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蕨菜多糖提取條件研究

2015-01-01 03:10:56李文瓊
皖西學院學報 2015年5期
關鍵詞:實驗

張 莉,李文瓊

(1.皖西學院生物與制藥工程學院,安徽 六安237012;2.蘭州軍區疾病預防控制中心,甘肅 蘭州730020)

蕨菜又名拳頭菜,如意菜,龍爪菜等,含有多種對人體有益的營養成分[1-2]。近年來已成為深受人們熱愛的山野菜[2-4]。蕨菜中含有豐富的黃酮類物質,其含量高達7.28%[5],目前,研究發現蕨菜黃酮具有抗氧化以及增強機體免疫功能等保健作用[4-7]。目前,有關蕨菜化學成分分析,尤其是黃酮類化合物的研究較多[5-7],多糖具有生理功能[8-9],但對于蕨菜多糖的相關研究報道較少,本文以皖西大別山產出野生蕨菜為原料,對其多糖的提取條件進行相關研究,多糖提取的原料也可采用提取黃酮類化合物后的殘渣,因此本研究為蕨菜的進一步的開發,綜合利用蕨菜資源提供了依據。

1 材料和方法

1.1 材料

蕨菜:2014年4月購于安徽霍山縣。

蕨菜粉:新鮮蕨菜103℃烘箱干燥,粉碎,過40目篩。

1.2 儀器及試劑

1.2.1 儀器

TD5-2自動離心機(長沙平凡儀器表有限公司);HH-2恒溫水浴鍋(國華電器有限公司);TU-1901型紫外可見光分光光度計(北京普析通用儀器設備有限公司);101AS-2型不銹鋼數顯電熱干燥箱(上海浦東躍欣科學儀器廠);FA1004型電子天平(上海精科天平)等。

1.2.2 試劑

無水乙醚,無水乙醇,葡萄糖,濃硫酸,苯酚等均為國產分析純。

1.3 實驗方法

1.3.1 蕨菜粉的脫脂處理

取蕨菜粉放于烘箱,103℃烘至恒重,將蕨菜粉用濾紙包成濾紙包,用無水乙醚作為提取劑,水浴45℃加熱,索氏提取法脫脂。直到洗脫液無色,拿出濾紙包,放在通風處等乙醚揮發到氣味比較淡時放入烘箱,103℃烘至恒重。

1.3.2 蕨菜粉的醇處理

把脫脂后的濾紙包放入索氏提取器,用無水乙醇作為提取劑,90℃恒溫水浴加熱,直到提取筒內液體為無色,脫醇溶性雜質。拿出過濾好的紙包,放在通風處讓乙醇揮發至醇味比較淡時放進干燥箱中,103℃烘至恒重。

1.3.3 蕨菜多糖含量的測定:苯酚硫-酸法[10-11]

(1)繪制葡萄糖標準曲線[12]

葡萄糖標準品在105℃下烘干至恒定重量后,準確稱取0.100 0g置于100mL燒杯中加20mL蒸餾水溶解,轉移至100mL容量瓶中,加蒸餾水定容至刻度,搖勻備用,濃度為1mg/mL,即為儲備液。將儲備液稀釋10倍作為標準溶液,濃度為0.1mg/mL。

準確移取葡萄糖標準溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL于試管中,補水至2mL,分別加入1mL 6%苯酚溶液,搖勻后迅速加入5mL濃硫酸,搖勻。將各試管于40℃水浴保溫30min后取出,冷水浴冷卻至室溫,在490nm處測其吸光度,以試劑空白作參比。得到回歸方程:A=9.557 1C-0.091 9,R2=0.993 3。

(2)樣品吸光度的測定

分別從樣液中取0.5mL溶液稀釋20倍后,取1.0mL稀釋液于試管中,按標準曲線測定方法測定吸光度。計算提取率。

1.3.4 單因素實驗

(1)料液比單因素實驗[13]

分別稱取蕨菜干粉置于錐形瓶中(n=2),設定水浴溫度為70℃,提取時間為2h,并且料液比為1∶10,1∶20,1∶30,1∶40和1∶50,水浴加熱回流提取。提取結束,過濾,濾液用蒸餾水定容至100mL。分別測定其中多糖含量。

(2)提取時間單因素實驗[13]

分別稱取蕨菜干粉置于錐形瓶中(n=2),設定料液比為1∶20,提取溫度70℃,分別設定提取時間為1h,2h,3h,4h,5h,水浴加熱浸提。提取結束,過濾,濾液用蒸餾水定容至100mL。分別測定其中多糖含量。

(3)浸提溫度單因素實驗[13]

分別稱蕨粉干粉置于錐形瓶中(n=2),設定固液比為1∶20,提取時間2h,分別設定提取溫度為50℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃,2小時后,提取結束,過濾,濾液用蒸餾水定容至100mL。分別測定其中多糖含量。

1.3.5 正交試驗因素水平[14-15]

在單因素實驗的基礎上,選用L9(33)正交實驗,正交因素水平如下:

表1 正交試驗因素水平

2 結果與分析

2.1 蕨菜粉預處理去雜質分析

在對蕨菜粉進行預處理時,經過無水乙醚脫脂,無水乙醇去除醇溶性雜質,由公式:醇溶性物質含量(%)=(未脫去醇溶性物質濾紙包質量-已脫去醇溶性物質濾紙包質量)÷蕨菜粉質量×100%

表2 蕨菜粉醇溶性雜質

從表2知,蕨菜內含有醇溶性物質,經過無水乙醇的處理,蕨菜包的質量明顯減少,經過計算,得出醇溶性物質含量為2.76%。

2.2 單因素實驗結果

2.2.1 料液比對蕨菜多糖提取率的影響

由圖1可知,隨料液比的加大,多糖提取率漸漸提高,固液比從1∶10到1∶20增長快速直至料液比1∶20之后,多糖提取率提高不明顯。且考慮到溶劑量的加大為后續的濃縮等步驟增加負擔,因此,最合適的料液比為1∶20。

2.2.2 提取時間對多糖提取率的影響

由圖2可知,提取時間小于3h時,隨著提取時間的增加,提取率明顯提高,3h后整個曲線慢慢平穩,最后趨于穩定,接著增加提取時間,但曲線還是趨于平緩,由此得出提取時間最優為3h。

圖1 料液比對多糖提取率的影響

圖2 提取時間對多糖提取率的影響

2.2.3 提取溫度對多糖提取率的影響

由圖3可知,從50℃到80℃,隨著提取溫度的升高,多糖得率呈現出先增加后下降的上升趨勢,從80℃到90℃,提取溫度升高,多糖得率出現下降,因此,蕨菜多糖提取的最佳溫度為80℃。

圖3 提取溫度對多糖提取率的影響

2.3 正交試驗結果與分析

根據表3、4知,極差R剖析得出,蕨菜多糖的提取率影響因素主順序為A>B>C。即固液比對蕨菜多糖的提取率影響最小,浸提時間其次,而浸提溫度對蕨菜多糖的提取率影響最大,對提取效果影響顯著。最優提取工藝:A3B3C2,提取率:6.23%。

表3 L9(34)正交試驗結果分析表

表4 L9(34)正交方差分析

2.4 驗證實驗

用正交試驗得出的最佳條件A3B3C2,即提取溫度為90℃,提取時間為4h,固液比為1∶20,進行驗證實驗。樣品量1.000 0g,平行實驗3組。

表5 驗證實驗結果

3次重復實驗表明,該方法重現性好,結果穩定可靠。

3 小結

通過正交試驗法優化蕨菜多糖的提取工藝條件,對蕨菜多糖提取率的影響因素進行了排序為:A>B>C,即最佳提取工藝為A3B3C2,浸提溫度為90℃,浸提時間為4h,固液比為1∶20,提取率為6.23%。

[1]安徽植物志協作組.安徽植物志(第1卷)[M].合肥:安徽科學技術書出版,1985.

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