應用CLSI M43-A折點值判讀解脲脲原體的藥物敏感性

鄭業煥，陳 玕，王則宇，馬 冰，席 宇，朱大恒

(1.鄭州大學生命科學學院，河南鄭州450001;2.河南省疾病預防控制中心，河南鄭州450016;3.河南省人民醫院檢驗科，河南鄭州450003)

解脲脲原體是寄生于泌尿生殖道的病原體，常引起非淋菌性尿道炎、宮頸炎、盆腔炎、睪丸炎和附睪炎等疾病，并可引起男女不育不孕(西方國家已作為不明原因不育不孕癥的必查項目)[1]。由于抗菌藥物的濫用，國內外出現了多重耐藥的解脲脲原體，給臨床治療帶來了極大的困難。2011年，美國臨床實驗室標準化協會(Clinical and Laboratory Standards Institude，CLSI)推出了關于人支原體體外藥物敏感性試驗，即CLSI M43-A標準指南[2]，該指南為臨床支原體體外藥物敏感性試驗的標準化和規范化提供了依據。本研究依據該指南就臨床收集的219株解脲脲原體進行體外藥物敏感性試驗，并結合指南中的折點值對其敏感性結果進行判讀，以考察該指南在臨床試驗中的情況，為解脲脲原體的臨床治療提供參考價值，指導臨床合理用藥。

材料和方法

一、解脲脲原體來源

篩選河南省人民醫院2012年9月至2013年11月疑似支原體感染患者，從女性宮頸分泌物和男性尿道分泌物、尿液、精液等臨床樣本中分離的219株解脲脲原體(排除同一感染株)，經分離鑒定后置于支原體肉湯培養基中-80℃備用，解脲脲原體(ATCC 33175)質控株由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供。

二、試劑

采用Oxoid公司支原體肉湯CM0403(批號1242053)及SR0059C添加劑(批號1028599)，按照說明書要求配置相應支原體肉湯培養基，并補加酚紅指示劑。所用抗菌藥物均為標準品，其中左氧氟沙星、莫西沙星、四環素、紅霉素均購于中國藥品生物制品檢定所，泰利霉素購于J＆K公司。

三、體外藥物敏感性試驗

體外藥物敏感性試驗操作和結果判讀參照CLSI M43-A 指南[2]及《支原體與支原體病》[3]。采用微量肉湯稀釋法，在96孔酶標板每一排的2～12孔各加100μL肉湯培養基;加100μL含128 μg/mL抗菌藥物的肉湯培養基至每一排的第1和第2孔;從每一排的第2孔至12孔作對倍稀釋;加100μL含有104～105CCU解脲脲原體新鮮肉湯培養基至每一孔;設立陰性對照、抗菌藥物對照、陽性對照;密封酶標板，35～37℃環境下孵育48 h，陽性對照孔肉湯培養基顏色由黃色變為粉紅色，記錄最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration，MIC)值。

四、統計學方法

采用SPSS 14.0統計軟件進行 χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

結 果

一、質控結果

陰性對照、抗菌藥物對照和陽性對照結果均無異常，用CLSI M43-A指南規定的解脲脲原體(ATCC 33175)進行質控，測定的結果及標準要求見表1。

二、微量肉湯稀釋法測定219株解脲脲原體的MIC值

219株解脲脲原體的MIC值見表2。

表1 解脲脲原體(ATCC 33175)質控結果及要求 (μg/mL)

表2 219株解脲脲原體的MIC值

三、解脲脲原體藥物敏感性試驗結果

標國按照CLSI M43-A指南判讀標準:左氧氟沙星MIC≤2μg/mL為敏感，MIC≥4 μg/mL為耐藥;莫西沙星MIC≤2 μg/mL 為敏感，MIC≥4 μg/mL 為耐藥;四環素 MIC≤1 μg/mL 為敏感，MIC≥2 μg/mL為耐藥;紅霉素 MIC≤8 μg/mL為敏感，MIC≥16μg/mL為耐藥;泰利霉素 MIC≤4 μg/mL為敏感。把本次219例解脲脲原體的敏感性進行判讀分析，結果見表3。

表3 219株解脲脲原體的體外藥物敏感性試驗結果 [株(%)]

討 論

支原體體外藥物敏感性試驗于20世紀60年代首次開展，隨后國內外發表的有關支原體體外藥物敏感性試驗方法和結果的文獻報道各不相同，但缺少普遍可接受或標準化的方法。M43-A文件經歷10余年，由CLSI小組組織了一系列的支原體體外藥物敏感性試驗研究，經美國、加拿大、法國的10個實驗室依據研究成果達成的共識撰寫而成[4]。M43-A是第1個公布的、提供了標準化的瓊脂法和肉湯稀釋法進行支原體藥物敏感性試驗的規范性文件，并用質控菌株給出了可參考的抑菌濃度范圍。本研究參照該指南對質控株進行藥物敏感性試驗，結果符合指南要求，說明了試驗的有效性。

參照CLSI M43-A指南，219株臨床解脲脲原體對5種抗菌藥物的敏感性結果分別為左氧氟沙星70.78%、莫西沙星 90.87%、四環素 87.21%、紅霉素84.93%和泰利霉素98.17%。同為喹諾酮類的左氧氟沙星和莫西沙星的敏感性經統計學分析，差異有統計學意義，莫西沙星作為最新的第4代喹諾酮類抗菌藥物，藥動學性質更趨良好[5]，這可能與這2種抗菌藥物上市的時間及臨床使用情況有關。在本研究中泰利霉素表現出了極高的臨床敏感性，該種抗菌藥物在SFDA數據庫暫未查到授權上市，極高的敏感性可能與該種抗菌藥物未在國內臨床使用有關。

之前，法國生物梅里埃公司的商品化Mycoplasma IST2產品被認可并廣泛使用，根據IST2的判斷標準，紅霉素的敏感性多在70%以下，四環素的敏感性多在90%以上[6-10]。進一步研究時發現，IST2針對紅霉素的折點值設定為1和4 μg/mL，要低于CLSI M43-A指南中的折點值，四環素的折點值設定為4和8 μg/mL，要稍高于CLSI指南中的折點值。如果按照生物梅里埃公司的IST2折點判讀本次研究的數據，紅霉素的敏感性由84.93%下降為60.73%，四環素的敏感性由87.21%上升為95.43%。由此可見折點值的差異對結果的判讀影響重大。此外，這種差異也可能因指南中所要求的培養液pH值和成分與商品化產品中的培養液pH值和成分有差異所致。

體外藥物敏感性試驗是臨床醫師選擇抗菌藥物的重要參考依據，正確的藥物敏感性試驗判斷標準非常重要。隨著CLSI M43-A的推出，使支原體體外藥物敏感性試驗將更加標準化和規范化，支原體體外藥物敏感性試驗結果將更加準確可靠，將為臨床支原體預防及治療提供重要參考依據。但該指南是否適合中國的國情，是否會存在地域、人種或人群的差異，值得進一步思考和研究。

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