壓力性尿失禁患者尿道周圍結締組織中核心蛋白聚糖和TGF-β1mRNA表達水平的改變

摘要：目的探討壓力性尿失禁(SUI)患者尿道周圍結締組織中核心蛋白聚糖（DCN）和轉化生長因子β1(TGF-β1) mRNA表達水平的改變及其相關性。方法將65例絕經后婦女根據(jù)是否存在SUI，分為SUI組（35例）和對照組（30例）。采用半定量反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法檢測兩組婦女尿道周圍結締組織中DCN和TGF-β1 mRNA的表達水平。結果SUI組患者DCN及TGF-β1 mRNA表達水平與對照組比較，其差異均有統(tǒng)計學意義，且兩者間存在負相關關系。結論SUI患者尿道周圍結締組織中TGF-β1減少及DCN的升高可能導致該部位膠原蛋白含量的減少，最終導致SUI發(fā)生的原因之一。

關鍵詞：壓力性尿失禁；膠原蛋白；核心蛋白聚糖；轉化生長因子β1

The Connective Tissue Around the Urethra in Patients with Stress Urinary Incontinence of Decorin and TGF- β 1 mRNA Expression Level Change

OU Lu

(Department of Gynaecology and Obstetrics，Nanhai District People's Hospital Foshan City，F(xiàn)oshan 528200，Guangdong，China)

Abstract：ObjectiveTo observe the relationship between the expression of decorin and TGF-β1 mRNA in periurethral vaginal tissue in patients with stress urinary incontinence(SUI).MethodsTransvaginal biopsies were obtained from the periurethral vaginal tissue in 35 SUI and 30 non SUI control postmenopausal women.RT-PCR were used to verify the mRNA level of decorin and TGF-β1.Results The expression of decorin was significantly higher and the expression of TGF-β1 was significantly lower in patients with SUI.The expression of decorin mRNA was highly and negatively related to the expression of TGF-β1 mRNA.Conclusion Our study results suggest that the decrease of TGF-β1 expression and increase of decorin expression，might reduce the quantity of collagen of periurethral vaginal tissue，and which involved in the pathogenesis of SUI.

Key words：Stress urinary incontinence;Collagen;Decorin;TGF-β1

隨著人口老齡化和人們對生活質量要求的提高，壓力性尿失禁成為了婦女常見的一種疾病[1]。壓力性尿失禁的發(fā)生是由于盆底結締組織和韌帶的支撐力減弱而引起的盆底功能障礙性疾病，故常與盆底其它臟器的功能障礙合并存在。膠原為結締組織的主要成分，且目前大多數(shù)研究表明，SUI和POP患者其結締組織膠原的含量均有所改變，且呈減少的趨勢，但其減少的原因尚不清楚。本文通過對SUI患者尿道周圍結締組織中TGF-β1、DCN mRNA表達水平的檢測及兩者相關性的研究，分析其在SUI發(fā)病中的作用，進一步闡明SUI的發(fā)病機理。

1資料與方法

1.1一般資料2007年4月~2010年1月在佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院及廣州醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院婦產科收治的絕經后婦女65例，根據(jù)是否存在SUI，分為SUI組（35例）和對照組（30例）。根據(jù)病史、婦科檢查、護墊試驗和尿動力學檢查結果符合SUI診斷標準者入組SUI組，對照組無盆底器官膨出和尿失禁癥狀。所有入選者近3個月內未服用激素類藥物，術后病理結果證實無子宮內膜異位癥、子宮肌瘤、功能性卵巢腫瘤等雌激素相關疾病，尿液分析無尿路感染。在征得患者的知情同意后，術中取近宮頸膀胱韌帶處陰道前壁粘膜下筋膜組織1.0cm×1.0cm×0.5cm，量約100mg，迅速置于液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2組織總RNA的提取按Trizol試劑盒說明提取組織總RNA。（Trizol Reagent 購自invitrogen 公司）

1.3引物設計與合成RT-PCR引物根據(jù)GenBank中相關基因的序列設計，由上海英駿生物工程公司合成。

1.4 RT-PCR按照Invitrogen公司的SuperScript Ⅲ First-Strand Synthesis System 逆轉錄試劑盒說明書將提取的組織總RNA逆轉錄為cDNA，在PE9600 PCR儀上進行PCR：96℃2 min預變性，然后按96℃變性30sec，53℃－59℃退火30sec，72℃延伸45sec，進行30個循環(huán)，最后72℃延伸10min。RT-PCR產物用2％瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定。

1.5半定量分析取PCR產物5μl，加6×loading buffer 1μl，2％瓊脂糖凝膠電泳（100V，40min），產物經凝膠成像儀和圖像分析系統(tǒng)進行圖像分析，分別測定DCN、TGF-β1和β-actin的A值，并以其比值（DCN/β-actin、TGF-β1/β-actin）表示DCN和TGF-β1 mRNA的相對表達水平。

1.6統(tǒng)計學方法使用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。通過兩樣本t檢驗和雙變量相關分析對結果進行分析。

2結果

SUI組患者尿道周圍結締組織中DCN mRNA表達水平為1.87±0.35，對照組為0.94±0.16，t=11.121，P<0.01，差異有顯著統(tǒng)計學意義（見圖1）。而SUI組中TGF-β1 mRNA表達水平為0.35±0.13，對照組為0.96±0.14，t=－17.270，P<0.01，差異有顯著統(tǒng)計學意義（見圖2）。進一步對SUI組的DCN和TGF-β1的相對灰度值進行線性相關分析，結果顯示，相關系數(shù)r=－0.431，P<0.05，說明DCN和TGF-β1兩者的mRNA表達水平存在負相關關系。

1，2，3:絕經后SUI組患者 4，5，6:絕經后對照組患者

圖1 兩組患者DCN mRNA擴增后凝膠電泳結果

1，2，3:絕經后SUI組患者 4，5，6:絕經后對照組患者

圖2 兩組患者TGF-β1 mRNA擴增后凝膠電泳結果

3討論

近年來，關于SUI患者盆底支持組織中膠原蛋白改變的研究較多，目前，多數(shù)研究認為，SUI患者盆底結締組織中總膠原蛋白含量下降，并認為膠原蛋白數(shù)量的減少導致了韌帶、筋膜等支持結構的松弛，最終導致SUI發(fā)生[2]，而導致SUI患者盆底組織膠原蛋白含量減少機制至今尚不清楚。余燕等研究發(fā)現(xiàn)絕經前后SUI患者陰道前壁組織中膠原含量減少且TGF-β1 mRNA表達水平下降[3]。DCN通過與TGF-β的受體競爭性結合，起到抑制TGF-β促進膠原蛋白合成的作用，是一種體內天然的TGF-β負性調節(jié)因子，另一方面，DCN能結合在膠原纖維表面，通過調整膠原纖維的C－末端，在膠原形成起始階段延遲膠原的組裝，使膠原合成減少，林益彬等研究發(fā)現(xiàn)SUI患者尿道周圍結締組織中Ⅲ型膠原含量減少，可能是由于組織中DCN表達增強所致進而提示DCN mRNA表達增強可能是SUI發(fā)生的一個原因[4]。

本研究結果顯示，絕經后SUI患者尿道周圍結締組織TGF-β1 mRNA的表達水平較對照組顯著減少，DCN mRNA的表達水平較對照組顯著升高，差異均具有統(tǒng)計學意義，且兩者呈負相關關系。結果提示SUI尿道周圍結締組織中膠原含量的減少，可能是由于DCN生成增加，使TGF-β1的基因表達減少，從而使該部位膠原纖維的生成減少，同時，由于DCN增多使得膠原的組裝延遲，而使膠原蛋白合成減少?？蛇M一步進行相關檢測以了解盆底支持組織中DCN和TGF-β1 蛋白表達水平的改變情況?；诒緦嶒灥慕Y果，通過抑制盆底支持組織中DCN mRNA的表達，促進TGF-β1 mRNA的表達，是否可起到增加局部膠原含量和提高SUI治愈率的作用，有待于進一步的研究證實。

參考文獻：

[1]宋巖峰，李亞欽，許波.福州市社區(qū)女性尿失禁發(fā)病現(xiàn)狀的分析[J].中華婦產科雜志，2004，39:257-259.

[2]孫智晶，郎景和，朱蘭.膠原狀態(tài)與壓力性尿失禁的病因學研究[J].中國婦產科臨床雜志，2004，5（1）：6-8.

[3]余燕，宋巖峰.壓力性尿失禁患者陰道壁核心蛋白聚糖和轉化生長因子mRNA表達水平集膠原含量的研究[J].實用婦產科雜志，2007，23(10):615-617.

[4]林益彬，宋巖峰.壓力性尿失禁患者尿道周圍結締組織中核心蛋白聚糖mRNA表達水平與III型膠原含量的相關性研究[J].中華婦產科雜志，2005，40(8):508-510.

編輯/申磊