百令膠囊對(duì)大鼠急性腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院 （十堰 442000） 宋艷麗 郭俐宏 朱克剛

急性腎損傷（Acute kidney injury，AKI）是一組臨床綜合征，是指突發(fā)（1～7d內(nèi)）和持續(xù)（＞24h）的腎功能突然下降，血清肌酐（Cr）至少上升0．5mg／dl，表現(xiàn)為氮質(zhì)血癥、水電解質(zhì)和酸堿平衡以及全身各系統(tǒng)癥狀，可伴有少尿（＜400ml／24h或17ml／h）或無(wú)尿（＜100ml／24h）病死率達(dá)30%～60%［1］。急性腎損傷的發(fā)生過(guò)程中腎臟缺血-再灌注在發(fā)病機(jī)制中占重要地位，百令膠囊常用于其輔助性治療并有一定的療效。本組通過(guò)大鼠急性腎缺血再灌注損傷的動(dòng)物模型研究百令膠囊治療機(jī)制，為臨床用藥提供理論依據(jù)。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇健康SD大鼠30只，體重200～250g，雌雄兼用，SPF級(jí)，湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，合格證：SCXK（鄂）2010～2013。

2 藥品試劑及儀器 MDA測(cè)試盒由南京生物醫(yī)學(xué)工程研究所提供；日立7150型全自動(dòng)生化分析儀由日本日立精密儀器株式會(huì)社提供 ；水合氯醛由青島沙子口化工廠提供（批號(hào)：970108）；百令膠囊由杭州中美華東制藥有限公司提供（國(guó)藥準(zhǔn)字Z10910036）。

3 大鼠急性腎缺血再灌注損傷動(dòng)物模型制備將大鼠隨機(jī)分為3組：①假手術(shù)組；②模型組；③百令膠囊組；10% 水合氯醛（28mg／100g）經(jīng)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，腹正中切口，分離腹主動(dòng)脈上雙側(cè)腎動(dòng)脈分支，夾閉雙側(cè)腎動(dòng)、靜脈45min后再灌注45min，反復(fù)3次即可［2］。再灌后逐層縫合腹膜，腹壁肌肉和皮膚。術(shù)后模型組按（1ml／100g）0．95%生理鹽水灌胃；假手術(shù)組只灌等量0．95%生理鹽水但不夾閉造模；百令膠囊組按（0．2g／100g）灌胃，以上各組連續(xù)灌胃14d（1次／d），3組再灌注后24h及第14天心臟直接取血送檢。

4 檢測(cè)指標(biāo)和方法 第14天心臟取血按文獻(xiàn)［3］方法測(cè)定血清 MDA、SOD含量，采用日立7150型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）。

結(jié) 果

1 大鼠一般情況變化 假手術(shù)組大鼠體毛有光澤，反應(yīng)敏捷，飲食正常，無(wú)死亡。百令膠囊組大鼠比假手術(shù)組稍差，部分鼠體毛光澤，反應(yīng)一般，飲食正常，1例死亡。模型組大鼠體毛無(wú)光澤，豎毛，反應(yīng)遲鈍，蜷縮少動(dòng)，飲食量少，模型組死亡5例。

2 血清MDA含量及SOD活性 見(jiàn)表1。模型組血清MDA含量14d后明顯高于假手術(shù)組（P＜0．05），提示模型組腎損傷嚴(yán)重。百令膠囊組14d后血清MDA含量釋放明顯少于模型組（P＜0．05），SOD明顯高于模型組（P＜0．05）。提示百令膠囊能明顯抑制MDA的產(chǎn)生，并具有清除氧自由基抑制脂質(zhì)過(guò)氧化等作用。

3 大鼠血清肌酐和尿素氮水平 見(jiàn)表2。模型組血清肌酐含量14d后明顯高于假手術(shù)組（P＜0．05），提示模型組腎損傷嚴(yán)重。百令膠囊組14d后血清肌酐含量明顯少于模型組（P＜0．05）；尿素氮降低并接近正常水平，與模型組比較有顯著性差異（P＜0．05），提示百令膠囊能明顯降低血清肌酐及尿素氮。

表1 兩組病例血清MDA及SOD含量（±s，n＝10）

表1 兩組病例血清MDA及SOD含量（±s，n＝10）

注：▲與假手術(shù)組比較，P＜0．05；＃與模型組組比較，P＜0．05

MDA（nmol／ml）SOD（U／ml）組 別治療前 治療14d后 治療前 治療14d后±6．51模型組 147．22±11．31 188．57±17．12▲ 68．21±5．33 61．24±4．52百令膠囊組 147．39±12．38 152．27±14．23▲＃ 68．59±5．47 99．32±7．72▲＃假手術(shù)組 148．26±12．37 148．57±12．11 78．21±6．36 75．72

表2 大鼠血清Cr和BUN水平（±s，n＝10）

表2 大鼠血清Cr和BUN水平（±s，n＝10）

注：▲與假手術(shù)組比較，P＜0．05；＃與模型組組比較，P＜0．05

BUN（mmol／L）組 別Cr（μmol／L）治療前 治療14d后 治療前 治療14d后94．21±8．34 93．57±7．13 5．24±0．31 5．74±0．12模型組 95．22±8．57 168．33±17．48▲ 14．96±0．29 20．74±0．78▲百令膠囊組 95．31±8．35 102．24±10．24▲＃ 15．57±0．45 8．01±0．61▲＃假手術(shù)組

討 論

百令膠囊為冬蟲(chóng)夏草菌經(jīng)發(fā)酵制成蟲(chóng)草菌粉，具有與天然蟲(chóng)草基本一致的藥理作用［4］，主要成份有腺苷、蟲(chóng)草素、蛋白質(zhì)、多種氨基酸、糖及多種維生素、微量元素等。用于支氣管哮喘、慢性支氣管炎、慢性腎功能不全等治療。現(xiàn)代研究證實(shí)：冬蟲(chóng)夏草有抗炎、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抗脂質(zhì)代謝作用，其腺苷可使SOD升高，對(duì)清除自由基，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物，改善腎血流，改善腎功能起著非常重要的作用［5］。

急性腎損傷是由多種病因?qū)е?、涉及多學(xué)科的臨床常見(jiàn)危重病，在醫(yī)院具有較高的發(fā)病率［6］，常見(jiàn)于造影劑、創(chuàng)傷、大手術(shù)、藥物腎毒等。急性腎缺血再灌注損傷過(guò)程中產(chǎn)生大量的氧自由基，引起過(guò)氧化反應(yīng)，造成細(xì)胞膜基本特征的改變，MAD大量產(chǎn)生，MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化代謝產(chǎn)物，可間接反映細(xì)胞受氧自由基損傷的程度。而SOD是清除自由基的一種特性酶，保護(hù)細(xì)胞免受損害，可間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力。故測(cè)定MDA及SOD可以證明抗氧化功能。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：在腎急性缺血14d后，百令膠囊組MDA含量明顯低于模型組，提示百令膠囊能抑制MDA的產(chǎn)生，而百令膠囊組SOD的明顯增高，說(shuō)明其具有清除自由基抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的作用，這與文獻(xiàn)［7］報(bào)道百令膠囊抗氧化作用（即清除對(duì)機(jī)體有毒害作用的自由基）相一致。百令膠囊治療14d后血清Cr含量明顯減少，尿素氮降低并接近正常水平，提示百令膠囊能明顯清除血清肌酐及尿素氮。說(shuō)明百令膠囊對(duì)急性腎缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能為清除自由基抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，抑制橫紋肌溶解，增加腎血流量及腎小球?yàn)V過(guò)率，改善微循環(huán)，降低腎小管對(duì)肌酐及尿素氮的重吸收進(jìn)而改善腎功能。

總之，本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)百令膠囊對(duì)大鼠急性腎缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用，下一步我們將采用免疫組化觀察百令膠囊對(duì)腎小管再生情況的影響。

［1］ Palevsky PM，Zhang JH，O’Connor TZ，etal．Intensity of renal support in itically ill patients with acute kidney inju-ry［J］．N Engl J Med，2008，359（6）：7-9．

［2］ 張 偉，夏曉紅，王燕凌，等．老年大鼠腎缺血再灌注損傷一氧化氮合酶的變化與意義 ［J］．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2011，39（4）：421-423．

［3］ 郭俐宏，陳德森，張 琴，等．血塞通治療腦梗死患者74例臨床分析 ［J］．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2011，40（4）：477-479．

［4］ 李輝鋒，夏祖生．貝那普利聯(lián)合百令膠囊治療慢性腎炎臨床觀察 ［J］．當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2011，17（29）：135-135．

［5］ 池艷春，郭 靜，王 丹，等．百令膠囊對(duì)糖尿病腎病大鼠TGF-l／Smad信號(hào)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究 ［J］．中國(guó)中醫(yī)藥科技，2010，17（3）：204-205．

［6］ 張濤志 ，劉東偉．還原型谷胱甘肽治療急性腎損傷12例［J］．中國(guó)藥業(yè)，2012，21（5）：67-68．

［7］ De-Rubeais FR，Aven PA，Melhem MF，etal．A ttenuation of renal injury in db／db mice over expressing superoxide dismutase［J］．Diabetes，2004，53（3）：762-768．