沙梨新品種蘇翠1號(hào)組培快繁體系研究

藺經(jīng)+李曉剛+李慧+楊青松+王中華+常有宏

摘要：為了加快沙梨新品種蘇翠1號(hào)的繁殖過(guò)程，本試驗(yàn)以該品種的嫩梢作為外植體，建立了離體快繁技術(shù)體系。研究結(jié)果表明：蘇翠1號(hào)組培苗的適宜增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L，增值系數(shù)可達(dá)到5.6；在該培養(yǎng)基上繼代2次后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA1.5mg/L），誘導(dǎo)生根30d后移栽，植株于溫室生長(zhǎng)半年后即可用于嫁接，可極大縮短育苗時(shí)間。

關(guān)鍵詞：沙梨品種；培養(yǎng)基；激素；組織培養(yǎng)；快繁技術(shù)；移栽

中圖分類號(hào)：S661.204+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0066-02

梨為薔薇科（Rosacmeae）梨亞科（Romoideae）梨屬（Pyrus）多年生果樹(shù)，是中國(guó)四大水果之一。中國(guó)的梨產(chǎn)量和面積超過(guò)世界總量的60%，生產(chǎn)上主要的栽培種有白梨、沙梨、秋子梨、新疆梨和西洋梨[1-3]。長(zhǎng)江流域是中國(guó)沙梨優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)，發(fā)展早熟梨的經(jīng)濟(jì)效益顯著，目前主栽品種較少（翠冠、愛(ài)甘水、喜水等），迫切需要選育優(yōu)質(zhì)早熟沙梨品種，豐富生產(chǎn)多樣化的需求。江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所以早熟梨華酥為母本、翠冠為父本，選育出成熟早、品質(zhì)優(yōu)、外觀好的沙梨新品種蘇翠1號(hào)，該品種果面光潔，果形端正，肉質(zhì)細(xì)脆，豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)，具備良好的發(fā)展前景[4]。為加快品種繁育過(guò)程，推進(jìn)其在生產(chǎn)上的應(yīng)用，本研究以蘇翠1號(hào)嫩梢為材料，探討不同培養(yǎng)基及激素配比對(duì)蘇翠1號(hào)試管苗生長(zhǎng)的影響，并建立其離體快繁體系，旨在為大面積推廣該品種提供種苗。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

蘇翠1號(hào)嫩梢取自江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所梨種質(zhì)資源圃。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1初代培養(yǎng)蘇翠1號(hào)嫩梢于實(shí)驗(yàn)室剪去葉片，用洗滌劑輕輕刷洗枝條表面，流水沖洗3h，吸干表面水分后，在超凈工作臺(tái)上用75%乙醇消毒30s，再用0.1%氯化汞消毒8min，無(wú)菌水漂洗5次，接種到無(wú)激素添加的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行初代培養(yǎng)。

1.2.2增殖培養(yǎng)（1）不同激素配比對(duì)增殖的影響。初代培養(yǎng)后，以生長(zhǎng)一致的芽為增殖材料，MS為基本培養(yǎng)基，分別添加不同濃度的6-BA或NAA，進(jìn)行激素濃度篩選試驗(yàn)。（2）基本培養(yǎng)基的篩選。初代培養(yǎng)后，以生長(zhǎng)一致的芽為增殖材料，選用MS、1/2MS、AS、WPM等4種基本培養(yǎng)基，添加6-BA1.5mg/L和NAA0.2mg/L，進(jìn)行適宜培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)。

1.2.3組培苗生根切取長(zhǎng)約3cm的莖段為生根材料，轉(zhuǎn)入以1/2MS為基本培養(yǎng)基、添加不同濃度NAA或IBA的生根培養(yǎng)基中，30d后統(tǒng)計(jì)生根情況。

以上各階段的培養(yǎng)溫度均為（24±2）℃，光周期12h/d，光照度約為2500lx[5]。

1.2.4移栽及溫室管理待組培苗生根30d后進(jìn)行移栽，將瓶蓋揭開(kāi)煉苗3～5d，于流水下輕輕沖洗去除根部瓊脂，種植于含蛭石+珍珠巖（體積比為1∶1）基質(zhì)（預(yù)先用50%多菌靈可濕性粉劑500倍液殺菌）的穴盤(pán)中，每3d澆灌1/4MS大量元素母液。溫室內(nèi)保持20～26℃，遮陰網(wǎng)遮陰，覆膜保濕，逐漸撤膜，2周后完全揭膜。

1.3數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)用DPS軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1激素配比對(duì)蘇翠1號(hào)增殖的影響

選擇MS作為基本培養(yǎng)基，將初代培養(yǎng)獲得的生長(zhǎng)一致的蘇翠1號(hào)組培苗轉(zhuǎn)接至9個(gè)不同濃度的激素配比培養(yǎng)基中，每處理接種30個(gè)芽，重復(fù)3次，繼代4周后統(tǒng)計(jì)增殖情況。表1結(jié)果表明：不同處理對(duì)蘇翠1號(hào)組培苗的增殖影響很大。在NAA濃度不變的情況下，隨著6-BA濃度增大，蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)提高，當(dāng)6-BA為1.5mg/L時(shí)，各處理的增殖系數(shù)均在5.6以上。6-BA濃度為0.5mg/L或1.0mg/L時(shí)，隨著NAA濃度增大，蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)提高；6-BA濃度為1.5mg/L時(shí)，隨著NAA濃度增大，蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)先上升后下降。雖然添加6-BA1.5mg/L+NAA0.4mg/L處理的蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)最高（達(dá)7.8），但是部分組培苗表現(xiàn)出纖細(xì)、葉色泛黃的現(xiàn)象。綜合考慮不定芽的質(zhì)量和增殖系數(shù)，認(rèn)為MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L為蘇翠1號(hào)組培苗增殖的適宜培養(yǎng)基。

2.2不同基本培養(yǎng)基對(duì)蘇翠1號(hào)增殖的影響

6-BA1.5mg/L和NAA0.2mg/L的基本培養(yǎng)基中，每處理接種30個(gè)芽，重復(fù)3次，每4周繼代1次，繼代2次后，統(tǒng)計(jì)芽的增殖情況。由表2可知，不同培養(yǎng)基對(duì)蘇翠1號(hào)增殖情況存在顯著影響。擴(kuò)繁第1代時(shí)，組培苗在1/2MS培養(yǎng)基上增殖率最高（6.5），顯著高于其他3種培養(yǎng)基上的增殖系數(shù)（高出12.3%～18.5%），在WPM培養(yǎng)基上增殖率最低（5.3），并且在4種基本培養(yǎng)基上的蘇翠1號(hào)組培苗均未出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。增殖第2代，組培苗在MS培養(yǎng)基上增殖率最高（4.3），顯著高于其他3種培養(yǎng)基上的增殖系數(shù)（高出4.7%～16.3%），在1/2MS培養(yǎng)基上增殖率最低（3.6）。此外，組培苗在4種基本培養(yǎng)基上均出現(xiàn)不同程度的玻璃化現(xiàn)象，其中在MS培養(yǎng)基上的玻璃化程度最輕（玻璃化率僅為0.9%）。綜合考慮增殖2代的增殖率和玻璃化程度，將

培養(yǎng)基作為蘇翠1號(hào)組培苗擴(kuò)繁的適宜基本培養(yǎng)基。

2.3不同激素對(duì)蘇翠1號(hào)生根的影響

比較不同激素處理下蘇翠1號(hào)的生根狀況發(fā)現(xiàn)：IBA對(duì)其組培苗的生根效果優(yōu)于NAA（表3）。當(dāng)NAA濃度為0.5～2.0mg/L時(shí)，隨著其濃度的升高，誘導(dǎo)生根率也逐步升高，但最高生根率僅為17.2%，平均生根數(shù)為3.7條，須根無(wú)或很少，并且絕大部分組培苗的基部都有愈傷組織生成，給試管苗的移栽造成一定困難。在IBA誘導(dǎo)培養(yǎng)下，IBA濃度為1.5mg/L時(shí)生根率達(dá)到最高，為45.3%，平均生根數(shù)也最多（4.9條），并且須根較多，雖然有70%的生根組培苗基部同時(shí)也形成了愈傷組織，但是與NAA處理?xiàng)l件下相比，所形成的愈傷組織比較緊密且體積很小，對(duì)組培苗的移栽幾乎不存在影響。當(dāng)IBA濃度進(jìn)一步增加到2.0mg/L時(shí)，生根率有所下降，平均生根數(shù)只有3.6條，且愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到85%。綜合考慮不同激素處理?xiàng)l件下蘇翠1號(hào)組培苗的愈傷組織誘導(dǎo)狀況、生根率、生根數(shù)和生根狀態(tài)，可以認(rèn)為1/2MS+IBA1.5mg/L適宜作為蘇翠1號(hào)組培苗生根培養(yǎng)基。

2.4移栽

將在1/2MS+IBA1.5mg/L培養(yǎng)基上生根30d后的蘇翠1號(hào)組培苗進(jìn)行移栽，通過(guò)煉苗、基質(zhì)消毒、遮陰和覆膜等方法，能使植株成活率達(dá)到80%以上，移栽15d后可見(jiàn)新葉長(zhǎng)出，移栽3個(gè)月后可常規(guī)管理，半年后可收獲枝條用于嫁接繁苗。

3結(jié)論

為了加快沙梨新品種蘇翠1號(hào)的繁殖過(guò)程，本試驗(yàn)建立了其離體快繁技術(shù)體系：蘇翠1號(hào)經(jīng)過(guò)嫩梢初代培養(yǎng)獲得無(wú)菌芽，在MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L上繼代2次，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA1.5mg/L），誘導(dǎo)生根30d后移栽，植株于溫室生長(zhǎng)6個(gè)月后即可用于嫁接，極大地縮短了其育苗時(shí)間。在快速繁殖苗木過(guò)程中，組培苗生根數(shù)量的多少對(duì)苗木移栽馴化的成活率影響很大。有效生根苗的平均生根數(shù)≥3條，其成活率較高[6]。本試驗(yàn)中，蘇翠1號(hào)在1/2MS+IBA1.5mg/L生根培養(yǎng)基上的平均生根數(shù)為4.9條（表3），根系質(zhì)量較好，移栽后成活率在80%以上，6個(gè)月后可收獲枝條用于嫁接繁苗，可以快速地繁育優(yōu)良品種。

[HS3][HT8.5H]參考文獻(xiàn)：

[1]滕元文，柴明良，李秀根.梨屬植物分類的歷史回顧及新進(jìn)展[J].果樹(shù)學(xué)報(bào)，2004，21（3）：252-257.

[2]高源，田路明，劉鳳之，等.利用SSR熒光標(biāo)記構(gòu)建92個(gè)梨品種指紋圖譜[J].園藝學(xué)報(bào)，2012，39（8）：1437-1446.

[3]馮立娟，苑兆和，尹燕雷，等.國(guó)內(nèi)外梨研究態(tài)勢(shì)分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（12）：174-177.

[4]藺經(jīng)，盛寶龍，李曉剛，等.早熟砂梨新品種蘇翠1號(hào)[J].園藝學(xué)報(bào)，2013，40（9）：1849-1850.

[5]李曉剛，王宏偉，楊青松，等.豆梨低玻璃化組培快繁技術(shù)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（12）：54-56.

[6]陳宗禮，劉建玲，延志蓮，等.植物快繁中有效快繁速度與商品苗總產(chǎn)量的計(jì)算與控制[J].西北植物學(xué)報(bào)，1999，19（3）：422-427.

摘要：為了加快沙梨新品種蘇翠1號(hào)的繁殖過(guò)程，本試驗(yàn)以該品種的嫩梢作為外植體，建立了離體快繁技術(shù)體系。研究結(jié)果表明：蘇翠1號(hào)組培苗的適宜增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L，增值系數(shù)可達(dá)到5.6；在該培養(yǎng)基上繼代2次后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA1.5mg/L），誘導(dǎo)生根30d后移栽，植株于溫室生長(zhǎng)半年后即可用于嫁接，可極大縮短育苗時(shí)間。

關(guān)鍵詞：沙梨品種；培養(yǎng)基；激素；組織培養(yǎng)；快繁技術(shù)；移栽

中圖分類號(hào)：S661.204+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0066-02

梨為薔薇科（Rosacmeae）梨亞科（Romoideae）梨屬（Pyrus）多年生果樹(shù)，是中國(guó)四大水果之一。中國(guó)的梨產(chǎn)量和面積超過(guò)世界總量的60%，生產(chǎn)上主要的栽培種有白梨、沙梨、秋子梨、新疆梨和西洋梨[1-3]。長(zhǎng)江流域是中國(guó)沙梨優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)，發(fā)展早熟梨的經(jīng)濟(jì)效益顯著，目前主栽品種較少（翠冠、愛(ài)甘水、喜水等），迫切需要選育優(yōu)質(zhì)早熟沙梨品種，豐富生產(chǎn)多樣化的需求。江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所以早熟梨華酥為母本、翠冠為父本，選育出成熟早、品質(zhì)優(yōu)、外觀好的沙梨新品種蘇翠1號(hào)，該品種果面光潔，果形端正，肉質(zhì)細(xì)脆，豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)，具備良好的發(fā)展前景[4]。為加快品種繁育過(guò)程，推進(jìn)其在生產(chǎn)上的應(yīng)用，本研究以蘇翠1號(hào)嫩梢為材料，探討不同培養(yǎng)基及激素配比對(duì)蘇翠1號(hào)試管苗生長(zhǎng)的影響，并建立其離體快繁體系，旨在為大面積推廣該品種提供種苗。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

蘇翠1號(hào)嫩梢取自江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所梨種質(zhì)資源圃。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1初代培養(yǎng)蘇翠1號(hào)嫩梢于實(shí)驗(yàn)室剪去葉片，用洗滌劑輕輕刷洗枝條表面，流水沖洗3h，吸干表面水分后，在超凈工作臺(tái)上用75%乙醇消毒30s，再用0.1%氯化汞消毒8min，無(wú)菌水漂洗5次，接種到無(wú)激素添加的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行初代培養(yǎng)。

1.2.2增殖培養(yǎng)（1）不同激素配比對(duì)增殖的影響。初代培養(yǎng)后，以生長(zhǎng)一致的芽為增殖材料，MS為基本培養(yǎng)基，分別添加不同濃度的6-BA或NAA，進(jìn)行激素濃度篩選試驗(yàn)。（2）基本培養(yǎng)基的篩選。初代培養(yǎng)后，以生長(zhǎng)一致的芽為增殖材料，選用MS、1/2MS、AS、WPM等4種基本培養(yǎng)基，添加6-BA1.5mg/L和NAA0.2mg/L，進(jìn)行適宜培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)。

1.2.3組培苗生根切取長(zhǎng)約3cm的莖段為生根材料，轉(zhuǎn)入以1/2MS為基本培養(yǎng)基、添加不同濃度NAA或IBA的生根培養(yǎng)基中，30d后統(tǒng)計(jì)生根情況。

以上各階段的培養(yǎng)溫度均為（24±2）℃，光周期12h/d，光照度約為2500lx[5]。

1.2.4移栽及溫室管理待組培苗生根30d后進(jìn)行移栽，將瓶蓋揭開(kāi)煉苗3～5d，于流水下輕輕沖洗去除根部瓊脂，種植于含蛭石+珍珠巖（體積比為1∶1）基質(zhì)（預(yù)先用50%多菌靈可濕性粉劑500倍液殺菌）的穴盤(pán)中，每3d澆灌1/4MS大量元素母液。溫室內(nèi)保持20～26℃，遮陰網(wǎng)遮陰，覆膜保濕，逐漸撤膜，2周后完全揭膜。

1.3數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)用DPS軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1激素配比對(duì)蘇翠1號(hào)增殖的影響

選擇MS作為基本培養(yǎng)基，將初代培養(yǎng)獲得的生長(zhǎng)一致的蘇翠1號(hào)組培苗轉(zhuǎn)接至9個(gè)不同濃度的激素配比培養(yǎng)基中，每處理接種30個(gè)芽，重復(fù)3次，繼代4周后統(tǒng)計(jì)增殖情況。表1結(jié)果表明：不同處理對(duì)蘇翠1號(hào)組培苗的增殖影響很大。在NAA濃度不變的情況下，隨著6-BA濃度增大，蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)提高，當(dāng)6-BA為1.5mg/L時(shí)，各處理的增殖系數(shù)均在5.6以上。6-BA濃度為0.5mg/L或1.0mg/L時(shí)，隨著NAA濃度增大，蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)提高；6-BA濃度為1.5mg/L時(shí)，隨著NAA濃度增大，蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)先上升后下降。雖然添加6-BA1.5mg/L+NAA0.4mg/L處理的蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)最高（達(dá)7.8），但是部分組培苗表現(xiàn)出纖細(xì)、葉色泛黃的現(xiàn)象。綜合考慮不定芽的質(zhì)量和增殖系數(shù)，認(rèn)為MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L為蘇翠1號(hào)組培苗增殖的適宜培養(yǎng)基。

2.2不同基本培養(yǎng)基對(duì)蘇翠1號(hào)增殖的影響

6-BA1.5mg/L和NAA0.2mg/L的基本培養(yǎng)基中，每處理接種30個(gè)芽，重復(fù)3次，每4周繼代1次，繼代2次后，統(tǒng)計(jì)芽的增殖情況。由表2可知，不同培養(yǎng)基對(duì)蘇翠1號(hào)增殖情況存在顯著影響。擴(kuò)繁第1代時(shí)，組培苗在1/2MS培養(yǎng)基上增殖率最高（6.5），顯著高于其他3種培養(yǎng)基上的增殖系數(shù)（高出12.3%～18.5%），在WPM培養(yǎng)基上增殖率最低（5.3），并且在4種基本培養(yǎng)基上的蘇翠1號(hào)組培苗均未出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。增殖第2代，組培苗在MS培養(yǎng)基上增殖率最高（4.3），顯著高于其他3種培養(yǎng)基上的增殖系數(shù)（高出4.7%～16.3%），在1/2MS培養(yǎng)基上增殖率最低（3.6）。此外，組培苗在4種基本培養(yǎng)基上均出現(xiàn)不同程度的玻璃化現(xiàn)象，其中在MS培養(yǎng)基上的玻璃化程度最輕（玻璃化率僅為0.9%）。綜合考慮增殖2代的增殖率和玻璃化程度，將

培養(yǎng)基作為蘇翠1號(hào)組培苗擴(kuò)繁的適宜基本培養(yǎng)基。

2.3不同激素對(duì)蘇翠1號(hào)生根的影響

比較不同激素處理下蘇翠1號(hào)的生根狀況發(fā)現(xiàn)：IBA對(duì)其組培苗的生根效果優(yōu)于NAA（表3）。當(dāng)NAA濃度為0.5～2.0mg/L時(shí)，隨著其濃度的升高，誘導(dǎo)生根率也逐步升高，但最高生根率僅為17.2%，平均生根數(shù)為3.7條，須根無(wú)或很少，并且絕大部分組培苗的基部都有愈傷組織生成，給試管苗的移栽造成一定困難。在IBA誘導(dǎo)培養(yǎng)下，IBA濃度為1.5mg/L時(shí)生根率達(dá)到最高，為45.3%，平均生根數(shù)也最多（4.9條），并且須根較多，雖然有70%的生根組培苗基部同時(shí)也形成了愈傷組織，但是與NAA處理?xiàng)l件下相比，所形成的愈傷組織比較緊密且體積很小，對(duì)組培苗的移栽幾乎不存在影響。當(dāng)IBA濃度進(jìn)一步增加到2.0mg/L時(shí)，生根率有所下降，平均生根數(shù)只有3.6條，且愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到85%。綜合考慮不同激素處理?xiàng)l件下蘇翠1號(hào)組培苗的愈傷組織誘導(dǎo)狀況、生根率、生根數(shù)和生根狀態(tài)，可以認(rèn)為1/2MS+IBA1.5mg/L適宜作為蘇翠1號(hào)組培苗生根培養(yǎng)基。

2.4移栽

將在1/2MS+IBA1.5mg/L培養(yǎng)基上生根30d后的蘇翠1號(hào)組培苗進(jìn)行移栽，通過(guò)煉苗、基質(zhì)消毒、遮陰和覆膜等方法，能使植株成活率達(dá)到80%以上，移栽15d后可見(jiàn)新葉長(zhǎng)出，移栽3個(gè)月后可常規(guī)管理，半年后可收獲枝條用于嫁接繁苗。

3結(jié)論

為了加快沙梨新品種蘇翠1號(hào)的繁殖過(guò)程，本試驗(yàn)建立了其離體快繁技術(shù)體系：蘇翠1號(hào)經(jīng)過(guò)嫩梢初代培養(yǎng)獲得無(wú)菌芽，在MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L上繼代2次，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA1.5mg/L），誘導(dǎo)生根30d后移栽，植株于溫室生長(zhǎng)6個(gè)月后即可用于嫁接，極大地縮短了其育苗時(shí)間。在快速繁殖苗木過(guò)程中，組培苗生根數(shù)量的多少對(duì)苗木移栽馴化的成活率影響很大。有效生根苗的平均生根數(shù)≥3條，其成活率較高[6]。本試驗(yàn)中，蘇翠1號(hào)在1/2MS+IBA1.5mg/L生根培養(yǎng)基上的平均生根數(shù)為4.9條（表3），根系質(zhì)量較好，移栽后成活率在80%以上，6個(gè)月后可收獲枝條用于嫁接繁苗，可以快速地繁育優(yōu)良品種。

[HS3][HT8.5H]參考文獻(xiàn)：

[1]滕元文，柴明良，李秀根.梨屬植物分類的歷史回顧及新進(jìn)展[J].果樹(shù)學(xué)報(bào)，2004，21（3）：252-257.

[2]高源，田路明，劉鳳之，等.利用SSR熒光標(biāo)記構(gòu)建92個(gè)梨品種指紋圖譜[J].園藝學(xué)報(bào)，2012，39（8）：1437-1446.

[3]馮立娟，苑兆和，尹燕雷，等.國(guó)內(nèi)外梨研究態(tài)勢(shì)分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（12）：174-177.

[4]藺經(jīng)，盛寶龍，李曉剛，等.早熟砂梨新品種蘇翠1號(hào)[J].園藝學(xué)報(bào)，2013，40（9）：1849-1850.

[5]李曉剛，王宏偉，楊青松，等.豆梨低玻璃化組培快繁技術(shù)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（12）：54-56.

[6]陳宗禮，劉建玲，延志蓮，等.植物快繁中有效快繁速度與商品苗總產(chǎn)量的計(jì)算與控制[J].西北植物學(xué)報(bào)，1999，19（3）：422-427.

摘要：為了加快沙梨新品種蘇翠1號(hào)的繁殖過(guò)程，本試驗(yàn)以該品種的嫩梢作為外植體，建立了離體快繁技術(shù)體系。研究結(jié)果表明：蘇翠1號(hào)組培苗的適宜增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L，增值系數(shù)可達(dá)到5.6；在該培養(yǎng)基上繼代2次后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA1.5mg/L），誘導(dǎo)生根30d后移栽，植株于溫室生長(zhǎng)半年后即可用于嫁接，可極大縮短育苗時(shí)間。

關(guān)鍵詞：沙梨品種；培養(yǎng)基；激素；組織培養(yǎng)；快繁技術(shù)；移栽

中圖分類號(hào)：S661.204+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0066-02

梨為薔薇科（Rosacmeae）梨亞科（Romoideae）梨屬（Pyrus）多年生果樹(shù)，是中國(guó)四大水果之一。中國(guó)的梨產(chǎn)量和面積超過(guò)世界總量的60%，生產(chǎn)上主要的栽培種有白梨、沙梨、秋子梨、新疆梨和西洋梨[1-3]。長(zhǎng)江流域是中國(guó)沙梨優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)，發(fā)展早熟梨的經(jīng)濟(jì)效益顯著，目前主栽品種較少（翠冠、愛(ài)甘水、喜水等），迫切需要選育優(yōu)質(zhì)早熟沙梨品種，豐富生產(chǎn)多樣化的需求。江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所以早熟梨華酥為母本、翠冠為父本，選育出成熟早、品質(zhì)優(yōu)、外觀好的沙梨新品種蘇翠1號(hào)，該品種果面光潔，果形端正，肉質(zhì)細(xì)脆，豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)，具備良好的發(fā)展前景[4]。為加快品種繁育過(guò)程，推進(jìn)其在生產(chǎn)上的應(yīng)用，本研究以蘇翠1號(hào)嫩梢為材料，探討不同培養(yǎng)基及激素配比對(duì)蘇翠1號(hào)試管苗生長(zhǎng)的影響，并建立其離體快繁體系，旨在為大面積推廣該品種提供種苗。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

蘇翠1號(hào)嫩梢取自江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所梨種質(zhì)資源圃。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1初代培養(yǎng)蘇翠1號(hào)嫩梢于實(shí)驗(yàn)室剪去葉片，用洗滌劑輕輕刷洗枝條表面，流水沖洗3h，吸干表面水分后，在超凈工作臺(tái)上用75%乙醇消毒30s，再用0.1%氯化汞消毒8min，無(wú)菌水漂洗5次，接種到無(wú)激素添加的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行初代培養(yǎng)。

1.2.2增殖培養(yǎng)（1）不同激素配比對(duì)增殖的影響。初代培養(yǎng)后，以生長(zhǎng)一致的芽為增殖材料，MS為基本培養(yǎng)基，分別添加不同濃度的6-BA或NAA，進(jìn)行激素濃度篩選試驗(yàn)。（2）基本培養(yǎng)基的篩選。初代培養(yǎng)后，以生長(zhǎng)一致的芽為增殖材料，選用MS、1/2MS、AS、WPM等4種基本培養(yǎng)基，添加6-BA1.5mg/L和NAA0.2mg/L，進(jìn)行適宜培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)。

1.2.3組培苗生根切取長(zhǎng)約3cm的莖段為生根材料，轉(zhuǎn)入以1/2MS為基本培養(yǎng)基、添加不同濃度NAA或IBA的生根培養(yǎng)基中，30d后統(tǒng)計(jì)生根情況。

以上各階段的培養(yǎng)溫度均為（24±2）℃，光周期12h/d，光照度約為2500lx[5]。

1.2.4移栽及溫室管理待組培苗生根30d后進(jìn)行移栽，將瓶蓋揭開(kāi)煉苗3～5d，于流水下輕輕沖洗去除根部瓊脂，種植于含蛭石+珍珠巖（體積比為1∶1）基質(zhì)（預(yù)先用50%多菌靈可濕性粉劑500倍液殺菌）的穴盤(pán)中，每3d澆灌1/4MS大量元素母液。溫室內(nèi)保持20～26℃，遮陰網(wǎng)遮陰，覆膜保濕，逐漸撤膜，2周后完全揭膜。

1.3數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)用DPS軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1激素配比對(duì)蘇翠1號(hào)增殖的影響

選擇MS作為基本培養(yǎng)基，將初代培養(yǎng)獲得的生長(zhǎng)一致的蘇翠1號(hào)組培苗轉(zhuǎn)接至9個(gè)不同濃度的激素配比培養(yǎng)基中，每處理接種30個(gè)芽，重復(fù)3次，繼代4周后統(tǒng)計(jì)增殖情況。表1結(jié)果表明：不同處理對(duì)蘇翠1號(hào)組培苗的增殖影響很大。在NAA濃度不變的情況下，隨著6-BA濃度增大，蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)提高，當(dāng)6-BA為1.5mg/L時(shí)，各處理的增殖系數(shù)均在5.6以上。6-BA濃度為0.5mg/L或1.0mg/L時(shí)，隨著NAA濃度增大，蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)提高；6-BA濃度為1.5mg/L時(shí)，隨著NAA濃度增大，蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)先上升后下降。雖然添加6-BA1.5mg/L+NAA0.4mg/L處理的蘇翠1號(hào)組培苗增殖系數(shù)最高（達(dá)7.8），但是部分組培苗表現(xiàn)出纖細(xì)、葉色泛黃的現(xiàn)象。綜合考慮不定芽的質(zhì)量和增殖系數(shù)，認(rèn)為MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L為蘇翠1號(hào)組培苗增殖的適宜培養(yǎng)基。

2.2不同基本培養(yǎng)基對(duì)蘇翠1號(hào)增殖的影響

6-BA1.5mg/L和NAA0.2mg/L的基本培養(yǎng)基中，每處理接種30個(gè)芽，重復(fù)3次，每4周繼代1次，繼代2次后，統(tǒng)計(jì)芽的增殖情況。由表2可知，不同培養(yǎng)基對(duì)蘇翠1號(hào)增殖情況存在顯著影響。擴(kuò)繁第1代時(shí)，組培苗在1/2MS培養(yǎng)基上增殖率最高（6.5），顯著高于其他3種培養(yǎng)基上的增殖系數(shù)（高出12.3%～18.5%），在WPM培養(yǎng)基上增殖率最低（5.3），并且在4種基本培養(yǎng)基上的蘇翠1號(hào)組培苗均未出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。增殖第2代，組培苗在MS培養(yǎng)基上增殖率最高（4.3），顯著高于其他3種培養(yǎng)基上的增殖系數(shù)（高出4.7%～16.3%），在1/2MS培養(yǎng)基上增殖率最低（3.6）。此外，組培苗在4種基本培養(yǎng)基上均出現(xiàn)不同程度的玻璃化現(xiàn)象，其中在MS培養(yǎng)基上的玻璃化程度最輕（玻璃化率僅為0.9%）。綜合考慮增殖2代的增殖率和玻璃化程度，將

培養(yǎng)基作為蘇翠1號(hào)組培苗擴(kuò)繁的適宜基本培養(yǎng)基。

2.3不同激素對(duì)蘇翠1號(hào)生根的影響

比較不同激素處理下蘇翠1號(hào)的生根狀況發(fā)現(xiàn)：IBA對(duì)其組培苗的生根效果優(yōu)于NAA（表3）。當(dāng)NAA濃度為0.5～2.0mg/L時(shí)，隨著其濃度的升高，誘導(dǎo)生根率也逐步升高，但最高生根率僅為17.2%，平均生根數(shù)為3.7條，須根無(wú)或很少，并且絕大部分組培苗的基部都有愈傷組織生成，給試管苗的移栽造成一定困難。在IBA誘導(dǎo)培養(yǎng)下，IBA濃度為1.5mg/L時(shí)生根率達(dá)到最高，為45.3%，平均生根數(shù)也最多（4.9條），并且須根較多，雖然有70%的生根組培苗基部同時(shí)也形成了愈傷組織，但是與NAA處理?xiàng)l件下相比，所形成的愈傷組織比較緊密且體積很小，對(duì)組培苗的移栽幾乎不存在影響。當(dāng)IBA濃度進(jìn)一步增加到2.0mg/L時(shí)，生根率有所下降，平均生根數(shù)只有3.6條，且愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到85%。綜合考慮不同激素處理?xiàng)l件下蘇翠1號(hào)組培苗的愈傷組織誘導(dǎo)狀況、生根率、生根數(shù)和生根狀態(tài)，可以認(rèn)為1/2MS+IBA1.5mg/L適宜作為蘇翠1號(hào)組培苗生根培養(yǎng)基。

2.4移栽

將在1/2MS+IBA1.5mg/L培養(yǎng)基上生根30d后的蘇翠1號(hào)組培苗進(jìn)行移栽，通過(guò)煉苗、基質(zhì)消毒、遮陰和覆膜等方法，能使植株成活率達(dá)到80%以上，移栽15d后可見(jiàn)新葉長(zhǎng)出，移栽3個(gè)月后可常規(guī)管理，半年后可收獲枝條用于嫁接繁苗。

3結(jié)論

為了加快沙梨新品種蘇翠1號(hào)的繁殖過(guò)程，本試驗(yàn)建立了其離體快繁技術(shù)體系：蘇翠1號(hào)經(jīng)過(guò)嫩梢初代培養(yǎng)獲得無(wú)菌芽，在MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L上繼代2次，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA1.5mg/L），誘導(dǎo)生根30d后移栽，植株于溫室生長(zhǎng)6個(gè)月后即可用于嫁接，極大地縮短了其育苗時(shí)間。在快速繁殖苗木過(guò)程中，組培苗生根數(shù)量的多少對(duì)苗木移栽馴化的成活率影響很大。有效生根苗的平均生根數(shù)≥3條，其成活率較高[6]。本試驗(yàn)中，蘇翠1號(hào)在1/2MS+IBA1.5mg/L生根培養(yǎng)基上的平均生根數(shù)為4.9條（表3），根系質(zhì)量較好，移栽后成活率在80%以上，6個(gè)月后可收獲枝條用于嫁接繁苗，可以快速地繁育優(yōu)良品種。

[HS3][HT8.5H]參考文獻(xiàn)：

[1]滕元文，柴明良，李秀根.梨屬植物分類的歷史回顧及新進(jìn)展[J].果樹(shù)學(xué)報(bào)，2004，21（3）：252-257.

[2]高源，田路明，劉鳳之，等.利用SSR熒光標(biāo)記構(gòu)建92個(gè)梨品種指紋圖譜[J].園藝學(xué)報(bào)，2012，39（8）：1437-1446.

[3]馮立娟，苑兆和，尹燕雷，等.國(guó)內(nèi)外梨研究態(tài)勢(shì)分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（12）：174-177.

[4]藺經(jīng)，盛寶龍，李曉剛，等.早熟砂梨新品種蘇翠1號(hào)[J].園藝學(xué)報(bào)，2013，40（9）：1849-1850.

[5]李曉剛，王宏偉，楊青松，等.豆梨低玻璃化組培快繁技術(shù)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（12）：54-56.

[6]陳宗禮，劉建玲，延志蓮，等.植物快繁中有效快繁速度與商品苗總產(chǎn)量的計(jì)算與控制[J].西北植物學(xué)報(bào)，1999，19（3）：422-427.