非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變檢測及其與臨床病理特征的關(guān)系

丁毅+張海萍+鐘山+付莉+白冬雨+張海芳

[摘要] 目的 探討非小細胞肺癌（NSCLC）表皮生長因子受體（EGFR）基因突變情況及其與臨床病理的關(guān)系。方法 對2010年1月—2014年1月來該院診治的159份非小細胞肺癌手術(shù)切除標本進行分析，實驗中采用基因測序方法對標本中的EGFR基因突變情況進行檢測，分析其與臨床病理的關(guān)系。結(jié)果 159例樣本中，EGFR基因突變檢出率12.6%（20/159），突變主要集中在19號外顯子的缺失和21號外顯子的點突變。女性患者基因突變檢出率明顯高于男性患者（P﹤0.01）。腺癌及細支氣管肺泡癌患者基因突變檢出率明顯高于其他組織學分型（P﹤0.01）。高分化患者基因突變檢出率高于中-低分化檢出率（P<0.05）。EGFR基因突變與年齡及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否無關(guān)（P>0.05）。 結(jié)論 非小細胞肺癌患者EGFR基因突變與性別、組織學分型及分化程度密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 肺腫瘤；非小細胞肺癌；表皮生長因子受體；基因突變

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）10（a）-0009-03

相關(guān)研究表明，表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）在43%～89%的非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中表達上調(diào)，參與細胞增殖、血管生成、抵抗凋亡和腫瘤侵襲，在腫瘤形成和介導瘤細胞的生物行為上發(fā)揮著重要作用，是目前NSCLC治療的重要靶點之一[1]。該研究就此主要研究非小細胞肺癌EGFR基因突變情況及其與臨床病理的關(guān)系，旨在為臨床治療提供靶點依據(jù)，現(xiàn)對2010年1月—2014年1月間來該院診治的159份非小細胞肺癌手術(shù)切除標本進行分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取廈門大學附屬第一醫(yī)院病理科收集的159份NSCLC手術(shù)切除標本為研究對象，術(shù)前都未接受放化療治療。其中男性117例，女性42例，年齡范圍36～78歲，平均59歲，中位年齡61歲。按中位年齡分兩組（4例無年齡紀錄）：≤60歲 77例，>60歲 78例。組織學分型：腺癌63例，細支氣管肺泡癌16例，非腺癌80例（包括鱗癌53例、腺鱗癌10例、大細胞癌11例、黏液表皮樣癌2例、肉瘤樣癌4例）。

1.2 方法

①DNA提取。取蠟塊腫瘤組織切片，厚度為5～6 μm，5～10片，保存在無菌專業(yè)管（1.5 mL）中。把二甲苯脫蠟（鞍山市華昊化工廠）、乙醇洗脫二甲苯（青島新銳化學有限公司）（均由廈門大學附屬第一醫(yī)院專業(yè)醫(yī)師配置）加入管中，隨后將其晾干。再向每一根管中加入300 μL的裂解液及30 μL的蛋白酶K，水浴（55 ℃）3 h。100℃下滅活蛋白酶K5至10 min。然后每一根管中加入120 μL的飽和氯化鈉，均勻振蕩20 s，離心處上清，之后加入雙倍體積的乙醇（無水），零下20 ℃沉淀2 h。4 ℃離心20 min，速度為12 000 r/min，棄上清；加入一定量的乙醇（80%，冷），離心，真空抽干。最后利用紫外分光光度儀測量并保持樣本DNA純度為1.7～2.0之間。②PCR擴增。PCR反應(yīng)條件：儀器設(shè)備為PCR擴增儀（美國ABI-2700型），先95 ℃預(yù)變性，退火1 min，延伸1 min，循環(huán)10次，變性50 s，再分別退火、延伸1 min，循環(huán)30次，72攝氏度延伸10 min?；厥詹⒗肈NA純化試劑盒測量PCR產(chǎn)物凝膠電泳特異性條帶。③測序。運行PCR程序，利用乙醇純化產(chǎn)物，用測序儀（美國ABI3730型）測序純化后的產(chǎn)物。所得結(jié)果與基因庫EGFR基因序列核對，所有病例均經(jīng)正向及反向測序。

1.3 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件對EGFR基因突變檢測數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 EGFR基因突變情況分析

159例NSCLC組織標本中EGFR基因突變20例（12.6%），突變主要集中在19號外顯子的缺失和21號外顯子的點突變（90.5%），其中20號外顯子S768I、21號外顯子L861Q突變同在1例（0.6%）。見表1。

2.2 EGFR基因突變與臨床病理關(guān)系分析

在159例NSCLC患者中，女性患者EGFR基因突變率（31.0%，13/42）高于男性患者（6.0%，7/117），兩者差異有統(tǒng)計學意義（χ2=17.52，P<0.01）。腺癌和細支氣管肺泡癌患者EGFR基因突變率（19%，12/63和37.5%，6/16）高于非腺癌患者（2.5%，2/80），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=21.38，P<0.01）；細支氣管肺泡癌患者EGFR基因突變率（37.5%，6/16）高于腺癌患者（19%，12/63），但兩者差異無統(tǒng)計學意義（χ2=10.93，P>0.05）。高分化患者EGFR基因突變率（30.0%，6/20）高于中-低分化患者（10.1%，14/139），兩者差異有統(tǒng)計學意義（χ2=6.31，P<0.05）。EGFR基因突變率與年齡及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否無關(guān)，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.72，P>0.05）。見表2。

3 討論

肺癌是嚴重危害人類健康的常見惡性腫瘤之一，其中約80%是非小細胞肺癌，盡管隨著手術(shù)、放化療等治療手段的發(fā)展，肺癌的治療效果得到顯著提升，但目前肺癌的預(yù)后仍然很差，患者的5年生存率僅約15%[2]。目前，以吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼為代表的針對受體酪氨酸激酶家族中表皮生長因子受體（EGFR）的靶向藥物的研發(fā)及臨床應(yīng)用給NSCLC治療帶來了新的曙光[3-5]。EGFR是原癌基因的表達產(chǎn)物，具有酪氨酸激酶活性。相關(guān)文獻表明EGFR能和細胞外配體結(jié)合形成二聚體，通過刺激酪氨酸激酶活性讓二聚體出現(xiàn)自身磷酸化，讓信號轉(zhuǎn)移到細胞內(nèi)引發(fā)級聯(lián)反應(yīng)[6]。一旦EGFR基因突變，會直接參與到腫瘤細胞增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及凋亡抑制等過程中。EGFR酪氨酸激酶抑制劑可通過對腫瘤細胞EGFR的特異性結(jié)合阻斷細胞信號通路，抑制腫瘤細胞增殖并促其凋亡。

文獻報道[7-8]，不同人種之間EGFR基因突變率存在差異，東亞人群EGFR基因突變率約30%，高加索人群約10%。中國NSCLC患者EGFR基因總突變率約28.7%。該組福建地區(qū)159份非小細胞肺癌組織標本中EGFR基因突變檢出率為12.6%，較國內(nèi)平均數(shù)據(jù)低，可能與檢測方法及不同的人群和地域有關(guān)，還需進一步擴大樣本量進一步驗證[9-10]。

該研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變表現(xiàn)在外顯子18～21，其中以19外顯子缺失、21外顯子點突變?yōu)橹?，在EGFR基因突變檢出中所占比例分別為19.0%（4/21）、71.4%（15/21），表明上述區(qū)域極有可能是靶向治療的敏感部位。另外，由表2可知，非小細胞肺癌中EGFR基因突變與性別、組織學分型、分化程度有關(guān)。其中女性患者EGFR基因突變明顯高于男性患者，腺癌及細支氣管肺泡癌EGFR基因突變檢出率明顯高于其他分型檢出率。王芳等[11]報道，細支氣管肺泡癌及伴有細支氣管肺泡癌分化特征的腺癌EGFR基因突變率顯著高于普通腺癌，他們認為腺癌中無論細支氣管肺泡癌成分的多少均預(yù)示EGFR突變的高發(fā)生率及對酪氨酸激酶抑制劑的高反應(yīng)率。該研究中細支氣管肺泡癌患者EGFR基因突變率高于腺癌患者，但兩者差異無統(tǒng)計學意義，與張靜等[12]報道一致。該研究還發(fā)現(xiàn)高分化患者EGFR基因突變率高于中-低分化患者。

綜上，非小細胞肺癌EGFR基因突變與性別、組織學分型、分化程度息息相關(guān)，參與腫瘤浸潤、化療抗拒等過程，可作為非小細胞肺癌治療的一項重要靶點。

[參考文獻]

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[4] Zhou C，Wu YL，Chen G，et a1.Erlotinib versus chemotherapy as first-line treatment for patients with advanced EGFR mutation-positive non-small-cell lung cancer（OPTIMAL， CTONG-0802）： a multicentre，open-label，randomised，phase 3 study[J]. Lancet Oncol， 2011，12（8）：735-742.

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[6] Kris MG，Matale RB，Herbst RS，et al.Efficacy of gefitinib， an inhibitor of the epidermal growth factor receptor tyrosine kinase，insymptomatic patients with non-small cell lung cancer：a randomized trial[J]. JAMA，2003，290（16）：2149-2158.

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[8] 王國慶，谷雅君，王蓉，等.中國人非小細胞肺癌EGFR基因突變與患者特征關(guān)系的Meta分析[J].中國醫(yī)學檢驗雜志，2009，10（2）：55-57，60.

[9] 張曉彤，李龍蕓，王樹蘭，等.吉非替尼治療晚期非小細胞肺癌療效觀察[J].中華結(jié)核和呼吸雜志， 2012（28）：180-183.

[10] Planchard D， LoriotY， Besse B.[ImpactofKRAS in stand-ard treatment of non-small cell lung cancer （NSCLC） pa-tients in 2009： prognostic and predictive value] [J]1Bull Cancer， 2009， 96： S57-S68.

[11] 王芳.付莎.湯濤，等.非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變與臨床病理特征的關(guān)系[J].中華病理學雜志，2011，40（10）：664-666.

[12] 張靜，梁智勇，曾瑄，等.應(yīng)用蝎形探針擴增阻滯突變系統(tǒng)檢測非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變與病理改變的關(guān)系[J].中華病理學雜志，2008，37（5）：294-299.

（收稿日期：2014-06-29）

文獻報道[7-8]，不同人種之間EGFR基因突變率存在差異，東亞人群EGFR基因突變率約30%，高加索人群約10%。中國NSCLC患者EGFR基因總突變率約28.7%。該組福建地區(qū)159份非小細胞肺癌組織標本中EGFR基因突變檢出率為12.6%，較國內(nèi)平均數(shù)據(jù)低，可能與檢測方法及不同的人群和地域有關(guān)，還需進一步擴大樣本量進一步驗證[9-10]。

該研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變表現(xiàn)在外顯子18～21，其中以19外顯子缺失、21外顯子點突變?yōu)橹鳎贓GFR基因突變檢出中所占比例分別為19.0%（4/21）、71.4%（15/21），表明上述區(qū)域極有可能是靶向治療的敏感部位。另外，由表2可知，非小細胞肺癌中EGFR基因突變與性別、組織學分型、分化程度有關(guān)。其中女性患者EGFR基因突變明顯高于男性患者，腺癌及細支氣管肺泡癌EGFR基因突變檢出率明顯高于其他分型檢出率。王芳等[11]報道，細支氣管肺泡癌及伴有細支氣管肺泡癌分化特征的腺癌EGFR基因突變率顯著高于普通腺癌，他們認為腺癌中無論細支氣管肺泡癌成分的多少均預(yù)示EGFR突變的高發(fā)生率及對酪氨酸激酶抑制劑的高反應(yīng)率。該研究中細支氣管肺泡癌患者EGFR基因突變率高于腺癌患者，但兩者差異無統(tǒng)計學意義，與張靜等[12]報道一致。該研究還發(fā)現(xiàn)高分化患者EGFR基因突變率高于中-低分化患者。

綜上，非小細胞肺癌EGFR基因突變與性別、組織學分型、分化程度息息相關(guān)，參與腫瘤浸潤、化療抗拒等過程，可作為非小細胞肺癌治療的一項重要靶點。

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[11] 王芳.付莎.湯濤，等.非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變與臨床病理特征的關(guān)系[J].中華病理學雜志，2011，40（10）：664-666.

[12] 張靜，梁智勇，曾瑄，等.應(yīng)用蝎形探針擴增阻滯突變系統(tǒng)檢測非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變與病理改變的關(guān)系[J].中華病理學雜志，2008，37（5）：294-299.

（收稿日期：2014-06-29）

文獻報道[7-8]，不同人種之間EGFR基因突變率存在差異，東亞人群EGFR基因突變率約30%，高加索人群約10%。中國NSCLC患者EGFR基因總突變率約28.7%。該組福建地區(qū)159份非小細胞肺癌組織標本中EGFR基因突變檢出率為12.6%，較國內(nèi)平均數(shù)據(jù)低，可能與檢測方法及不同的人群和地域有關(guān)，還需進一步擴大樣本量進一步驗證[9-10]。

該研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變表現(xiàn)在外顯子18～21，其中以19外顯子缺失、21外顯子點突變?yōu)橹鳎贓GFR基因突變檢出中所占比例分別為19.0%（4/21）、71.4%（15/21），表明上述區(qū)域極有可能是靶向治療的敏感部位。另外，由表2可知，非小細胞肺癌中EGFR基因突變與性別、組織學分型、分化程度有關(guān)。其中女性患者EGFR基因突變明顯高于男性患者，腺癌及細支氣管肺泡癌EGFR基因突變檢出率明顯高于其他分型檢出率。王芳等[11]報道，細支氣管肺泡癌及伴有細支氣管肺泡癌分化特征的腺癌EGFR基因突變率顯著高于普通腺癌，他們認為腺癌中無論細支氣管肺泡癌成分的多少均預(yù)示EGFR突變的高發(fā)生率及對酪氨酸激酶抑制劑的高反應(yīng)率。該研究中細支氣管肺泡癌患者EGFR基因突變率高于腺癌患者，但兩者差異無統(tǒng)計學意義，與張靜等[12]報道一致。該研究還發(fā)現(xiàn)高分化患者EGFR基因突變率高于中-低分化患者。

綜上，非小細胞肺癌EGFR基因突變與性別、組織學分型、分化程度息息相關(guān)，參與腫瘤浸潤、化療抗拒等過程，可作為非小細胞肺癌治療的一項重要靶點。

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[7] Wu YL，Zhong WZ，Li LY，et a1.Epidermal growth factor receptor mutations and their correlation with gefitinib therapy in patients with non-small cell 1ung cancer：a meta—analysis based on updated individual patient data from six medical centers in mainland China[J]. J Thorac Oncol，2007，2（5）：430-439.

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[12] 張靜，梁智勇，曾瑄，等.應(yīng)用蝎形探針擴增阻滯突變系統(tǒng)檢測非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變與病理改變的關(guān)系[J].中華病理學雜志，2008，37（5）：294-299.

（收稿日期：2014-06-29）