頸痛舒口服液中葛根素含量測定方法的研究

許廣華 李小偉 韓雙

【摘要】目的：建立頸痛舒口服液中葛根素含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，以甲醇-水（27：73）為流動相：檢測波長：250nm;流速：10ml/min;柱溫：30℃。結果：葛根素在02808～2808μg范圍呈良好的線性關系，平均回收率976%，RSD=132（n=6）;結論：定量測定方法簡單、準確，重復性、穩(wěn)定性良好，精密度高，結果可靠，可作為頸痛舒口服液質量控制的方法，以提高該藥的質控水平，更好的發(fā)揮其臨床療效，更好地服務于病人。

【關鍵詞】高效液相色譜法;頸痛舒口服液;葛根素

【中圖分類號】R286【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）07-0013-02

Abstract：

Keywords：

葛根為豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根，為中風常用的祛風解毒藥之一，具有解肌，升陽透疹，解熱生津等功效[1]，制劑處方中主藥葛根的有效成分為葛根素、黃豆苷、黃豆苷元等黃酮類成分，其中葛根素的含量最高。頸痛舒口服液來自于我院推拿科主任、副主任醫(yī)師朱向陽的經驗方，在長期給予頸椎病患者治療過程中，除用推拿牽引等非藥物治療的同時服用頸痛舒口服液，以緩解病人因氣血不足，而引起的頭痛、頭暈、手臂麻木、酸痛、活動不利等癥狀。為了有效控制該藥品的質量，根據新藥審評有關規(guī)定，本文建立了測定頸痛舒口服液中葛根素含量的高效液相色譜法，結果分離度好、重現性好、靈敏度高，可作為控制頸痛舒口服液質量的方法[2]。

1儀器

北京普析L6-DP6型高效液相色譜儀（生產廠家：北京普析通用設備科技有限公司）;101-1A型數顯恒溫干燥箱（生產廠家：上海光地儀器設備有限公司）;AL-120型電子天平（生產廠家：瑞士梅特勒-托利多儀器公司）;ZF-2三用紫外儀（生產廠家：上海安亭儀器廠）;HS-180型超聲波清洗機（生產廠家：寧波海曙金蘭教儀科研究所）;GSY電熱恒溫水浴鍋（生產廠家：北京醫(yī)療器械廠）

2試藥

頸痛舒口服液（太和中醫(yī)院中藥制劑室，批號：20130105，20130203，20130305）;頸痛舒口服液陰性對照品三批（太和縣中醫(yī)院中藥制劑室）;葛根素對照品（中國藥品生物 ）。

色譜甲醇（生產廠家：安徽時聯特種溶劑股份有限公司）;水為新制純化水;其余試劑均為分析純。

3葛根素含量測定方法學

31色譜條件色譜柱：依利特 Hypersil ODS（46mm×250mm，5um）;流動相：甲醇-水（27∶73）;檢測波長：250nm;流速：10ml/min;柱溫：30℃;進樣量：20μl。理論塔板數按葛根素峰計應不低于4000，分離度大于15。

32對照品溶液的制備精密稱定葛根素對照品適量，加甲醇制成每ml含葛根素對照品50μg的溶液，即得。

33供試品溶液的制備[3]精密量取本品10ml，置50ml具塞錐形瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲處理（功率100W，頻率40kHz）30分鐘，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

34干擾試驗取按處方比例及生產工藝制備的不含葛根原藥材的頸痛舒口服液，按供試品溶液的制備同法制成陰性對照溶液，按上述色譜條件進行測定，結果表明，葛根素含量測定無干擾，色譜圖見圖1。

a葛根素對照品b供試品c缺葛根陰性樣品

圖1頸痛舒口服液HPLC色譜圖

35線性關系考察精密稱取葛根素對照品351 mg，置25 ml量瓶中，用30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密移取對照品溶液2，4，8，12 ，20μl，按上述色譜條件進樣測定，以對照品進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，得回歸方程y=33E+6 x-31256，R=09998。結果表明，葛根素在02808～2808μg范圍內線性關系良好。

36精密度試驗取葛根素對照品溶液，按上述色譜條件，重復進樣6次，測定峰面積，結果葛根素峰面積的RSD為087%。

37重復性試驗取同一批樣品6份，每份約10ml，按上述方法制成供試品溶液，按“221”項下色譜條件測定，計算葛根素含量。結果葛根素平均含量為352mg/ml，RSD為144%。

38穩(wěn)定性試驗取同一批供試品溶液，室溫下放置，按上述色譜條件，分別于配制后0，2，4，6，8，12 h 進樣測定，記錄葛根素峰面積，結果葛根素峰面積的RSD為126%。

39加樣回收率試驗[4-5]精密量取已知含量的樣品6份，每份約10ml，分別精密加入葛根素對照品適量，按上述方法制成供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算回收率。結果見表1。

表1葛根素加樣回收率試驗結果

序號樣品量

（ml）樣品中含

葛根素量（mg）加入葛根素

對照品量（mg）測得量

（mg）回收率

（%）平均回收率

（%）RSD

（%）110352353 701 9887210352355 702 9859310352374 718 9786410352371 716 98119760

132

510352366 706 9672610352374 709 9545

310樣品含量測定取3批樣品，按上述方法制成供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算含量。結果葛根素的含量分別為351，357，348mg/ml。

4結果與討論

41考察了甲醇-02%磷酸（體積比27∶73）、乙腈-水（體積比20∶80）、甲醇-水（體積比27∶73）、甲醇-01%磷酸（體積比75∶25）[6]等流動相，以甲醇水（體積比27∶73）的保留時間較為適宜，且分離度良好，其余幾種條件葛根素保留時間短，分離度差。

42對樣品超聲處理時間進行了考察，結果表明樣品超聲時間30min以上，被測組分含量不再增加，說明超聲時間30min即可，故將樣品處理的超聲時間定為30min。

43采用HPLC法測定頸痛舒口服液中葛根素的含量，操作簡便，結果準確可靠，重現性好，可用于頸痛舒口服液的質量控制、穩(wěn)定性考察和有效期，可為頸痛舒口服液的質量標準的建立提供依據。

參考文獻

[1]劉玉國，修彥鳳，劉玉紅.葛根及其制劑中葛根素的含量測定方法概述[J].基層中藥雜志，1999，13（1）：42-44.

[2]陸煒琨，曾芳，李媛.反相高效液相色譜法測定益氣降糖膠囊中葛根素的含量[J].廣州藥學學報，2008，26（5）：475-477.

[3]張雪榮，董小燕，索偉.HPLC法測定頸復康顆粒劑中葛根素的含量測定[J] .中國藥品標準，2002，16（6）：56-58.

[4]孫法麗，馬 毅，王春香. 高效液相色譜法測定葛瓜降糖膠囊中葛根素含量[J]. 藥物鑒定，2007，16（20）：33-34.

[5] 宿 潔，楊曉云，吳愛英. HPLC法測定天樂膠囊中的葛根素含量[J].中國臨床藥學雜志，2003，12（2）：94-95.

[6]劉必旺，李會芳，趙換，等. HPLC與TLC測定復方葛根膠囊中葛根素含量[J]. 中華中醫(yī)藥雜志，2007，26（4）：695-697.

（收稿日期：20140213）