一株凝結芽孢桿菌的篩選及鑒定

傅 奇 肖玉娟

一株凝結芽孢桿菌的篩選及鑒定

傅 奇 肖玉娟

凝結芽孢桿菌是一種美國FDA批準用于食品的益生菌，可定殖于腸道中并產生乳酸，同時由于其可產生芽孢，不良環境耐受性好，菌體在通過腸前消化道時可保持較高的存活率，是一種有重要價值的益生菌。但目前我國尚未批準用于食品中，相關研究較少。本文從土壤中篩選得到一株芽孢桿菌，經16s rDNA和生理生化鑒定，確定其為凝結芽孢桿菌，命名為Bacillus coagulans HXP-1。

材料與方法

1．樣品來源

廈門市菜地土壤。

2．培養基

篩選培養基(營養瓊脂，/L)：牛肉膏3g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，瓊脂15 g；pH 7.0-7.2。

富集培養基（kitahara&suzuki培養基,/L）[1]：葡萄糖20g，酵母提取物5g，蛋白胨5g，瓊脂15g。

發酵培養基（/L）：葡萄糖 120g，蛋白胨19g，NH4Cl 4g，（NH4）2HPO42g。

產芽孢培養基（TM培養基，/L）：酵母提取物1g，硫酸銨10g，肉浸膏5g，番茄汁200mL，α-甲基葡糖苷5g，CaCO320g；pH 5.5。

碳水化合物產酸培養基 （/L）：（NH4）2HPO41g，KCl 0.2g，MgSO40.2g，酵母提取物0.2g，瓊脂5g，溴百里酚藍（0.04g/100mL）20mL；碳水化合物1g。

V-P試驗培養基（/L）：蛋白胨 5g，葡萄糖 5g，K2HPO45g；pH 7.0-7.2。

CASO肉湯（/L）：胰蛋白胨 17g，大豆木瓜蛋白酶消化物 3g，氯化鈉 5g，磷酸二氫鉀 2.5g，葡萄糖2.5g，pH 7.3。

蛋白胨水培養基（/L）：蛋白胨 1g，NaCl 0.5g；pH 7.8。

DNA酶試驗培養基(/L)：酪朊水解物 15g，大豆蛋白胨5g，NaCl 5g，DNA 2g，甲苯胺藍0.1g，瓊脂15g。

3．菌種篩選

取1g土樣，加入10mL無菌富集培養基中，80℃處理30min后，于30℃厭氧培養，當培養液pH下降至4.0后，以生理鹽水稀釋至10-8，各稀釋度涂布篩選平板，平板密封后37℃培養，生成菌落后挑取菌落測定接觸酶和觀察生孢情況，取接觸酶陽性并產芽孢的菌落繼續純化。

4．菌種鑒定

由國家海洋局第三海洋研究所進行16s rDNA鑒定，生理生化鑒定依據《乳酸細菌分類鑒定及實驗方法》[2]《伯杰細菌鑒定手冊》[3]與《常見細菌系統鑒定手冊》[4]進行，乳酸檢測按照《食品添加劑乳酸（GB 2023-2003）》[5]進行?！?br>