生防真菌（包括木腐菌）的生物防治措施，直接挖樹(shù)樁燒毀、剝皮挖蟲(chóng)和覆土處理等物理機(jī)械措施，以及藥物熏蒸、藥物灌注和生石灰處理等化學(xué)措施[2]。

木材腐朽就是木材細(xì)胞壁被真菌分解時(shí)所引起的木材糟爛和解體的現(xiàn)象，能分解木材細(xì)胞壁的真菌為木材腐朽菌，簡(jiǎn)稱木腐菌[5]。應(yīng)用在疫木伐樁上的產(chǎn)毒真菌多為木腐菌，利用木腐菌對(duì)松材線蟲(chóng)的抑殺作用及對(duì)木材的分解、腐爛作用，在疫木早期被伐倒后，其它腐生菌尚未大量在伐樁上定殖時(shí),人工接種木腐菌使其在伐樁上定殖生長(zhǎng)，解決即消滅疫木伐樁上的松材線蟲(chóng)問(wèn)題[6]。利用木腐菌、食用真菌接種處理松材線蟲(chóng)病疫木伐樁是一項(xiàng)環(huán)保、有效的伐樁處理技術(shù)[7]。將松材線蟲(chóng)病疫木伐樁作為木腐菌、食用真菌的栽培材料,能夠給疫區(qū)帶來(lái)良好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益[8]，這一處理技術(shù)值得在松材線蟲(chóng)病疫區(qū)推廣應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概況

峰山國(guó)家森林公園在原省級(jí)森林公園的基礎(chǔ)上擴(kuò)建，位于贛州中心城區(qū)的東南角。公園總面積20735.2公頃，其中林業(yè)用地面積17323.7公頃。馬尾松是森林公園的主要植物。森林公園的馬尾松大部分是1986～1990年飛播造林后經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的封山育林形成的，以馬尾松純林為主，面積約3333.3公頃，主要位于龍村村、流坑村、南田村、火燃村、東風(fēng)村、雙橋村等。近幾年，該區(qū)域馬尾松林陸續(xù)受到松材線蟲(chóng)病入侵和危害。

1.2 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)菌種：從野外分離培養(yǎng)并保存于本實(shí)驗(yàn)室的菌種見(jiàn)表1.斜面菌種在4℃冰箱中保藏。

松材線蟲(chóng)：從上述試驗(yàn)地的疫木中分離得到，并接種在長(zhǎng)滿盤(pán)多毛孢(Pestalotias sp.)的玉米粒培養(yǎng)基上，于25℃條件下培養(yǎng)12 d后獲得大量松材線蟲(chóng)，放置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 木腐菌的篩選

將以上保存的真菌在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的木腐菌菌種，切取直徑為5 mm的同質(zhì)等量菌絲塊(帶有瓊脂培養(yǎng)基)，分別接入到PDA平板培養(yǎng)基的中間部位。接種后的培養(yǎng)基置于25℃溫箱中培養(yǎng)12 d，使菌種長(zhǎng)滿或基本長(zhǎng)滿平板。

將松材線蟲(chóng)接入上述菌株的木腐菌菌落上，每皿接種1 000條，每菌株接種3皿，置于恒溫培養(yǎng)箱中，25℃培養(yǎng)12d，以貝爾曼漏斗法對(duì)線蟲(chóng)進(jìn)行分離并計(jì)數(shù)。

1.3.2 優(yōu)良菌株的擴(kuò)大培養(yǎng)

將上述篩選出的優(yōu)良菌株置于液體培養(yǎng)基（成分為：玉米粉3g，蛋白胨1.5g，MgSO4·7H2O 0.05g，KH2PO40.1g，水100mL)內(nèi)恒溫27℃振蕩培養(yǎng)7d。

1.3.3 伐樁接種木腐菌

選擇晴天午后或陰天進(jìn)行接種，根據(jù)各個(gè)木腐菌的栽培特點(diǎn)在伐樁上進(jìn)行接種，接種時(shí)將事先準(zhǔn)備好的接種材料涂抹在伐樁表面，然后蓋上透氣薄膜以利保濕，一袋接種材料接種4～5個(gè)伐樁。每株木腐菌接種處理25個(gè)伐樁。接菌處理時(shí)間為70d。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行方差分析、新復(fù)極差法差異顯著性檢驗(yàn)及多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 木腐菌對(duì)松材線蟲(chóng)的抑制作用

將松材線蟲(chóng)接入13種木腐菌菌落上培養(yǎng)10d后分離的松材線蟲(chóng)數(shù)量見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，從虎掌菌、松生擬層孔菌、粗皮側(cè)耳、硫磺菌、茯苓和靈芝等菌落上完全沒(méi)有分離到松材線蟲(chóng)，說(shuō)明這6個(gè)菌的菌落完全抑制了松材線蟲(chóng)的數(shù)量增加；從繡球菌、黑木耳、潔麗香菇、樺褶孔菌和密粘褶菌等菌落上只分離到少量的松材線蟲(chóng)，說(shuō)明這5個(gè)菌對(duì)松材線蟲(chóng)的數(shù)量增加也有明顯抑制作用；裂褶菌和雜色云芝的菌落上分離到大量的松材線蟲(chóng)，而且其數(shù)量與其他各處理分離的松材線蟲(chóng)數(shù)量存在明顯差異（P≤0.05），說(shuō)明這2種菌對(duì)松材線蟲(chóng)的生長(zhǎng)與繁殖沒(méi)有抑制作用。

表1 松材線蟲(chóng)在木腐菌菌落上培養(yǎng)10d的數(shù)量Tab.1 Number of B.xylophilus on wood decaying fungiin 10d

2.2.1 對(duì)伐樁樣品重量的影響

野外試驗(yàn)所選的木腐菌為虎掌菌、松生擬層孔菌、粗皮側(cè)耳、硫磺菌和茯苓，接菌處理70d后93個(gè)接菌伐樁樣品及24個(gè)對(duì)照伐樁樣品的重量及不同木腐菌對(duì)伐樁樣品重量的影響顯著性檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2知，接菌處理后的伐樁樣品重量均比對(duì)照伐樁樣品重量低，在伐樁上接種粗皮側(cè)耳菌、虎掌菌、松生擬層孔菌、硫磺菌和茯苓菌處理伐樁70d后伐樁樣品平均重量均比對(duì)照伐樁樣品平均重量輕；接種硫磺菌處理伐樁70d后伐樁樣品的重量與對(duì)照伐樁樣品的重量差異顯著，接種另外4個(gè)菌處理伐樁70d后伐樁樣品的重量與對(duì)照伐樁樣品的重量差異不顯著。

2.2 木腐菌對(duì)松材線蟲(chóng)病疫木伐樁的作用

表2 伐樁樣品重量及顯著性檢驗(yàn)(t檢驗(yàn))Tab.2 The weight of samples from stumps and Samples T Test

2.2.2 伐樁樣品中松材線蟲(chóng)的數(shù)量

在松材線蟲(chóng)病疫木伐樁上接菌處理70d后，定量（30g）分離伐樁樣品中松材線蟲(chóng)數(shù)量及不同木腐菌對(duì)伐樁中松材線蟲(chóng)數(shù)量的影響顯著性檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，在野外接種試驗(yàn)的各個(gè)伐樁中都分離到一定數(shù)量的松材線蟲(chóng)，其中接種硫磺菌處理伐樁70d后從伐樁樣品中分離到的松材線蟲(chóng)數(shù)量最少，僅為897.9條，與對(duì)照相比較差異顯著。接種松生擬層孔菌和獲苓菌處理后從伐樁中分離到的松材線蟲(chóng)數(shù)量比對(duì)照還多（但差異不顯著），分別為2534.6條和2616.2條，而對(duì)照伐樁中分離到的松材線蟲(chóng)為2428.3條。

2.2.3 伐樁中松材線蟲(chóng)數(shù)量和伐樁樣品重量的相關(guān)性分析

在松材線蟲(chóng)病疫木伐樁上接菌處理70d后，對(duì)每個(gè)伐樁內(nèi)分離到的松材線蟲(chóng)數(shù)量和伐樁樣品重量作線性相關(guān)分析（見(jiàn)圖1），得出兩者之間的相關(guān)系數(shù)為0.5786，該結(jié)果表明伐樁內(nèi)松材線蟲(chóng)數(shù)量與伐樁樣品重量呈正相關(guān)關(guān)系（y=4113.2x-6676.9），其相關(guān)性達(dá)到了顯著水平，說(shuō)明伐樁受木腐菌侵染被其分解后對(duì)伐樁內(nèi)的松材線蟲(chóng)數(shù)量有顯著的影響。

表3 伐樁樣品中松材線蟲(chóng)的數(shù)量及顯著性檢驗(yàn)(t檢驗(yàn))Tab.3 The number of PWN isolated from stumps and Samples T Test

圖1 伐樁中松材線蟲(chóng)數(shù)量和伐樁樣品重量的相關(guān)性Fig.1 The correlation of the PWN number and the weight of samples from stumps

3 結(jié)論與討論

據(jù)報(bào)道，某些真菌對(duì)松材線蟲(chóng)的生長(zhǎng)和繁殖具有較強(qiáng)的抑制作用[9-11]。線蟲(chóng)生防真菌，根據(jù)其侵害線蟲(chóng)的習(xí)性，可分為捕食真菌、內(nèi)寄生真菌和產(chǎn)毒真菌，前2類是利用其生物活體對(duì)線蟲(chóng)進(jìn)行防治，產(chǎn)毒真菌是以其代謝產(chǎn)物毒殺線蟲(chóng)[9-11]。向紅瓊等(2000)報(bào)道，粗皮側(cè)耳對(duì)線蟲(chóng)致病的實(shí)質(zhì)是殺主寄生，菌絲分泌的毒素首先將線蟲(chóng)擊倒并殺死，然后菌絲從線蟲(chóng)體孔侵入，或靠酶和機(jī)械力的作用從表皮侵入，最后消解、吸收和利用線蟲(chóng)[12]。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)所用的13種木腐菌（含食用菌）除裂褶菌和雜色云芝菌外,其它所用菌均能夠很好地抑制松材線蟲(chóng)的繁殖。其中虎掌菌、松生擬層孔菌、粗皮側(cè)耳、硫磺菌、茯苓和靈芝對(duì)松材線蟲(chóng)的繁殖有很強(qiáng)的抑制作用，松材線蟲(chóng)在其菌落上完全不能存活,可見(jiàn)本試驗(yàn)所用的木腐菌對(duì)松材線蟲(chóng)具有比較強(qiáng)的抑殺作用。

對(duì)本次試驗(yàn)中各個(gè)處理伐樁樣品的重量分析表明，接菌處理的伐樁樣品重量比對(duì)照伐樁樣品重量輕，說(shuō)明接菌處理70d后，5個(gè)木腐菌都分別對(duì)疫木伐樁起到了一定的分解作用。但在野外試驗(yàn)過(guò)程中，由于定殖競(jìng)爭(zhēng)力的存在導(dǎo)致各個(gè)木腐菌在伐樁上的定殖能力出現(xiàn)差異，從而造成了各個(gè)木腐菌對(duì)伐樁分解能力的差異。

對(duì)每個(gè)伐樁內(nèi)分離到的松材線蟲(chóng)數(shù)量和伐樁樣品重量作相關(guān)分析結(jié)果表明，木腐菌對(duì)伐樁的分解能力越強(qiáng)則該菌株對(duì)伐樁內(nèi)的松材線蟲(chóng)的抑殺作用也越強(qiáng)。由此可見(jiàn)，接種木腐菌處理松材線蟲(chóng)病疫木伐樁效果的好壞在于所接種木腐菌對(duì)伐樁分解能力的強(qiáng)弱，而木腐菌在野外試驗(yàn)條件下對(duì)伐樁的分解能力強(qiáng)弱取決于該菌株在伐樁上定殖能力的強(qiáng)弱，定殖能力強(qiáng)的木腐菌能夠很好地在伐樁上定殖，進(jìn)而對(duì)伐樁進(jìn)行分解同時(shí)有效地作用于伐樁內(nèi)的松材線蟲(chóng)。如硫磺菌處理的伐樁樣品質(zhì)量減少最多、所含線蟲(chóng)數(shù)最少，說(shuō)明其對(duì)疫木伐樁具有較強(qiáng)的分解力和定殖力以及對(duì)線蟲(chóng)的抑殺作用。

本試驗(yàn)所用的5個(gè)木腐菌菌株都具有一定的藥用或食用價(jià)值，該5個(gè)菌株在田間試驗(yàn)中都表現(xiàn)出對(duì)伐樁具有不同的分解能力。可見(jiàn)利用木腐菌、食用真菌接種處理松材線蟲(chóng)病疫木伐樁是一項(xiàng)環(huán)保、有效的伐樁處理技術(shù)，值得推廣應(yīng)用[8]。

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