雌激素受體、孕激素受體和細(xì)胞增殖核抗原在絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉中的表達(dá)及其臨床意義

封意蘭 諶小衛(wèi)

臨床研究論著

雌激素受體、孕激素受體和細(xì)胞增殖核抗原在絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉中的表達(dá)及其臨床意義

封意蘭 諶小衛(wèi)

目的探討雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）以及細(xì)胞增殖核抗原（Ki-67）在絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉組織及息肉旁內(nèi)膜中的表達(dá)情況及其臨床意義。方法收集36例經(jīng)病理確診的絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉患者的息肉組織及息肉旁內(nèi)膜組織，采用免疫組織化學(xué)染色法檢測ER、PR和Ki-67在兩者腺體和間質(zhì)的表達(dá)情況。結(jié)果增生期息肉腺體中ER、Ki-67的表達(dá)程度高于息肉旁內(nèi)膜（P＜0.05）；分泌期息肉腺體中ER的表達(dá)程度高于息肉旁內(nèi)膜（P＜0.05），而PR的表達(dá)程度低于息肉旁內(nèi)膜（P＜0.05）；息肉腺體中ER和Ki-67表達(dá)程度呈正相關(guān)（P＜0.05），息肉腺體中PR 與ER、PR與Ki-67表達(dá)程度無關(guān)（P均＞0.05）。結(jié)論絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉腺體中ER處于高表達(dá)狀態(tài)，而分泌期息肉腺體中PR處于低表達(dá)的狀態(tài)，子宮內(nèi)膜息肉腺體中Ki-67和ER的表達(dá)呈正相關(guān)。ER可能通過增強細(xì)胞增殖活性，在子宮內(nèi)膜息肉發(fā)生、發(fā)展的調(diào)控方面起一定作用。

雌激素受體；孕激素受體；細(xì)胞增殖核抗原；子宮內(nèi)膜息肉；子宮內(nèi)膜

子宮內(nèi)膜息肉是由腺體、間質(zhì)及厚壁血管組成，突出于子宮內(nèi)膜表面的有蒂或無蒂的贅生物，是子宮內(nèi)膜癌的高危因素之一。但其病因?qū)W和發(fā)病機(jī)制至今仍不清楚，目前普遍認(rèn)為與子宮內(nèi)膜局部的雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）失衡和細(xì)胞增殖凋亡異常有關(guān)。Ki-67是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，可準(zhǔn)確反映細(xì)胞的增殖活性，近年研究發(fā)現(xiàn)其過度表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌發(fā)病密切相關(guān)，但Ki-67在子宮內(nèi)膜息肉方面的研究相對較少，且其與ER、PR在子宮內(nèi)膜息肉發(fā)病中有何關(guān)系尚不明確。本研究采用免疫組織化學(xué)染色法（免疫組化）檢測ER、PR及Ki-67在絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉組織及息肉旁內(nèi)膜中的表達(dá)情況，探討三者在絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉發(fā)生、發(fā)展中的意義，現(xiàn)報告如下。

對象與方法

一、研究對象

選取2012年7月至12月在中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院婦科行宮腔鏡手術(shù)且經(jīng)病理確診的絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉患者36例，取息肉組織為息肉組，取息肉旁0.5～1.0 cm的子宮內(nèi)膜為息肉旁內(nèi)膜組（內(nèi)膜組）。患者年齡21～46歲，中位年齡35歲，取材前3個月均無接受過任何激素治療及放置宮內(nèi)節(jié)育器，無婦科內(nèi)分泌疾病、生殖道炎癥及婦科腫瘤等病史。根據(jù)月經(jīng)周期以及顯微鏡下內(nèi)膜和息肉中的腺體、間質(zhì)形態(tài)確定所處的月經(jīng)周期階段，增生期為月經(jīng)周期的第5～14日，分泌期為月經(jīng)周期的第15～28日，其中增生期息肉24例，增生期內(nèi)膜24例，分泌期息肉12例，分泌期內(nèi)膜12例。本研究遵循的程序符合本院人體試驗委員會所制定的倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，得到該委員會批準(zhǔn)，并征得受試對象本人的知情同意，并與之簽署臨床研究知情同意書。

二、主要試劑

鼠抗人ER、PR及Ki-67單克隆抗體，0.01 mol／L磷酸鹽緩沖液（PBS），均購自英國Novocastra公司，二抗檢測試劑盒購自Dako公司。

三、研究方法

1.標(biāo)本制備

無菌條件下獲取子宮內(nèi)膜息肉以及息肉旁內(nèi)膜組織后，置入4%甲醛溶液固定，對所有標(biāo)本進(jìn)行免疫組化（Envision二步法），檢測ER、PR及Ki-67在子宮內(nèi)膜息肉和息肉旁內(nèi)膜中的表達(dá)情況。

2.觀察指標(biāo)和評價標(biāo)準(zhǔn)

ER、PR以及Ki-67免疫組化產(chǎn)物均呈細(xì)顆粒狀，定位于腺體和間質(zhì)的細(xì)胞核，以片中細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞。顯微鏡下觀察其染色范圍及染色強度，采用雙盲法讀片，雙評分、半定量法對免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析。每張切片隨機(jī)選取5個40倍視野，計算陽性細(xì)胞百分比，根據(jù)受體陽性細(xì)胞占切片中全部細(xì)胞的百分比分為4個等級，陽性細(xì)胞比例＜25%為0分，陽性細(xì)胞比例25%～50%為1分，陽性細(xì)胞比例51%～75%為2分，陽性細(xì)胞比例＞75%為3分。染色強度分為4個等級：基本不著色為0分，淡棕黃色為1分，深棕黃色為3分，介于兩者之間為2分。每張切片的評分以這兩者之和表示，0～1分為（－），2～3分為（＋），4～5分為（＋＋），6分為（＋＋＋）。

四、統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0軟件包處理數(shù)據(jù)。采用配對資料的符號秩和檢驗行數(shù)據(jù)分析，相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、增生期子宮息肉組和內(nèi)膜組ER、PR及Ki-67的表達(dá)情況比較

ER、PR以及Ki-67均可表達(dá)于息肉和息肉旁內(nèi)膜的腺體和間質(zhì)中，主要定位于細(xì)胞核。ER在增生期息肉組腺體的表達(dá)程度明顯高于內(nèi)膜組（P ＜0.05），而2組間質(zhì)中ER的表達(dá)程度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；PR在增生期息肉組腺體及間質(zhì)的表達(dá)程度與內(nèi)膜組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）；Ki-67在增生期息肉組腺體的表達(dá)程度高于內(nèi)膜組（P＜0.05），而2組間質(zhì)中Ki-67的表達(dá)程度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

二、分泌期子宮息肉組和內(nèi)膜組ER、PR及Ki-67的表達(dá)情況比較

ER在分泌期息肉組腺體中的表達(dá)程度明顯高于內(nèi)膜組（P＜0.05），而2組間質(zhì)中ER的表達(dá)程度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；PR在分泌期息肉腺體中的表達(dá)強度明顯低于內(nèi)膜組（P＜0.05），而2組間質(zhì)中PR的表達(dá)程度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；Ki-67在分泌期息肉組腺體及間質(zhì)的表達(dá)與內(nèi)膜組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

三、ER、PR與Ki-67表達(dá)程度的相關(guān)性分析

在36例子宮內(nèi)膜息肉腺體中，ER與PR的表達(dá)程度無關(guān)（rs＝－0.010，P＞0.05）。子宮內(nèi)膜息肉腺體中ER與Ki-67的表達(dá)程度呈正相關(guān)（rs＝0.360，P＜0.05）。子宮內(nèi)膜息肉腺體中PR與Ki-67的表達(dá)程度無關(guān)（rs＝－0.127，P＞0.05）。

表1 增生期子宮息肉組和內(nèi)膜組ER、PR及Ki-67的表達(dá)情況比較（n＝24）例（%）

表2 分泌期子宮息肉組和內(nèi)膜組ER、PR及Ki-67的表達(dá)情況比較（n＝12）例（%）

討 論

子宮內(nèi)膜息肉多為良性，但其惡變率高達(dá)0.8%～4.8%，且隨著年齡增長，患病率增加［1］。然而，其發(fā)病機(jī)制至今仍未明確。近年研究表明，子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)生涉及ER、PR失衡、細(xì)胞調(diào)亡與增殖異常、炎性刺激、基因突變等多方面因素，但目前普遍認(rèn)為其發(fā)病與子宮內(nèi)膜局部的ER、PR失衡和細(xì)胞增殖凋亡異常有關(guān)。

ER和PR廣泛分布在子宮內(nèi)膜、子宮肌層、陰道上皮以及輸卵管等組織中，以子宮內(nèi)膜中的表達(dá)最多。ER和雌激素結(jié)合后變構(gòu)并形成二聚體，繼而在細(xì)胞核內(nèi)與靶基因調(diào)節(jié)區(qū)的雌激素反應(yīng)元件結(jié)合，或者與Ap1、Sp1等轉(zhuǎn)錄因子相互作用，調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，從而刺激靶器官細(xì)胞增殖和分化。長期持續(xù)的高水平雌激素作用于子宮內(nèi)膜，可導(dǎo)致子宮內(nèi)膜的過度增生和血管增殖，甚至癌變。孕激素則在雌激素作用的基礎(chǔ)上發(fā)揮效應(yīng)，孕激素與PR結(jié)合后使PR發(fā)生構(gòu)象變化，從而限制內(nèi)膜的增殖，使增殖期子宮內(nèi)膜轉(zhuǎn)為分泌期，促進(jìn)子宮內(nèi)膜的周期性脫落。由于子宮內(nèi)膜中ER、PR表達(dá)存在差異，使子宮內(nèi)膜不同部位的性激素受體表達(dá)不平衡，以及子宮內(nèi)膜對雌激素、孕激素反應(yīng)不一致，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜各個部位增生不平衡，ER表達(dá)較高的子宮內(nèi)膜可在雌激素的刺激下過度增生［2］。本研究中，ER、PR在息肉組織及息肉旁內(nèi)膜中的表達(dá)并不一致，無論增生期還是分泌期，子宮內(nèi)膜息肉腺體中ER的陽性表達(dá)程度均高于息肉旁內(nèi)膜，而分泌期息肉腺體中PR的陽性表達(dá)程度低于息肉旁內(nèi)膜，由此推測，絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉腺體中ER處于高表達(dá)狀態(tài)，而分泌期息肉腺體中PR的表達(dá)處于低水平、相對缺乏的狀態(tài)，使孕酮抑制組織增殖作用明顯減弱，局部組織相對接受了高水平雌激素的持續(xù)刺激而呈顯著增殖狀態(tài)，導(dǎo)致組織的異常增生而形成息肉。

Ki-67是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，與增殖細(xì)胞的增殖周期有關(guān)［3］。由于Ki-67僅表達(dá)于增生期細(xì)胞，在靜止的細(xì)胞中不表達(dá)，所以Ki-67指數(shù)（即Ki-67陽性細(xì)胞所占比例）可以準(zhǔn)確反映正常細(xì)胞的增殖情況，并能夠較客觀的完全地反映腫瘤細(xì)胞的增生活性。Ki-67在子宮、卵巢、乳腺等幾乎全身各部位腫瘤的增殖細(xì)胞中均有表達(dá)，且其陽性表達(dá)率及表達(dá)強度在良性、交界性、惡性腫瘤間均有顯著差異性，其在三者中的表達(dá)呈逐漸升高［4-5］。本研究顯示，增生期息肉腺體中Ki-67的陽性表達(dá)程度明顯高于息肉旁內(nèi)膜腺體。由于Ki-67可客觀反映細(xì)胞增殖狀況，其表達(dá)增強是細(xì)胞增殖活性增加的可靠標(biāo)記，所以提示了子宮內(nèi)膜息肉是一種細(xì)胞增殖性疾病，從而表明子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)生與細(xì)胞過度增殖有關(guān)。因此，Ki-67的高表達(dá)對子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)生可能具有預(yù)測作用，但Ki-67是否可以作為子宮內(nèi)膜息肉復(fù)發(fā)及癌變的分子學(xué)指標(biāo)，還有待于進(jìn)一步的研究。

在正常婦女的月經(jīng)周期中，ER、PR在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)隨著體內(nèi)雌、孕激素水平的波動呈周期性變化，而Ki-67主要在增生期及排卵后3 d內(nèi)的功能層腺體中表達(dá)，分泌期表達(dá)顯著減少。McGurgan等（2006年）對絕經(jīng)前、后息肉中ER、PR和Ki-67的表達(dá)分別進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后息肉腺體和間質(zhì)中ER表達(dá)高于絕經(jīng)前息肉；絕經(jīng)后息肉腺體中PR表達(dá)亦較絕經(jīng)前息肉高，但間質(zhì)中PR表達(dá)在2組間無差異；而絕經(jīng)前息肉間質(zhì)中Ki-67表達(dá)明顯高于絕經(jīng)后息肉。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，2組中ER的表達(dá)與PR、Ki-67的表達(dá)均密切相關(guān)。本研究中，ER和Ki-67在增生期子宮內(nèi)膜息肉腺體中表達(dá)程度均高于息肉旁宮內(nèi)膜高，相關(guān)分析顯示兩者在子宮內(nèi)膜息肉腺體中的表達(dá)呈正相關(guān)。因Ki-67是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的標(biāo)志性抗原，由此推測，ER在子宮內(nèi)膜息肉發(fā)生發(fā)展的調(diào)控方面起關(guān)鍵作用，ER通過和雌激素結(jié)合發(fā)揮生理效應(yīng)而促進(jìn)內(nèi)膜細(xì)胞增殖，故Ki-67表達(dá)升高，聯(lián)合檢測兩者在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)有助于子宮內(nèi)膜息肉的早期發(fā)現(xiàn)。

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Expression and clinical significance of ER，PR and Ki-67 in the endometrial polyps of premenopausal women

Feng Yilan，Chen Xiaowei.Department of Gynecology，the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Nanning 530021，China

ObjectiveTo study the expression level and clinical significance of estrogen receptor （ER），progesterone receptor（PR）and proliferating cell nuclear antigen Ki-67 in the endometrial polyps （EP）and adjacent normal endometrial tissues from premenopausal women.Method The EP and adjacent normal endometrial tissues were collected from 36 premenopausal patients pathologically diagnosed with EP. The expression of ER，PR and proliferating cell nuclear antigen Ki-67 in the glands and stromal cells was evaluated by immunohistochemistry between EP and adjacent normal endometrial tissues.ResultsIn the proliferative phase，the expression levels of ER and Ki-67 in the glands of EP were significantly higher than those in adjacent normal endometrial tissues（both P＜0.05）.In the secretory phase，the expression of ER in the glands of EP was significantly higher whereas that of PR was significantly lower than those in adjacent normal endometrial tissues（both P＜0.05）.The expression of ER in the glands of EP was positively correlated with that of Ki-67（P＜0.05）.However，the expression between ER and PR，PR and Ki-67 was not correlated in adjacent normal endometrial tissues（all P＞0.05）.Conclusions In the glands of EP of premenopausal patients，ER was highly expressed.In the secretory phase，PR was lowly expressed.The expression of Ki-67 and ER was positively correlated in the glands of EP.ER plays a pivotal role in the incidence，development and regulation of EP probably via promoting the proliferation of endometrial cells.

Estrogen receptor；Progesterone receptor；Ki-67；Endometrial polyps；Endometrium

2014-08-20）

（本文編輯：林燕薇）

10.3969／g.issn.0253-9802.2015.04.007

廣東省科技計劃項目（2011B031800094）

530021南寧，廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院（封意蘭）；510630廣州，中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院婦科（諶小衛(wèi)）

，諶小衛(wèi)，E-mail：xiaoweidoctor＠163.com