SYSMEX XN-3000血液分析儀檢測外周血有核紅細胞的應用評估

趙 媛，胡恩亮，鄭 恬，王 妍，鄭善鑾

(第四軍醫大學西京醫院檢驗科，陜西西安710032)

有核紅細胞(nucleated red blood cell，NRBC)一般僅存在于骨髓中，在出生1周內的新生兒外周血中可見到少量的NRBC，如成人外周血涂片中出現NRBC均屬病理現象[1]，常見于晚幼紅細胞或中幼紅細胞多見的增生性貧血，如各種溶血性貧血等，以及原紅細胞、早幼紅細胞多見的紅血病、紅白血病，亦可見于髓外造血、骨髓纖維化、骨髓轉移癌、嚴重缺氧等疾病。因此，準確計數血液中NRBC對鑒別各種血液疾病具有重要的臨床意義。計數NRBC最經典的方法是用顯微鏡油鏡分類計數瑞氏染色血涂片中100個白細胞(white blood cell，WBC)時所見到的NRBC數量，即NRBC在血液中的百分率(NRBC%)[2]。SYSMEX XN-3000 血液分析儀(簡稱XN-3000)可對外周血中NRBC進行準確計數，計數原理是利用熒光染色對細胞核進行染色，流式法測定側向熒光強度(反映細胞核酸含量多少)和前向散射光強度(反映細胞體積大小)，將其與 WBC、紅細胞以及血小板區別。為了解XN-3000對外周血NRBC計數的準確性及異常提示信息的可靠性，本研究將XN-3000檢測NRBC結果與人工顯微鏡鏡檢法進行了比較和評價。

材料和方法

一、研究對象

第四軍醫大學西京醫院住院患者96例，男61例，女35例，其中確診血液病患者72例，非血液病患者24 例，年齡為(41.34 ±6.23)歲。

二、儀器與試劑

XN-3000和SYSMEX-SP10推片機配套試劑和質控品，BASO染液。OLYMPUS顯微鏡、Cellavison自動閱片機和乙二胺四乙酸二鉀血液抗凝管。

三、NRBC計數

1.XN-3000儀器法 嚴格按標準操作規程執行，在室內質控在控后，檢測乙二胺四乙酸二鉀抗凝血標本，并在4 h內檢測完畢。

2.顯微鏡鏡檢法 取乙二胺四乙酸二鉀抗凝血標本，在SYSMEX-SP10推片機(BASO染液)制備血片，2 h內完成。形態學檢查由經細胞形態學專業培訓的主管技師按全國臨床檢驗操作規程進行顯微鏡鏡檢，分類200個WBC，計數NRBC數量，以NRBC/100WBC表示。

四、統計學方法

結 果

一、重復性試驗

取NRBC計數百分數為高值、中值、低值的標本，由專業人員在30 min內進行重復計數各5次，結果顯示XN-3000檢測重復性好。見表1。

表1 NRBC%重復性試驗結果

二、敏感性和特異性

以顯微鏡鏡檢法為參照標準，32份標本XN-3000檢測NRBC陰性，血片手工復檢出現1例NRBC陽性;64例標本 XN-3000檢測 NRBC陽性，血片手工復檢出現62例陽性;XN-3000檢測NRBC的敏感性 98.41%(62/63)，特異性為93.94%(31/33)，假陽性率為3.13%(2/64)，假陰性率為3.13%(1/32)。見表2。

表2 XN-3000和顯微鏡鏡檢法檢測NRBC的結果比較

三、XN-3000與顯微鏡計數NRBC的相關性

XN-3000提示NRBC陽性的標本64例，以分類100個WBC所算得的NRBC計數百分數和顯微鏡計數的NRBC計數百分數顯示出良好的線性相關(r2=0.867)。見圖1。

圖1 2種方法計數外周血NRBC的相關性

NRBC計數的細胞數在(0～50)×1012/L時，r2=0.931;NRBC計數的細胞數在(0～200)×1012/L時，r2=0.957。2種方法 64例標本的NRBC計數百分數進行配對t檢驗，差異無統計學意義(P=0.019)。

討 論

外周血中NRBC出現和數量與諸多血液病診斷和預后有關[3-8]，因而臨床上很關注。作為實驗室是否能提供快速、準確的檢測結果顯得尤為重要。傳統的顯微鏡手工法在時間和人員上有一定局限性，因此XN-3000檢測外周血NRBC在保證結果準確性的同時，大大縮短了檢測時間，提高了工作效率，第一時間為臨床提供了診斷支持。

XN-3000通過計算NRBC與100個白細胞的比值(NRBC/100WBC)對白細胞計數結果自動校準。與手工顯微鏡鏡檢法相比，XN-3000測定NRBC結果客觀，并可通過散點圖清楚顯示NRBC的分布，有助于及時發現有NRBC的異常標本。在本研究中64例XN-3000提示陽性的標本與顯微鏡鏡檢法檢測結果比較，相關性良好，(r2＞0.867)，配對 t檢驗顯示 P=0.019，表明 XN-3000基本可替代顯微鏡鏡檢法檢測外周血NRBC。

XN-3000檢測NRBC的敏感性為98.41%，特異性為93.94%，假陽性率為3.13%。由于儀器計數細胞多，無人為主觀誤差和血涂片上細胞分布的誤差，其敏感性更高，在NRBC數值較低時，人工計數未見NRBC是可預見偏差，也是造成少量假陽性結果的主要原因。至于假陰性率3.13%，可能由于個人對細胞形態識別差異、NRBC在涂片上分布差異以及檢驗人員在選擇計數視野的差異所致。

綜上所述，使用XN-3000進行外周血NRBC計數，其檢測結果重復性好，方法可靠，操作簡便快速，正確性高，有一定的臨床應用價值。

[1]葉應嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作[M].南京:東南大學出版社，1991:13.

[2]王欣，滕娟，郝少麗.血細胞分析儀計數幼稚紅細胞的準確性評價[J].中華檢驗醫學雜志，2007，30(9):1056-1057.

[3]STACHON A，SONDERMANN N，IMOHL M，et al.Nucleated red blood cells indicate high risk of inhospital mortality[J].J Lab Clin Med，2002，140(6):407-412.

[4]STACHON A，HOLLAND-LETZ T，KRIEG M.High in-hospital mortality of intensive care patients with nucleated red blood cells in blood[J].Clin Chem Lab Med，2004，42(8):933-938.

[5]KRAJEWSKI P，WELFEL E，KALINKA J，et al.Evaluation of the relationship between circulating nucleated red blood cells count and inborn infection in neonates[J].Ginekol Pol，2008，79(1):17-22.

[6]HUANG R，BARBER TA，SCHMIDT MA，et al.A micro-fluidics approach for the isolation of nucleated red blood cells(NRBCs)from the peripheral blood of pregnant women[J].Prenat Diagn，2008，28(10):892-899.

[7]STEURER MA，BERGER TM.Massively elevated nucleated red blood cells an cerebral or pulmonary hemorrhage in severely growth-restricted infants-is there more than coincidence[J].Neonatology，2008，94(4):314-319.

[8]DE KEIJER MH，VAN DER MEER W.Automated counting of nucleated red blood samples[J].Clin Lab Haem atol，2002，24(6):343-345.