超聲波快速石蠟切片在胃腸鏡活檢黏膜中的應用及意義

朱啟淦，孟加榕，戴太監，楊立民，潘羨心，林明珠(中國人民解放軍第一七五醫院，廈門大學附屬東南醫院病理科，漳州 363000;通訊作者;E-mail:mengjiarong@sina．com)

傳統的石蠟切片方法雖然是目前病理診斷中最可靠、最準確的診斷方法之一，但由于操作時間較長(有的醫院甚至需要2-3 d)，已不能適應現代臨床醫學快速診斷的要求［1］。超聲波快速石蠟切片因其制片質量可與常規石蠟切片相媲美，并且隨著技術的不斷改進，制片的時間能滿足術中快速診斷的需要，使得超聲快速石蠟切片在一些小醫院的應用較為廣泛［2］。隨著胃腸鏡的普及，胃腸鏡活檢小黏膜標本數量也隨著增長。我院采用超聲波快速石蠟切片技術制作胃腸鏡活檢石蠟切片，可以當天取病理報告，有效地縮短了病人就診時間。本文探討應用超聲波快速石蠟切片技術制備胃腸鏡活檢小黏膜石蠟切片予以推廣的可行性、實用性，現報告如下。

1 材料與方法

1．1 材料與試劑

收集我院2014-07～2015-07使用超聲波快速石蠟切片技術制作的胃腸鏡活檢小黏膜石蠟切片1 257例。取材部位包括食管、賁門、胃底、胃體、幽門、十二指腸、回盲部、升結腸、橫結腸、降結腸、乙狀結腸、直腸等。試劑:4%中性甲醛、丙酮、石蠟等。

1．2 儀器

RM2245切片機(萊卡);PHY-Ⅲ病理組織漂烘儀(常州市中威電子儀器有限公司);YTG-300E生物組織處理多用機及程序化控制系統(湖北省孝感市亞光醫用電子技術有限公司)，3個超聲波發生器，可單獨使用也可同時操作，工作性能穩定可靠。3個150 ml的清潔燒杯。

1．3 方法

①取材。將活檢組織分別用編好病理號的濾紙包裹，置于脫水筐中。②固定。將組織放入50 ml中性甲醛5-8 min。③脫水透明。用吸水紙除去包裹組織表面的殘液，投入50 ml丙酮6-8 min;有學者認為丙酮在脫水的同時兼有透明的作用［3］。④浸蠟。用吸水紙除去包裹組織表面的殘液，隨即投入50 ml石蠟液中約8-10 min。⑤包埋。將編好病理號的濾紙包裹的組織打開與對應標記病理號的包埋盒進行包埋。⑥與常規石蠟切片相同，切片、烤片。⑦染色。格林環保染液Ⅰ、Ⅱ染色程序脫蠟［4］各5 min;無水乙醇和95%乙醇各30 s后流水洗;蘇木精染色5 min，后水洗3 min，分化2 s后充分水洗;伊紅1 min后稍水洗，除浮染液30 s;無水乙醇Ⅰ、Ⅱ各1 min，除水透明和透明各1 min;GS封片膠封片鏡檢。

②-④步均在YTG-300E生物組織處理多用機中進行，使用150 ml的燒杯盛裝試劑和石蠟，YTG-300E生物組織處理多用機的水槽溫度為68-72℃。

2 結果

超聲波快速石蠟切片整個過程約1．5 h，在光鏡下觀察，紅藍對比分明，顏色亮麗鮮艷，組織結構清楚，細胞形態完整，胞質核對比醒目，胞膜及核膜清晰，對比度好(圖1，2)。與常規石蠟切片耗時2-3 d相比明顯縮短制片時間，且質量與常規石蠟切片(圖1，2)媲美，符合優質 HE 切片要求［5］。在1 257例病例中惡性159例(12．65%)，其中102例(64．2%)在我院手術，與術后常規石蠟切片相符;交界57例(4．53%)，建議重取或定期復查;延遲3 例(0．24%)因標本太小或夾取組織為黏液，建議重取。

圖1 腺瘤性息肉乙狀結腸活檢組織(×100)

圖2 腺癌浸潤肌層乙狀結腸活檢組織(×100)

3 討論

我國消化道腫瘤呈逐年上升趨勢，消化內鏡技術已廣泛應用于臨床。內窺鏡下取黏膜活檢技術已成為胃腸道腫瘤、息肉、炎癥等各種疾病的重要診斷方法［6］。另一方面，隨著社會發展，生活節奏加快，人們對醫療護理質量和快捷方便性的醫療服務要求越來越高，醫療模式隨之發生了較大變化，為適應生物—心理—社會這一新模式［7］，我院消化內鏡室開展了日間病房。然而在日常的病理檢驗中，黏膜活檢組織主要采用的是常規石蠟切片技術，這種技術病理報告時限周期長，嚴重影響病人的下一步治療。超聲波快速石蠟切片技術通過微波輻射能有效縮短制片過程中的固定、脫水透明及浸蠟時間。且操作簡便，制片質量可與常規石蠟切片相媲美，病人可以當天取報告，對內鏡室開展日間病房及平均住院日的縮短起到極大作用，滿足了臨床醫生和病人對病理報告準確及時的高標準要求。

超聲波快速石蠟切片在操作的過程中，需要注意以下事項:①當前送檢的胃腸鏡黏膜活檢標本，普遍存在檢材數量少、標本小、黏膜面不易分辨等問題。同時，由于包埋面不易確定，導致黏膜平包、平切、不能完全呈現黏膜各層組織結構的情況時有發生［6］。需要病理技術人員經驗豐富，取材時標本需用濾紙包裹，對于一些包膜完整的圓形息肉，需對半切開，活檢組織過厚的標本按解剖面切薄至0．15 cm左右，并采用正確的包埋方式。②標本例數多時，在濾紙上用鉛筆標記相應病理號，放入脫水筐，包埋時對應標記病理號的包埋盒。③整個制作過程應認真觀察，間斷翻動脫水筐，保證各例標本充分浸泡于試劑中，并提前將下一步試劑放在加熱池預熱，便于在有限時間內發揮最大的功效。④脫水時間的掌握，時間過短或過長都不符合快速石蠟切片的要求，處理時間的長短要視活檢黏膜類型、黏膜組織塊的厚薄，標本例數等因素靈活掌握。以脫水筐平鋪滿活檢組織為宜，切不可疊加，影響試劑的浸入，如標本多，可分批次進行。⑤超聲波處理儀置于通風柜中，能有效減少操作過程中試劑揮發產生的氣味。

目前，快速石蠟切片染色最常用的還是以二甲苯為脫蠟及透明劑、劇毒黃色氧化汞作為蘇木精氧化劑，其中二甲苯可危害人體健康［8］。我科使用格林環保染液進行染色的快速石蠟切片，切片脫蠟完全徹底，顏色亮麗鮮艷，胞質核對比醒目，胞膜及核膜清晰，切片透明度高。不僅同常規二甲苯脫蠟透明的HE染色效果相同，而且可以減少二甲苯等有害液體的排放，減少其對人體危害及環境污染［9］。

綜上所述，超聲波快速石蠟切片技術過程科學合理，操作簡便，制片質量穩定。病理技術人員通過培訓，嚴格按照標準操作程序規范操作，可以為病理醫生提供高質量的切片及清晰的染色保證。胃腸鏡活檢小黏膜快速石蠟制片的開展方便了門診急診患者，使他們的疾病得到了及時診斷及治療，同時滿足了臨床手術快速診斷的需要，值得在各醫院推廣使用。

［1］楚廣民，羅偉，裴素麗，等．超聲波快速石蠟切片的制備［J］．診斷病理學雜志，2001，8(6):366．

［2］鄭俊，駱利康，何曉燕，等．超聲快速石蠟切片對免疫組化抗原檢測的影響［J］．臨床與實驗病理學雜志，2008，24(4):497-498．

［3］馬恒輝，徐瑋，孟奎，等．使用超聲波處理儀制備快速石蠟切片的體會［J］．中華病理學雜志，2001，30(1):65．

［4］田玉旺，朱紅艷，李琳，等．GS環保染液在病理制片技術工作中的應用［J］．診斷病理學雜志，2011，18(4):213-215．

［5］ 中華醫學會．臨床技術操作規范:病理學分冊［M］．北京:人民軍醫出版社，2004:6．

［6］徐金永，趙夫娟，陳陽，等．胃腸黏膜瓊脂豎式包埋與常規包埋對比分析［J］．臨床與實驗病理學雜志，2014，30(4):461-462．

［7］鄭成中，張軍，孫玉平，等．兒科留觀15008例分析及啟迪［J］．中國當代兒科雜志，2002，4(6):525-526．

［8］Acton A，Harvey T，Grow M．An examination of non-fomalinbased fixation metho-ds for xenopus embryos［J］．DevDyn，2005，233(147):1464-1469．

［9］宋一民，龐霞，高冬玲，等．格林環保染液在快速石蠟切片應用中的體會［J］．診斷病理學雜志，2014，6(6):403．